三七中人參皂苷Re的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定

摘要：

目的：對廣西特產(chǎn)中藥三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen） 中人參皂苷Re的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定。方法：用80%乙醇水對8.9 kg三七根粉末進行回流提取，再利用液液萃取、硅膠柱色譜、D101大孔樹脂柱色譜、重結(jié)晶等方法對三七根的化學(xué)成分進行分離純化，并根據(jù)其理化性質(zhì)和利用現(xiàn)代波譜學(xué)手段（NMR）對分離得到的一個化合物進行結(jié)構(gòu)解析。結(jié)果：從廣西三七的根80%乙醇提取物的正丁醇層分離、純化、鑒定了一個化合物。結(jié)論：從廣西三七根部80%乙醇提取物中分離鑒定了人參皂苷Re。

關(guān)鍵詞：三七；三七皂苷；人參皂苷；人參皂苷Re

【中圖分類號】

R749.053 【文獻標(biāo)識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）06-0053-01

三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen），又名田七、人參三七、田三七、山漆等[1]，為五加科人參屬植物[2]，主產(chǎn)于廣西、云南及四川等地，是臨床常用傳統(tǒng)中藥。研究表明，三七含有皂苷、黃酮、多糖、氨基酸、揮發(fā)油等多種有效成分，其中皂苷含量最高[3，4]。現(xiàn)代藥理研究表明，三七在血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及抗炎、抗衰老、抗腫瘤等方面有活性作用[5-7]。本文利用液液萃取、硅膠柱色譜、D101大孔樹脂柱色譜[8]對三七干燥根的80%乙醇提取物化學(xué)成分進行研究，分離并鑒定了三七中人參皂苷Re，并大量富集了該化合物，為開發(fā)新藥提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 實驗部分

1.1 三七根的提取及萃取實驗：

三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen）干燥根8.9 kg，打粉后用10倍量80%乙醇水回流提取3次[9]，每次1.5小時，合并提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得到總浸膏（1.8 kg）。

總浸膏分散到適量的水中，分別用等體積的二氯甲烷、正丁醇萃取三次，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45℃減壓回收有機溶劑后分別得到二氯甲烷層浸膏（SC，72 g），正丁醇層浸膏（SBu ，1517 g）。

1.2 人參皂苷Re分離純化過程：

將1517g 正丁醇層浸膏用適量水溶解，過濾澄清后上大孔樹脂色譜柱，依次用蒸餾水，30%乙醇，50%乙醇，70%乙醇，95%乙醇梯度洗脫，根據(jù)薄層顯示，將洗脫液合并為5個流分。分別為SBu-1～SBu-5。取其中SBu-3流分再上大孔樹脂色譜柱，依次用30%乙醇，50%乙醇洗脫，得SBu-3-1，SBu-3-2兩個流分。

將256g SBu-3-2浸膏用甲醇溶解，過濾，濾液加入200-300目柱層析用硅膠約500g，拌勻，揮干溶劑。采用硅膠柱色譜分離樣品SBu-3-2，用二氯甲烷-甲醇二元體系梯度洗脫，根據(jù)薄層顯示，將洗脫液合并為3個流分。分別為SBu-3-2-1～5，SBu-3-2-6，SBu-3-2-7。

SBu-3-2-6流分靜置后析出白色沉淀，過濾，將白色粉末用甲醇和水混合溶劑重結(jié)晶，得化合物1（3g），為白色粉末。

1.3 純度鑒定

圖2 化合物1的高效液相圖譜

Fig 2 HPLC of compound 1

HPLC液相分析條件

儀器：島津高效液相色譜儀LC-20A；柱子：島津WondaSilTM C18（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（53：47）；檢測器：SPD-20A紫外檢測器；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；

經(jīng)過液相分析，這個化合物的純度為98.2%。

2 化合物結(jié)構(gòu)解析

白色粉末，易溶于甲醇、乙醇、吡啶，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性[10]，薄層酸水解檢出葡萄糖和鼠李糖[11]，提示其可能為萜類或甾體皂苷類化合物。在1H-NMR （600MHz，pyridine-d5）譜中，髙場區(qū)給出8個角甲基質(zhì)子信號，分別為δ 0.95 （3H，s，H-30），0.97 （3H，s，H-19），1.17 （3H，s，H-18），1.35 （3H，s，H-29），1.58 （3H，s，H-21），1.59 （3H，s，H-27），1.60 （3H，s，H-26），2.10 （3H，s，H-28）；低場區(qū)給出一個烯氫信號δ 5.24 （1H，t，J = 7.3 Hz）[12]；另外2個糖殘基的端基質(zhì)子信號δ 5.25 （1H，d，J = 7.0 Hz），5.16 （1H，d，J = 7.7 Hz），根據(jù)其偶合常數(shù)，推測有兩個糖殘基的端基構(gòu)型均為β型，δ 6.48 （1H，brs.）為鼠李糖殘基的端基質(zhì)子信號，根據(jù)其偶合常數(shù)，推測其端基構(gòu)型為α構(gòu)型。13C-NMR （150MHz，pyridine-d5）譜中給出48個碳信號，其中包括八個甲基碳信號；兩個sp2雜化的碳信號δ 130.9、126.0；3個連二氧的sp3雜化的碳信號δ 101.9、101.8、98.2；18個連氧的sp3雜化的碳信號，其余均為sp3雜化的碳信號，推測此化合物為達瑪烷三萜皂苷，而依據(jù)δ 60.8 （C-5）可確定為原人參三醇型達瑪烷三萜皂苷[13，14]。該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻報道人參皂苷Re[15]的相比，基本一致，因此將該化合物鑒定為ginsenoside Re。

3 討論

通過實驗大量富集了三七的主要化學(xué)成分人參皂苷Re， 為創(chuàng)新藥物研究提供了原料藥，對開發(fā)三七新產(chǎn)品具有重要意義，這將帶來良好的社會效益和經(jīng)濟效益。

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