K3?K5抑菌劑對紫長茄細菌性枯萎病的防治效果

吳健 劉才宇 汪德尚 潘祖忠 劉義新

摘要[目的]驗證K系抑菌劑對紫長茄細菌性枯萎病的防治效果。[方法]田間試驗驗證防治效果，實驗室平板計數法進行菌藥互作關系研究。[結果]室內試驗結果表明，K3、K5濃度梯度為0、2、4、6、8、10 mg/L時，對病菌的抑制效果逐漸增強，不僅菌落個數依次減少，且菌落體積變小，6 mg/L以上時，無菌落生長，即抑菌率達100%。在田間防效試驗條件下，K3、K5抑菌劑對紫長茄枯萎病防效顯著，K5防效達70%～75%；K3防效為65%～70%。[結論]K系抑菌劑對紫長茄細菌性枯萎病有很好的防治效果。

關鍵詞紫長茄；細菌性枯萎??；K系抑菌劑

中圖分類號S436.3文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）01-00071-02

作者簡介吳?。?990- ），男，安徽安慶人，碩士研究生，研究方向：土壤生態-土傳病害控制，Email：wuj927@mail.ustc.edu.cn。*通訊作者，副教授，博士，碩士生導師，從事土壤生態研究，Email：liuyixin@ustc.edu.cn。

收稿日期20131209茄子黃萎病、枯萎病和青枯病均導致植株萎蔫，癥狀表現相似[1-3]，易被人們混淆。其中，黃萎病多在定植后發生，表現為自下而上枯萎，有些枝條發黃，有些則不[4]；枯萎病多在結果初期發生，也是自下而上枯萎，多呈現一片葉半邊黃半邊正常現象[3]；青枯病發生后，葉色青綠呈開水燙傷樣、后至枯萎[5]。三者病株維管束均有變褐現象，但濕度大時青枯病病株莖橫切面可擠出乳白色粘液[3]。

2013年舒城縣蔬菜基地的茄子出現局域萎蔫，從取回的病株上分離得到的病原主要為細菌，純化后，其菌落特征與青枯菌菌落相似，結合典型癥狀分析，判定該癥狀為細菌性枯萎病。中國科技大學土壤微生態課題組研究得出擬氨基多糖K系抑菌劑對煙草黑脛病和青枯病有較好的抑制作用和防治效果[5-6]；分析了全國多個地區的青枯菌多態性特征，并將這些菌的種內變異加以聚類[7]；比較了農用鏈霉素和K系抑菌劑對青枯菌的抑制率，結果表明，K系抑菌劑的效果顯著高于前者[8]；也曾將實驗室分離純化的致病性青枯菌回接到植物體，繼而逐漸出現枯萎癥狀。筆者在以往試驗的基礎上，研究了K3、K5抑菌劑用于已出現萎蔫癥狀的紫長茄上，并進行了田間試驗，旨在為紫長茄細菌性枯萎病的防治提供科學依據。

1材料與方法

1.1材料K3、K5抑菌劑（可溶粉劑）由中國科學技術大學地空學院土壤微生態實驗室研制；解析出K3實驗分子式：C21H47O14N9S4；K5分子式待解析。試驗田塊為安徽省六安市舒城縣現代農業科技示范園蔬菜基地試驗田。供試作物為紫長茄，品種為黑豐長美。枯萎病病菌于2013年5月在安徽六安市舒城縣蔬菜基地紫長茄細菌性枯萎病植物體上分離得到。

1.2方法

1.2.1室內抑菌試驗。

1.2.1.1菌懸液的配制。挑取斜面保存的枯萎病菌菌落，接入配好的營養瓊脂（牛肉膏、蛋白胨）NA液體培養基[9-10]，放入35 ℃培養箱中培養18 h，制成菌懸液。

1.2.1.2含藥培養基的制備。分別配制K3、K5抑菌劑（梯度為0、2、4、6、8、10 mg/L）的母液1 000 mg/L。分別取60.0、59.9、59.8、59.6、59.5、59.4 ml液體培養基，加入0.9 g瓊脂以后，與槍頭、培養皿、無菌水一起滅菌，冷卻至40～50 ℃后分別加入0.12、0.24、0.36、0.48、0.60 ml母液，每個濃度倒6個培養皿（3個備用），做標記，待冷卻為固體培養基平板。

1.2.1.3抑菌效果的測定。將配制好的菌懸液稀釋為2×103 cfu/ml左右，在無菌條件下，用移液槍取80 μl稀釋液滴至制備好的固體培養基平板表面，并用涂布棒將其涂均勻，放置10～20 min后移入35 ℃恒溫箱中，18 h后觀察并記錄各平板表面菌落大小和個數。

1.2.2田間試驗。

1.2.2.1試驗設計。共設置3個處理，每處理3次重復，共9個小區，每區20 m2。處理①（空白對照）：移栽后，按當地常規灌清水定根，每株灌200 ml左右。處理②：移栽后，用K5小袋（10 g）對水50 kg，1/5 000倍灌根，每株200 ml左右。處理③：移栽后，用K3小袋（10 g）對水50 kg，1/5 000倍灌根，每株200 ml左右。

于2013年4月19日移植，移植當天進行了上述處理。于2013年5月22日分別追灌藥劑1次，用量同前。試驗處理后，于發病中期和發病高峰期進行了田間病情調查，分別為2013年6月19、7月17日，并將2次結果進行比較，以分析藥劑對枯萎病的防治效果。

1.2.2.2藥效調查方法。藥效按小區調查，記錄每小區總株數、病級、病情指數。分級標準如下：0級：植株健壯無??；Ⅰ級：植株頂端1～2片葉出現萎蔫現象；Ⅲ級：植株呈萎蔫葉片3～5片（晚間恢復）；Ⅴ級：植株有1/3葉片萎蔫或側枝萎蔫。Ⅶ級：植株有1/2葉、枝萎蔫，無明顯恢復；Ⅸ級：植株全株萎蔫枯死。

計算病株率、病情指數、防治效果公式如下：病情指數=∑（各級病株數×相對級數值）/（調查總株數×9）×100；發病率（%）=發病株數/調查總株數×100；病株防效（%）=（對照區病株數-施藥區病株數）/對照區病株數×100。

1.3數據分析采用Excel 2007、GraphPad Prism 5軟件進行數據分析。

2結果與分析

2.1室內抑菌效果

2.1.1K3抑菌效果。從圖1、2可見，隨著K3濃度的增加，平板上菌落個數逐漸減少。0 mg/L時菌落個數為150余個，2、4 mg/L時菌落個數小于50個，6 mg/L時僅有25個菌落，>6 mg/L時無菌落出現，其中，2～6 mg/L時K3抑菌率60%以上，8 mg/L時K3的抑菌率達100%。