沙門菌屬微生物學檢驗

摘要：目的：探討沙門菌微生物學檢驗方法。沙門菌主要通過污染食物和水源經口感染，可引起人類和動物的沙門菌病。沙門菌在人中可導致兩種基本類型的感染。多數沙門菌能引起腸胃炎，為一種腸胃和局部淋巴結的局部感染，引起腹瀉，持續數日。其他一些沙門菌可引起具有致死性的全身性感染，重者可引起致死性傷寒。

關鍵詞：沙門菌屬；微生物學檢驗【中圖分類號】R446.5【文獻標識碼】B【文章編號】1672-8602（2014）02-0180-01

沙門菌屬常見有傷寒沙門菌、副傷寒沙門菌、鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌等。所有沙門菌均對人和（或）動物致病。傷寒沙門菌和甲型副傷寒沙門菌既引起腸熱癥，亦致食物中毒、菌血癥和敗血癥。

1臨床資料

選取100例來源于本院門診及住院患者的血液、糞便、尿液、骨髓標本，微生物學檢驗分析。

2微生物學檢驗

2.1標本采集：根據不同疾病、不同病程取不同標本，最好在使用抗生素前采集。如腸熱癥根據病程不同，第1周取血液，第2～3周取糞便、尿液，全程可取骨髓。血清學診斷應在病程的不同時期分別采集2～3份標本。胃腸炎取糞便、嘔吐物和可疑食物。敗血癥或菌血癥取血液。

2.2檢驗方法

2.2.1標本直接檢查：尿標本等可直接涂片進行革蘭染色鏡檢。

2.2.2分離培養：分離沙門菌常用腸道選擇培養基（SS、MAC、EMB等）和強選擇性培養基（孔雀綠瓊脂和亞硫酸鉍瓊脂等）。分離除傷寒沙門菌、各型副傷寒沙門菌以外的沙門菌用孔雀綠瓊脂效果較好，而分離傷寒沙門菌則用亞硫酸鉍瓊脂效果較好。此外，在暴發流行或篩選帶菌者時，在菌量較少的情況下，初次分離時用亞硒酸鹽或GN肉湯增菌。血液和骨髓液取血液5 mL或骨髓0.5 mL，加入50 mL膽汁葡萄糖肉湯增菌培養，若有生長則移種至血平板和SS平板。糞便或肛門拭子直接同時接種至SS平板和EMB/MAC平板。尿液和體液以3 000 r/min離心30 min后，取沉淀增菌或接種于血平板、EMB/MAC平板等培養基上。可疑食物研磨后加10倍量的無菌生理鹽水混勻，接種于增菌肉湯和腸道選擇性平板上。沙門菌在SS平板上為不透明或透明、無色或中央為黑色的菌落，在MAC和 EMB平板上呈無色透明或半透明的菌落。

2.2.3鑒定：取上述可疑菌落涂片染色，并進一步做生化試驗，若反應結果符合數據，則可初步鑒定為沙門菌屬。再依據數據所列的生化反應試驗與血清學試驗鑒定到種、型。沙門菌血清學鑒定的基本方法是：用沙門菌抗血清對分離的菌株按O抗原、第一相及第二相H抗原的順序，逐一進行玻片凝集。臨床常見沙門菌95%以上屬于A～F群，故先用A～F多價O血清進行玻片凝集，確定為A～F群后，用單價O因子血清鑒定到具體的群，再用第一相與第二相H因子血清定型[1]。若細菌生化反應符合沙門菌屬.但與A～F多價O血清不產生凝集現象，應考慮是否有表面抗原（Vi）存在，可將細菌懸液水浴加熱30 min后再進行凝集試驗。如除去Vi抗原后仍不凝集，則可能為A～F以外的菌群。

2.2.4免疫學診斷：腸熱癥病程長，由于抗生素的使用，臨床癥狀不典型，臨床標本分離陽性率低，故常用肥達反應輔助診斷。肥達反應是用已知傷寒沙門菌O、H抗原以及甲型、乙型、丙型副傷寒沙門菌H抗原與受檢者血清進行凝集試驗，測定受檢者血清中有無相應抗體及其效價，來輔助診斷傷寒和副傷寒。其結果需結合臨床表現、病程、病史等進行綜合分析。O抗原刺激機體產生 IgM抗體，出現較早，在血清中存在的時間較短；H抗原刺激機體產生IgG，出現較遲，持續時間較長。正常人因隱性感染或預防接種，血清中可存在一定量的抗體。通常傷寒沙門菌 O凝集效價達到或超過1：80、H抗體效價達到或超過1：160、各型副傷寒沙門菌H抗體效價達到或超過1：80，病程中逐周檢查效價遞增或恢復期達到初次效價的4倍或以上者，才有診斷價值。一般來說，O、H凝集效價均升高，則為傷寒、副傷寒可能性較大；O凝集效價不升高而H凝集效價升高，可能為預防接種的回憶反應；O凝集效價升高而H凝集效價不升高則可能為感染早期，或與傷寒沙門菌O抗原有交叉反應的其他沙門菌感染，可于一周后復查，如H升高則可診斷。

3討論

沙門菌有毒株可借助菌毛吸附于小腸黏膜上皮細胞。有Vi抗原的沙門菌具有侵襲力，能穿過小腸上皮到達固有層。沙門菌有較強的內毒素，可引起發熱、白細胞改變、中毒性休克，并能激活補體系統，導致一系列病理生理變化。某些沙門菌（如鼠傷寒沙門菌）能產生類似大腸埃希菌的腸毒素，與早期的水樣腹瀉有關。沙門菌主要通過污染食物和水源經口感染，可引起人類和動物的沙門菌病。沙門菌引起的疾病主要有，胃腸炎最常見于沙門菌感染，因食入被大量鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌等污染的食物而引起。主要癥狀為發熱、惡心、嘔吐、腹痛。菌血癥或敗血癥以豬霍亂沙門菌感染為多，表現為高熱、寒戰等。無明顯的胃腸炎癥狀，常伴有局部病灶，如膽囊炎、骨髓炎等。常出現血培養陽性而糞便培養陰性的現象。腸熱癥包括傷寒與副傷寒，分別由傷寒沙門菌和各型副傷寒沙門菌引起，兩者的致病機制、臨床癥狀相似，只是副傷寒的病情較輕，病程較短。腸熱癥常表現為輕度發熱和腹瀉，最典型的腸熱癥是由傷寒沙門菌引起的傷寒。細菌隨污染的食品或飲水進入體內，在淋巴結內大量繁殖后，經胸導管進入血流引起第一次菌血癥[2]。細菌隨血液循環到達骨髓、肝、腎、脾、膽囊等器官大量繁殖，再次進入血液循環，引起第二次菌血癥。患者常有持續高熱（39℃以上）、相對緩脈、肝脾腫大、皮膚玫瑰疹、外周血白細胞減少等癥狀。若無并發癥，第3～4周病情開始好轉。傷寒沙門菌感染后約3%患者可成為病原菌攜帶者，在糞便中可持續排菌長達1年或1年以上。病菌主要儲留于膽囊，間歇性排菌使糞便成為重要傳染源。腸熱癥后可獲得牢固的免疫力，以細胞免疫為主。消化道黏膜局部SIgA對阻止病原菌的黏附有一定的作用。

參考文獻

[1]薄志堅，鄒梅，黃敏，等.沙門菌分子生物學檢測技術研究進展[J].中國公共衛生，2006，22（2）：236.

[2]田克誠，闞飆，胡偉，等. 貴州省傷寒沙門菌分離株16s核糖體基因型的多態性及其流行病學意義[J]. 中華流行病學雜志，2002，2：50.