液相色譜串聯質譜法同時測定白酒中

吳宏萍 魏云 楊紅文

摘要：建立了同時測定白酒中四種甜味劑（安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜）的液相色譜-串聯質譜（LC-MS-MS）分析方法，采用Poroshell 120 EC-C18柱，以含0.1%甲酸的水-甲醇為流動相進行梯度洗脫，流速0.4mL/min，在電噴霧電離（ESI）負離子模式下，采用多重反應監測模式進行檢測，線性范圍均在5～100?g /L；安賽蜜檢出限為1?g /L，糖精鈉檢出限為 1?g /L，甜蜜素檢出限為1?g /L，阿斯巴甜檢出限為1?g /L。四種成分的加標回收率為89～102%，相對標準偏差均不大于2.5%。該法快捷、準確、重現性好。

關鍵詞：液相色譜-串聯質譜（LC-MS-MS）；白酒；安賽蜜；糖精鈉；甜蜜素；阿斯巴甜

中圖分類號：Q81 文獻標識碼：A 文章編號：1672-4437（2014）02-0060-04

中國白酒歷史悠久，它與威士忌、伏特加、白蘭地、朗姆酒、金酒并稱為世界六大蒸餾酒。中國白酒以糧谷為主要原料，以大曲、小曲等為糖化發酵劑，經蒸煮、糖化、發酵、蒸餾而制成[1]。其工藝精良、風味獨特，深受廣大消費者喜愛。甜味對白酒的風味起著很大的作用。現代研究表明，優質發酵生產白酒之所以具有醇甜感，是由于白酒本身含有一定的多元醇或酮等甜味物質，如2，3-丁二醇、丙三醇、雙乙酞等。保持適度甜味的白酒，可以給人以甘醇、綿甜的愉悅感。近年來為適應新的消費需求，增加白酒的甜味、回甜感 ，添加甜味劑成為了眾多白酒企業競相研究的課題。甜味劑是一類重要的食品添加劑，它賦予食品以甜味，可以改善食品口感，提高食品的品質。目前，廣泛應用的人工合成甜味劑主要包括甜蜜素、阿斯巴甜、糖精鈉、安賽蜜等。我國只允許在配制酒中添加少量甜蜜素、三氯蔗糖、糖精鈉等甜味劑，研究表明，攝入高劑量的甜味劑會對人體的肝臟和神經系統造成傷害，甚至引發癌癥，因此人工合成甜味劑的合理使用不僅關系到產品的品質，更關系到消費者的健康、安全。我國強制性國家標準規定，禁止在發酵酒中添加甜味劑。各香型白酒國家標準中也規定，優級、一級、二級均不得加入非自身發酵物質。

目前，已建立的測定甜味劑的方法很多，包括高效液相色譜法-紫外檢測法、毛細管氣相色譜法、超高壓液相色譜-蒸發光散射檢測法、紫外分光光度法，但這些方法都不適合白酒中多種甜味劑的檢測，這些方法存在著檢出限不能滿足檢測要求 、易出現假陽性等問題，不能滿足白酒中甜味劑的檢測要求。

本研究運用LC-MS-MS方法對白酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜同時進行測定，可對白酒中多種痕量甜味劑含量進行監控，有利于提高白酒整體質量控制水平，保障白酒的食品質量和安全。

1 實驗部分

1.1儀器與試劑

Agilent 1260 Infinity LC System， Agilent 6460 Triple Quad LC/MS（美國，Agilent 公司）；Milli-Q超純水裝置（美國，Millipore公司）；AL204電子天平（上海梅特勒錯誤！未找到引用源。SK2200HP型數控超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）

甲醇（色譜純，Fisher公司）；甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜均購自德國Dr.Ehrenstorfer 公司，實驗室用水為超純水。

1.2 溶液配制

標準儲備液：精確稱取四種標準品各0.1g，分別用超純水溶解并定容至100mL容量瓶中，配成質量濃度為1000mg/L的各標準品單標儲備液，于0～4℃下保存。

標準工作液：準確移取一定體積的安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜的單標儲備液混合于容量瓶中，用PH4.3的水（用乙酸調節PH為4.3）定容，逐級稀釋成質量濃度范圍為5～100?g /L系列的混合標準工作溶液。

1.3 樣品前處理

準確吸取白酒樣品2mL，過0.22?m濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀分析

1.4 色譜條件

采用Agilent Poroshell 120 EC-C18色譜柱（50mmx3.0mm，2.7?m）；以0.1%甲酸的水（A）-甲醇（B）為流動相進行梯度洗脫，梯度洗脫程序：0～2min，10%B～60%B；2～5min，60%B～10%B；流速為0.4mL/min；進樣量為5?L。

1.5 質譜條件

離子源為電噴霧電離源（ESI），采用負離子檢測模式。干燥氣：N2，溫度為325℃，流速為8L/min；霧化氣：N2，霧化器壓力為3.1x105Pa，毛細管電壓為4000V。采用多重反應監測模式，四種目標組分的其他質譜分析參數見表1。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的優化

對常用流動相水-甲醇和水.-乙腈進行了考察，實驗結果表明使用水-甲醇體系作流動相時靈敏度高于水-乙腈體系，色譜峰形對稱，且分離效果更好。

2.2 質譜條件的優化

實驗條件下采用負離子模式檢測各物質，采用MRM模式，以不同的碰撞能量將待測物的準分子離子打碎，以子離子響應最強時的參數來確定碰撞能量和裂解電壓。

2.3 色譜與質譜行為

在選定的色譜—質譜條件下，被測組分間可獲得良好的分離，色譜圖見圖1.根據峰的保留時間及質譜信息進行定性。

2.4線性關系及檢出限

取各標準品儲備液，精確配置一系列不同質量濃度的混合標準液，于優化后的條件下分別進樣測定，重復3次，以各物質特征碎片離子（定量離子）峰面積的平均值（Y）對被測組分的質量濃度（X，?g /L）進行線性回歸，得到回歸方程、相關系數和線性范圍；以信噪比（S/N）為3確定4種待測組分的檢出限；結果為表2。

2.5精密度和回收率實驗

取不含4種人工合成甜味劑的白酒樣品6份，分別向其中添加50?g/L、100?g/L、200?g /L的3種不同濃度水平的混合標準溶液，按照以上實驗條件進行測定，每個添加水平進行6次重復實驗，分別計算4種物質的回收率，結果見表3。本方法在3個濃度添加水平下，4種成分的加標回收率在89%～102%，RSD均小于或等于2.5%，能滿足測定要求。

2.6 樣品分析

按照上述優化好的條件對市售的8種白酒進行檢測，檢測結果見表4。實驗結果表明，該方法能滿足白酒中四種甜味劑的同時檢測。

3. 結論

本文研究了高效液相色譜-串聯質譜法同時測定白酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜四種甜味劑含量的方法。實驗結果表明，該方法具有簡便、快捷、準確、靈敏和定性能力強的特點

————————

參考文獻：

[1] 國家質量監督檢驗檢疫總局CCJF103.1-2010產品質量監督抽查實施規范 白酒[S]. 北京：中國標準出版社，2011.

[2] 張小芳.白酒中甜味劑測定方法的研究進展[J].四川化工，2011（5）：32-34

[3] SN/T 1948-2007.進出口食品中環己基氨基磺酸鈉的檢測方法液相色譜-質譜/質譜法[S].

[4] GB/T5009.97-2003.食品中環己基氨基磺酸鈉的測定[S].

[5] GB/T5009.28-2003.食品中糖精鈉的測定[S].

[6] 王俊.食品發酵與工業[J].HPLC/MS測定白酒中的微量甜味劑，2007，33（10）：152-153.