監(jiān)測俄克拉荷馬州發(fā)病豬場外不同距離處的空氣樣本中豬流行性腹瀉病毒

中圖分類號：S855 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1001-0769（2014）02-0005-02

美國首次發(fā)生豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea，PED）是在2013年。因會引起斷奶前仔豬的高死亡率，此病正給豬場帶來慘重的經(jīng)濟(jì)損失。俄克拉荷馬州鍋柄狀地區(qū)的許多豬場在短時間內(nèi)感染了PED，且常見的傳染源不詳，懷疑經(jīng)空氣（懸浮塵粒）傳播。眾所周知，與PEDv相似的冠狀病毒在干燥環(huán)境中相對穩(wěn)定，且此類環(huán)境還可增加其通過空氣傳播的可能性。所以，有必要確定是否可在空氣樣本中檢測到PEDv。

1 試驗材料和方法

用大容量空氣采樣器采集空氣樣本（Midwest Micro-Tek，美國Brookings公司）（圖1）。開始時在每個取樣點將11 mL運輸培養(yǎng)基（MEM，anti-anti，牛血清蛋白、胰蛋白、慶大霉素）放在貯存器中，然后讓空氣取樣器運行30 min。在距發(fā)生PED疫情的豬場不同距離的地方采集空氣樣本。剩余的運送培養(yǎng)基注入15 mL離心管中，在遞交至明尼蘇達(dá)大學(xué)獸醫(yī)診斷實驗室用PCR方法檢測PED病毒前一直置于干冰中保存。取樣后的殘留物用蒸餾水沖洗。采樣器所有表面和內(nèi)部充分地噴灑70 %的乙醇溶液進(jìn)行消毒，設(shè)備消毒后在每次采樣間需放置30 min以上。再次采樣前，消毒劑殘留液用蒸餾水沖洗干凈，并用紙巾擦干。采樣器的儲存器和紡紗裝置用無菌棉拭（液體Stuart媒介）進(jìn)行采樣，隨后用PCR方法檢測PEDv。從發(fā)病豬場順風(fēng)方向的最遠(yuǎn)點開始，連續(xù)采集樣本。

PCR陽性空氣樣本進(jìn)行生物學(xué)鑒定，以確定采集到的病毒顆粒活力。為提高檢測的敏感性，我們用10日齡仔豬（圖2）進(jìn)行測定。選取9份PCR陽性樣本，進(jìn)行生物學(xué)鑒定，以代表距檢測到多個陽性樣本[（18.288 m（60 ft），1.609 344 km（1 mi），4.828 032 km（3 mi）]的豬場外的不同距離。盡管在距離豬場 16.09 344 km（10 mi）處采集的樣本只有一個陽性樣本，但選取第10份PCR陽性樣本仍具有重要意義。15頭豬分別放入13個獨立的房間中，并接種病毒。我們加入1份陽性對照樣本（Ct 16）、1份稀釋的陽性對照樣本（估測的Ct 36-38，在檢測時呈陰性）和1份陰性對照樣本。所有試驗仔豬在接種48 h后進(jìn)行安樂死，其組織用PCR方法檢測PEDv。

2 實驗結(jié)果

在采用機(jī)械通風(fēng)的母豬場和自然通風(fēng)的肥育豬場外的多個空氣樣本中，用PCR方法檢測到了PEDv。在距已知陽性豬場外順風(fēng)方向9.144 m（30 ft）、18.288 m（60 ft）、91.44 m（300 ft）、0.402 336 km（0.25 mi）、0.804 672 km（0.5 mi）、1.609 344 km （1 mi）、3.218 688 km（2 mi）、4.828 032 km（3 mi）、8.04672（5 mi）、16.09 344 km （10 mi）和24.14 016 km（15 mi）處，共采集64份樣本，經(jīng)PCR檢測其中11份樣本呈陽性。各距離處檢測到的陽性樣本數(shù)分別為18.288 m（60 ft）（3/6）、0.804 672 km（0.5 ft）（1/5）、1.609 344 km（1 mi）（3/13）、4.828 032 km（3 mi）（3/7）和16.09 344 km（10 mi）（1/3）；未檢測到陽性樣本的地方分別距豬場9.144 m（30 ft）（0/1）、91.44 m（300 ft）（0/6）、0.402 336 km（0.25 mi）（0/5）、3.218 688 km（2 mi）（0/4）、8.04 672（5 mi）（0/8）和24.14 016 km（15 mi）（0/4）（圖3）。

唯一出現(xiàn)腹瀉癥狀的豬為接種低水平Ct的陽性對照樣本的豬。腸道樣本經(jīng)PCR檢測呈陽性。所有其他豬臨床和PCR檢測均呈陰性。

3 結(jié)論與論述

PEDv可以在遠(yuǎn)離豬場16.09 344 km （10 mi）外的空氣中檢測出。空氣樣本的生物學(xué)鑒定結(jié)果呈陰性說明：

● 本研究中較低的病毒濃度可能低于10日齡仔豬的最小感染劑量。

● PCR陽性空氣樣本中無活病毒。

● 接種低濃度病毒的仔豬可能需要待48 h以上供病毒復(fù)制，以便用生物學(xué)鑒定法進(jìn)行檢測。□□

原題名：Detection of Porcine Epidemic Diarrhea virus in air samples at varying distances to epidemic farms in Oklahoma（英文）

原作者：Dane Goede、R. Robbins、L. Dufresne、M. Engle、A. Rovira、Robert Morrison