電針對糖尿病大鼠勃起功能障礙及神經營養因子—3表達的影響

基金項目：黑龍江省衛生廳課題（No.2007-492）

通訊作者：馬萍，女，副教授，研究方向：神經康復

摘要：

目的：探討NT-3與糖尿病性陰莖勃起功能障礙（DED）的關系，電針治療對其表達變化的影響及改善勃起功能的可能機制。方法：取糖尿病大鼠20只，8周后注射APO 30min內未有勃起的隨機均分為電針組（EA）及模型組（DM），EA電針足三里、百會、會陰穴4周，另取正常大鼠10只做正常對照組（CN），通過免疫組化觀察各組脊髓腰骶段NT-3陽性神經元表達的變化。結果：EA及DM與CN相比、EA與DM相比，大鼠陰莖勃起次數及脊髓腰骶段NT-3陽性神經細胞表達均有顯著性差異（P<0.05；P<0.01）。結論：電針治療可明顯提高DED大鼠陰莖勃起次數，這可能與提高腰骶段脊髓NT-3陽性神經元表達有關。

關鍵詞：電針；糖尿病；神經生長因子-3；勃起功能障礙

【中圖分類號】

R587.1 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）06-0071-01

陰莖勃起功能障礙（ED）是糖尿病（DM）的常見并發癥，占男性勃起障礙發病率的35%～75%左右，嚴重危害男性生活質量，但其發病的分子機制仍未完全闡明。

本實驗通過應用免疫組化技術對DED大鼠模型腰骶段脊髓NT-3表達的變化進行觀察，以探討NT-3與DED的關系和發生機制，并通過電針治療觀察其對DED的改善和對NT-3表達變化的影響，進一步完善電針治療DED的可能分子機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：

選用Wistar雄性大鼠30只，體重200-250g，購自本校實驗動物中心，合格證號：黑動字第P00102009號。

1.2 實驗方法

1.2.1 模型制作：

隨機抽取10只為正常對照組，其余20只用于糖尿病造模，在禁食24 h后按60 mg/kg腹腔注射2%鏈脲佐菌素溶液。1周后測定血糖，凡血糖值≥16.7 mmol/L者為糖尿病大鼠。

電針取穴參照《實驗針灸學》[1]，每次電針15min，隔日1次，連續4周。

1.2.2 APO試驗：

于8周2個時間點進行ED實驗，每個時間點為10只。參照Heaton方法，注射阿撲嗎啡（APO）（100μg/100g）后觀察30 min，記錄陰莖勃起次數。龜頭充血及末端陰莖露出為勃起1次。30 min內未出現勃起的為模型組。

1.2.2 標本制備：

取腰骶段脊髓放入4%多聚甲醛固定2 h，再入20%蔗糖至下沉；用低溫冰凍切片機對脊髓作連續橫切片，片厚30μm。切片進行NT-3的ABC免疫組織化學染色。

1.2.3 圖像分析及數據統計：

數據用表示， 用Tiger920圖像分析系統及Tanon GIS-1000凝膠成像處理系統測定大鼠腰骶段脊髓NT-3蛋白的相對含量。顯著性檢驗采用SPSS11.0軟件，組間差異用方差分析作統計學處理。

2 實驗分析及結果

2.1 陰莖勃起功能實驗及NT-3免疫組化染色結果： 與CN比較，EA及DM陰莖勃起次數和勃起率明顯降低（P<0. 05），尤其是DM（P<0. 01）；EA與DM比較， 陰莖勃起次數和勃起率明顯增強（P<0. 05）。

腰骶段脊髓存在大量NT-3陽性神經細胞，EA、DM與CN相比，NT-3陽性神經細胞的數量及灰度差異均有顯著性（P<0. 05；P<0. 01） ；EA與DM相比，NT-3陽性神經細胞的數量及灰度差異有顯著性（P<0. 05） 。

表1 各組大鼠陰莖勃起次數及腰骶段脊髓NT-3陽性神經纖維灰度比較（X±s）

與CN比較，*P<0. 05，**P<0. 01 EA與DM比較， ▲ P<0. 05

3 討論

神經營養因子是一類在靶組織內合成，并逆行運輸至效應神經元的能對中樞和周圍神經發揮營養作用的小分子肽類物質和蛋白質。NT-3是神經營養因子家族中重要成員，它與NGF有50%同源性，對中樞和周圍神經系統均有廣泛作用。

神經因素在陰莖勃起的發生及調控中起重要作用，糖尿病引起的神經病變是DED發病的重要原因。自主神經病變可以引起陰莖靜脈漏的形成， 而周圍神經病變可以使神經反射傳導障礙，支配陰莖的舒血管腸肽能、膽堿能、腎上腺素能神經損壞，導致與陰莖勃起有關的神經遞質濃度改變，最終導致ED。

李劍波等[2]通過定量分析大鼠坐骨神經的結構，觀察DM狀態對外周神經的損害，發現DM狀態可致大鼠坐骨神經髓鞘及軸突的改變，包括：軸索萎縮、脫髓鞘、有髓纖維密度減少即神經再生障礙。對勃起功能起不同的作用。

芬蘭學者Hiltunen等報道，在正常大鼠脊髓S1段背根神經節，NT-3、NGF、BDNF 3種NT的受體均有表達。該研究結果推測，NT-3可能為勃起過程中更為重要的NT。

褚氏認為[3]，會陰穴治療陽瘺，能夠改善局部血管、神經機能，可能與“陰部神經-脊神經節段反射弧”作用的調整及其對勃起的影響有關。

脊髓勃起中樞位于T12-L1.節段，反射性勃起中樞位于S2-S4節段，我們通過對大鼠的腰骶段脊髓NT-3的研究，發現在正常大鼠腰骶段脊髓有NT-3陽性神經細胞的表達，DM大鼠腰骶段脊髓NT-3陽性神經細胞明顯減少（P<0. 01），將直接影響中樞系統腰骶段脊髓的功能。 男性生殖器官都接受交感神經支配，前列腺的交感神經來自腰1- 3交感干神經節，陰莖的交感神經形成陰莖海綿體大、小神經，分布于尿道海綿體部、陰莖海綿體部及其勃起組織，是調節陰莖勃起主要神經。NT-3在大鼠腰骶段脊髓中表達下降，將直接影響陰莖及前列腺內神經的病變，將引起陰莖勃起障礙及主要附屬性腺對性功能的維護作用，引起ED。通過電針足三里、關元、會陰穴，明顯提高ED大鼠腰骶段脊髓內NT-3的表達，明顯改善了勃起功能，這可能為電針治療糖尿病勃起功能障礙提供新的理論依據。

參考文獻

[1] 鄧春雷，殷克敬.實驗針灸學[M].北京：人民衛生出版社， 1998， 7： 147.

[2] 李劍波，陳家偉，馮振卿，等. 糖尿病對外周神經形態結構的影響[J]. 南京醫科大學學報，1999，19（3）： 200-202.

[3] 褚自宏. 會陰配關元治療陽瘺癥31例[J]. 針灸臨床雜志，1993，9（1）：15.