柴胡皂苷的含量測定方法研究進展

作者簡介：馬璇，女，新疆焉耆人，1986年4月生，黨員，生藥學碩士，新疆維吾爾藥業有限責任公司研發人員，從事維吾爾藥研發。

摘要：柴胡為常用中藥材，具有解表和里、舒肝解郁、升舉陽氣等功效，柴胡所含的化學成分較復雜，其主要的藥效成分為柴胡皂苷和揮發油類，其中柴胡皂苷類成分的含量較高，許多研究者對其含量測定方法進行研究，本文就對國內外研究者進行的含量測定方法進行簡單概述。

關鍵詞：柴胡；皂苷；含量測定；進展

【中圖分類號】

R453 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）06-0038-02

柴胡皂苷類成分是柴胡中的標示性成分，經過多年研究后其組成成分類型較為明確，也是最為公認的活性成分，其在柴胡藥材中含量較大。要充分實現柴胡的藥用價值，就需要控制柴胡制劑的內在質量，選擇合理的含量測定方法。

1 柴胡皂苷類成分的的含量測定

1.1 柴胡總皂苷的測定

1.1.1 紫外-分光光度法測定總皂苷：

分光光度法不僅能測定有色物質，還能測定有共軛結構的無色物質，操作簡單、靈敏、適用面廣，常用于三萜皂苷的分析測定。由于柴胡皂苷無色，可以加入適當的試劑顯色后測定，此方法常用兩種顯色體系：對二甲氨基苯甲醛-硫酸體系[1] 和香草醛-冰醋酸體系[2]。

有研究將柴胡樣品經酸處理后用紫外分光光度法測定柴胡總皂苷[3]，柴胡中主要皂苷 a，d 分子結構中有 13，28 位醚鍵，對酸不穩定，酸性條件下醚鍵斷裂形成有共軛體系的二烯體柴胡皂苷 b1，b2，在紫外光區產生明顯吸收峰，從而可以在 252 nm最大吸收處測定，見Fig.1.1。由于柴胡中皂苷以 a，c，d 為主，而且均有不穩定的醚鍵結構，所以將這些皂苷在經酸水解后轉化為二烯體皂苷進行紫外測定的方法，基本可以反映總皂苷的含量。

Fig.1.1 The transformation of saikoponins

1.1.2 高效液相測定柴胡總皂苷：

Hideyou Suzuki等[4]使用 HPLC 測定柴胡總皂苷，并對分析條件進行優化。在柴胡提取物中加入稀釋的氫氧化鈉使乙酰化柴胡皂苷被皂化，再經酸中和后，使用十八烷基硅烷（ODS）柱進行處理，以柴胡皂苷a和柴胡皂苷d為對照，在 206 nm 處測定峰面積，計算總皂苷含量。這種方法省時方便，復雜樣品可同時處理。

2 柴胡皂苷單體的測定

2.1 薄層色譜法：

該方法是用特定波長的光照射在薄層板上，對薄層板上吸收紫外光或可見光的斑點或經照射能激發產生熒光的斑點進行掃描，將掃描得到的圖譜及積分數據用于藥品分析，是常用的中藥含量測定方法。劉偉等[5]用定量毛細管吸取樣品和對照品溶液，按薄層條件進行展開，進行反射法鋸齒掃描測定，以斑點的面積來比較柴胡皂苷的含量。

2.2 高效液相法：

高效液相色譜法分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高，可廣泛應用于成分測定中。2010 版《中華人民共和國藥典》和日本藥局方第 15 版[6]均使HPLC進行測定。

HPLC 法測定柴胡皂苷通常接不同檢測器，常用的有HPLC-ELSD[7] HPLC-DAD[8] 等，Yuanwu Bao [9]等使用 LC-MS/MS 同時測定柴胡藥材和小柴胡湯中 15 種柴胡皂苷及其衍生物，并對電離條件進行優化，結果顯示負離子模式能達到最佳的分析物電離靈敏度并獲得最多的碎片信息，可以準確快速地測定柴胡皂苷的含量。

Xiu-Qin LI 等[10]在樣品中加入溫和的酸使柴胡皂苷 a，d 分別完全轉化為柴胡皂苷 b1，b2，使用 HPLC-PDA 在 250nm 處測定二者含量。

2.3 毛細管電泳： 毛細管電泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE）是近幾十年發展起來的一種分離分析技術，它以彈性石英毛細管為分離通道，以高電壓直流電場為驅動力，依據供試品中各組分的淌度 （單位電場強度下的遷移速度） 和 （或） 分配行為的差異而實現各組分分離的一種分析方法。

You-Zung Hsieh 等[11]使用毛細管電泳來測定柴胡皂苷含量，并比較了不同陰離子表面活性劑，膽汁鹽和十二烷基硫酸鈉（SDS）的分離效果，在 SDS 中加入 r-環糊精則能得到良好的分離效果。

2.4 膜免疫測定：

Osamu Morinaga等[12]以聚醚砜薄膜（PES）為固相膜，乙腈：水（4：1）用于溶解柴胡皂苷標準品、柴胡提取物，用柴胡皂苷 a 的單克隆抗體進行印跡測定，柴胡皂苷在 PES 上形成的有色斑點可以用 NIH 圖像軟件處理，從而計算出皂苷含量。

2.5 酶聯免疫法：

酶聯免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是以固相載體吸附抗原/抗體為基礎的分析方法。Tae Kwon Shono等[13]以柴胡皂苷 a 為單克隆抗體進行 ELISA 分析。與 HPLC 同時測定柴胡皂苷，結果顯示 ELISA 的靈敏度更高。

2.6 液滴逆流層析（DCCC）：

液滴逆流層析是將固定相充滿一組彼此相連的細管，流動相以微滴的形式穿過固定相，利用物質在互不混溶的兩相液滴中的分配系數不同而達到分離目的。有學者就利用 DCCC 測定柴胡皂苷含量[14]。

參考文獻

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