不同品種棗果實多糖含量分析

石浩 王仁才 龐 立 仇振華 曾鄒林 劉吉凱

（1.湖南農業大學園藝園林學院，湖南長沙 410128；2.湖南玖一玉泉科技實業有限公司，湖南衡陽 421001）お

摘要

［目的］分析不同品種棗果實多糖含量，篩選多糖含量高的棗果資源，促進棗果資源的綜合開發利用。［方法］以雞蛋棗、糖棗、藥棗、長棗等16個湖南主要地方棗品種為試材，經硫酸-苯酚法對不同品種棗果實多糖含量進行了分析測定。［結果］分析表明，不同棗品種間最高與最低多糖含量相差達3.9倍，其中以小米棗和子代糖棗多糖含量最高，分別達9.75%、9.06%；母本糖棗、酸元棗、藥棗、長棗、玉泉八號和南方冬棗次之，多糖含量分別為8.82%、6.20%、5.89%、5.56%、5.54%、5.23%；而光皮棗多糖含量最低，僅為2.45%。不同棗品種間多糖含量差異較大。［結論］研究顯示，苯酚-硫酸法較為穩定，正確率和精密度高，重現性好，可作為棗多糖含量的測定方法；同時，棗具有很高的多糖加工利用價值，值得開發利用。

關鍵詞棗；品種；多糖 ；硫酸-苯酚法

中圖分類號 SB665.1文獻標識碼 A文章編號 0517-6611（2014）19-06370-03

お

Analysis of Polysaccharide in Fruits of Different Jujube Varieties

SHI Hao, WANG Ren瞔ai et al

(College of Horticulture and Landscape, Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan 410128)

Abstract ［Objective］ To analyze polysaccharide content in different varieties of jujube fruit, screen out jujube fruit resources with high polysaccharide content and promote the comprehensive development and utilization. ［Method］ Taking Hunan local variety egg jujube, candied jujube, medicinal jujube, long jujube etc.16 kinds of jujube cultivars as materials, the polysaccharide content in different jujube cultivars were determined by sulfuric acid瞤henol method. ［Result］ The highest and the lowest polysaccharide content in different varieties of jujube fruit reach 3.9 times, among which, millet jujube and filial generation candied jujube has the highest polysaccharide content of 9.75%, 9.06% respectively; The secondly were the female candied jujube, acid yuan jujube, medicinal jujube, long jujube, Yuquan No.8 and southern Dongzao, respectively, 8.82%, 6.20%, 5.89%, 5.56%, 5.54%, 5.23%, and the light skin jujube content is the lowest, only 2.45%. The polysaccharide content in different varieties of jujube fruit has significant differences. ［Conclusion］ The study showed that, sulfuric acid瞤henol method is stable with high accuracy, precision and good reproducibility, which can be used for determination of polysaccharide content in jujube; meanwhile, jujube has higher polysaccharide processing and utilization value, and is worthy of development.

Key wordsJujube; Varieties; Polysaccharide; Sulfuric acid瞤henol method

基金項目 湖南省2013年學位與研究生教育專項資金項目（CX2013睟294）；湖南省科技計劃重點項目（2011NK4042）；湖南省自然科學基金委員會與衡陽市政府自然科學聯合基金項目（13JJ8010）。

作者簡介

石浩（1988-），男，湖南常德人，碩士研究生，研究方向：藥用植物資源高值化利用技術。*通訊作者，教授，博士生導師，從事藥用植物資源工程研究。

收稿日期 20140508

棗樹(玓izyphus jujube 玀ill)為鼠李科棗屬木本植物，在我國已有4 000多年的種植歷史。棗樹為我國的特產果樹，種植面積和總產量占全世界的90％以上［1-3］。湖南地區棗種植具有悠久的歷史，棗資源豐富，品種繁多，分布范圍廣，充分利用地方棗品種資源，發展南方棗業對于促進湖南農業經濟發展具有重要意義。

棗果又名紅棗，營養豐富，用途廣泛，食療價值高，是上等的滋補食品，發展前景十分廣闊。棗不僅是滋補佳品，而且也是一味傳統的中藥，因富含營養和保健成分而享譽中外，為我國傳統藥食兼用果品［4］。棗果中含有豐富的生物活性物質，如多糖、環磷酸腺苷(cAMP)、黃酮類、有機酸、三萜類、環磷酸腺苷、維生素、微量元素等［5-7］。

多糖是由多個單糖基及糖苷鍵相連接而成的高聚物，一般是20個以上的單糖聚合而成，廣泛存在于動物細胞膜、高等植物和微生物的細胞壁中，是構成生命的四大基本物質之一，同維持生命活動密切相關［8］。多糖類化合物是中草藥的有效成分之一，具有多種生物活性。棗果含有豐富的棗多糖，現代藥理研究表明，大棗多糖具有明顯的抗補體活性和促進淋巴細胞的增殖功能，具有養心安神、緩和藥性、補氣養血、健脾益胃、保肝、抗氧化、抗衰老、提高抗體免疫力等功效［9-12］。

1材料與方法

1.1 材料

供試材料為湖南玖一玉泉科技實業有限公司種植的玉泉8號棗、南方冬棗和子代糖棗，以及湖南省衡陽市衡南縣與祁東縣采集的方頭棗、小米棗、大米棗、母本糖棗、長棗、光皮棗、雞蛋棗、藥棗、酸棗、酸元棗、軍棗、牛奶棗、瓜棗13種地方棗品種，共16個棗品種果實。

主要儀器：ZW1105051705紫外可見分光光度計，上海光譜儀器有限公司；SB3200D超聲波清洗機，寧波新芝生物科技股份有限公司；AUW220D電子天平，日本shimadzu公司；DR1001旋轉蒸發儀，鄭州長城科工貿有限公司。

主要試劑：無水葡萄糖對照品、無水乙醇、丙酮、正丁醇、氯仿、98%濃硫酸、苯酚，均為國藥集團化學試劑有限公司，色譜純。

1.2棗多糖含量測定方法的確定

1.2.1

供試品溶液的制備。

轉紅期鮮棗經65 ℃干燥至恒重，粉碎過70目篩，精確稱取棗粉10 g裝入250 ml錐形瓶中同時加150 ml蒸餾水，60 ℃水浴超聲提取3次，每次15 min。抽濾棄去藥渣，合并濾液，60 ℃減壓蒸餾，濾液旋轉蒸發約15 ml體積后，用100 ml無水乙醇萃取，靜置2 h后過濾，65 ℃水浴干燥至恒重；稱重計算多糖粗提物質量。粗多糖用20ml丙酮洗滌多次， 50 ml蒸餾水溶解。以多糖水溶液1/3體積加入Sevag試劑（氯仿∶正丁醇=4∶1）混合振蕩20 min后靜置15 min，除去水層與溶劑交界處的變性蛋白質，重復多次直至除盡，定容至100ml容量瓶中，取1ml置100ml容量瓶中定容，即得。

1.2.2

對照品溶液的制備。精密稱取經105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品10 mg，置100ml量瓶中，加蒸餾水溶解并定容，即得100 μg/ml葡萄糖標準液。

1.2.3

測定波長的確定。精密量取葡萄糖標準溶液1 ml于20 ml玻璃試管中，加入5%苯酚溶液1 ml，迅速加入濃硫酸5 ml，搖勻，常溫靜置20 min后沸水浴3 min，取出后室溫放置30 min，各試管中補加蒸餾水3 ml，在400~600 nm波長范圍用紫外可見分光光度計全波長掃描。經測定，溶液在490 nm處有最大吸收峰。

1.2.4

線性關系考察。分別精密量取0.15、0.30、0.45、0.60、0.75、1.00 ml對照品溶液于6只20 ml玻璃試管中，加入5%苯酚溶液1 ml，并迅速加入濃硫酸5 ml，搖勻，常溫靜置20 min后沸水浴3min，取出后迅速冷卻至室溫，各試管中補加蒸餾水3 ml，在波長490 nm處測定吸光度。精密量取蒸餾水1ml同上述操作，作為空白對照。以濃度獵對吸光度A作線性圖。

1.2.5

精密度試驗。不同檢測人員，按照“1.2.3”項方法測定供試液吸光度；精密吸取多糖供試品溶液6份，每份1.0 ml，測定出吸光度，計算玆SD值考察試驗精密度。

1.2.6

重復性試驗。精密稱取棗粉10 g，共6份，按照“1.2.1”項供試液的制備方法，再按“1.2.3”項的顯色方法測定吸光度，計算玆SD值考察試驗重復性。

1.2.7

穩定性試驗。精密吸取多糖供試品溶液1.0 ml，按照“1.2.3”項方法顯色后，每隔30 min測定一次吸光度，連續6次，觀察硫酸-苯酚法對多糖顯色效果的穩定性，測定出吸光度，計算玆SD值考察試驗穩定性。

1.2.8

加樣回收率試驗。精密吸取40 μg/ml的多糖供試品溶液0.5 ml，共6份，精密加入0.5 ml(10、30、50、70、90、100 μg/ml)的葡萄糖對照品溶液，搖勻后按照“1.2.3”項方法顯色，測定多糖含量，計算玆SD值考察試驗加樣回收率。

回收率％=〖ZK(〗(測得多糖的質量-供試品中多糖的質量)/添加葡萄糖對照品質量×100％〖ZK)〗

1.2.9

多糖含量的計算。公式如下：

多糖含量（%）=獵璱×N/M

式中，C璱為樣品測定吸光度在標準曲線中對應濃度(│蘥/ml)；

玁為樣品稀釋倍數（10 000）；玀為棗粉質量（10 g）。

2 結果與分析

2.1 試驗測定方法的分析

2.1.1

線性關系考察。以濃度C對吸光度A作線性圖，得回歸方程y=0.009 2x+0.007 2(R2=0.999 4)。結果表明，葡萄糖標準溶液經硫酸-苯酚法顯色后在15~100 μg/ml范圍線性關系良好。

圖1 葡萄糖標準溶液線性關系考察

2.1.2

精密度試驗結果。

不同檢測人員對6份多糖供試品溶液所測得吸光值分別為：0.455、0.475、0.466、0.465、0.448、0.460，經計算其玆SD值為2.04%，小于3%，說明該方法具有良好的精密度。

2.1.3

重復性試驗結果。

按照“1.2.1”項供試液的制備方法，再按“1.2.3”項的方法顯色后測得6份多糖供試品溶液吸光值分別為：0.455、0.458、0.438、0.422、0.460、0.453，經計算其玆SD值為1.98%，小于3%，說明該方法具有良好的重復性。

2.1.4

穩定性試驗結果分析。從表1中可知，多糖溶液經硫酸-苯酚法顯色后，在2.0 h內其吸光值的檢測結果沒有變化，2.5 h后溶液吸光值開始略微降低，通過spss軟件方差分析獸值為0.887，大于0.05，可判斷不同時間段所測定吸光值不具有顯著性差異。由此說明，采用硫酸-苯酚法測定多糖含量，吸光值隨時間變化不大，但顯色后的溶液在2.0 h內檢測效果最佳。

表1 穩定性試驗結果

測定時間h

獳值

重復1 重復2 重復3 獳平均值

0.5 0.460 0.475 0.468 0.468

1.0 0.458 0.473 0.470 0.467

1.5 0.475 0.466 0.462 0.468

2.0 0.472 0.462 0.468 0.467

2.5 0.466 0.458 0.471 0.465

3.0 0.458 0.466 0.463 0.462

2.1.5

加樣回收率試驗結果分析。由表2可知，在硫酸-苯酚法測定多糖含量加樣回收試驗結果中，其玆SD值為2.6%，小于3%，該方法回收率良好，所制訂分析方法的準確┒雀摺＊

表2 加樣回收率試驗結果

序號 取樣量う蘥 添加量う蘥 測得量う蘥 回收率% 平均回收ぢ省% 玆SD%

1 20 5 25.12 102.4099.23 2.08

〗2 20 15 35.07 100.47

3 20 25 44.80 99.20

4 20 35 54.31 98.03

5 20 45 64.52 98.93

6 20 50 68.18 96.36

2.2 不同棗品種多糖粗提物及多糖含量測定結果分析

不同品種棗果實多糖粗提物含量有一定差異。由表3可知，16個棗品種中，多糖粗提物含量均值為1.55 g，其中以小米棗、子代糖棗含量最高，分別為3.02、2.79 g，均值達到了2.91 g；母本糖棗、長棗、南方冬棗、酸元棗、藥棗含量次之，分別為2.63、1.84、1.38、1.31、1.30 g；而瓜棗、光皮棗含量最低，僅為1.08、1.10 g。多糖含量高與含量低棗品種之間含量相差達2.6倍。

不同品種棗果實多糖含量差異較大。由表3可見，16個品種棗果中，多糖含量均值為5.25%，其中以小米棗、子代糖棗含量最高，分別為9.75%、9.06%，均值達到了9.41%；母本糖棗、酸元棗、藥棗、長棗、玉泉八號和南方冬棗次之，分別為8.82%、6.20%、5.89%、5.56%、5.54%、5.23%；而光皮棗、瓜棗含量最低，僅為2.45%、2.54%；多糖含量高與含量低棗品種之間含量相差達3.9倍。通過方差分析，無論是多糖粗提物還是多糖含量，其獸＞F0.01(15,32)，差異達極顯著水平，說明不同棗品種間多糖粗提物及其多糖含量差異極為顯著。

對比多糖含量與多糖粗提物含量還可看出，兩者基本上存在一一對應的關系，多糖粗提物含量高的棗品種其多糖含量也相對高一些；多糖含量組內均方為0.009，多糖粗提物質量組內均方為0.017，對比兩者組內均方可知，多糖含量測定具有很高的穩定性，多糖粗提物測定其穩定性相對較低┮壞恪＊

表3不同品種棗果中多糖粗提物及多糖含量

棗果っ稱 多糖粗提物ず量∥g 多糖含量% 棗果っ稱 多糖粗提物ず量∥g 多糖含量%

方頭棗 1.21 3.55 大米棗 1.16 4.91

小米棗 3.02 9.75 玉泉八號 1.27 5.54

子代糖棗 2.79 9.06 酸棗 1.12 3.55

母本糖棗 2.63 8.82 酸元棗 1.31 6.20

長棗 1.84 5.56 軍棗 1.12 2.87

光皮棗 1.10 2.45 牛奶棗 1.18 4.32

雞蛋棗 1.24 3.84 瓜棗 1.08 2.54

藥棗 1.30 5.89 南方冬棗 1.38 5.23

3 結論與討論

棗資源多種多樣，資源基因差異大，不同品種棗果實多糖的含量存在較大差異。該試驗結果表明，不同棗品種間多糖含量最高與最低相差達3.9倍，其中小米棗與子代糖棗多糖含量高達9%以上，具有很高的多糖加工利用價值，值得開發├用。

試驗過程中始終保持65 ℃左右的溫度，既能提高試驗效率，又能避免因溫度過高導致棗多糖顏色過深；通過水浴超聲所浸提出的粗多糖經乙醇沉淀、洗滌，丙酮洗滌，Sevag試劑除蛋白，可除去大量脂溶性物質、色素、單糖、蛋白質等進而使測定結果更加精準。該試驗研究顯示，苯酚-硫酸法較為穩定，準確率和精密度高，而且重現性好，可作為棗多糖含量的測定方法。

參考文獻

〖HT8.BS〗〖HJ*4〗

［1］ 〖ZK（#〗

國家藥典委員會.中國藥典［S］.北京:中國醫藥科技出版社,2010:21-22.

［2］ 何峰,潘勤,閔知大.棗屬植物化學成分研究進展［J］.國外醫藥·植物分冊,2005,20(1):1-5.

［3］ 陳輝.食品原料與資源學［M］.北京:中國輕工業出版社,2007.

［4］ 李進偉.金絲小棗多糖的研究［D］.無錫:江南大學,2006.

［5］ 姚文華,尹卓容.大棗的研究［J］.農產品加工·學刊，2006(2):28-31.

［6］ 趙愛玲，李登科，王永康，等.棗樹不同品種、發育時期和器官的水溶性多糖含量研究［J］.山西農業科學,2012,40(10):1040-1043.

［7］ 張惟杰.糖復合物生化研究技術［M］.2版.杭州:浙江大學出版社,1999.

［8］ 何余堂,潘孝明.植物多糖的結構與活性研究進展［J］.食品科學,2010,31(17):493-496．

［9］ SPILLER G A.Dietary fiber in prevention and treatment of disease［M］//SPILLER G A.CRC handbook of dietary fiber in human nutrition.Washington:CRC Press LLC,2001:363-431.

［10］ 顧有方,董策龍,陳會良，等.大棗多糖對大鼠血清自由基代謝的影響［J］.中國中醫藥科技,2007,14(S1):347-348.

［11］ ZHANG H，JIANG L,YE S,et al.Systematic evaluation of antioxidant capacities of ethanolic extact of different tissues of jujube from china［J］.Food and Chemical Toxicology,2010(48):1461-1465.

［12］ 吳娜,楊潔,許海燕，等.若羌大棗多糖的分離純化及抗氧化活性的研究［J］.天然產物研究與開發,2009,2l(2):319-323.