陶氏化學格利特消毒劑GLUTEX GS2對豬傳染性胃腸炎病毒殺滅效果的測試

摘 要：本研究參照美國國家環境保護局（EPA）關于消毒劑在干燥的非生物體表面的抗病毒效果測評方法，評定美國陶氏化學公司的格利特消毒劑GLUTEX GS2對豬傳染性胃腸炎病毒的殺毒效力。結果表明：經合成硬水1：256倍稀釋的格利特消毒劑GLUTEX GS2，在與經過干燥處理的豬傳染性胃腸炎病毒膜充分接觸10 min后，病毒活性低于0.5個滴度，表明此消毒劑對豬傳染性胃腸炎病毒具有殺滅效力，可用于此病毒的日常消毒中。

關鍵詞：豬傳染性胃腸炎病毒；抗病毒效果；評測；GLUTEX GS2消毒劑

1 實驗目的

本測試旨在測評陶氏化學公司格利特消毒劑GLUTEX GS2的抗病毒效力。其方法是用稀釋的消毒劑產品液處理被病毒附著污染的物體表面后，測定回收病毒的侵染性，根據病毒侵染性的降低程度來表征消毒劑的抗病毒能力。

2 實驗材料和方法

2.1 測試病毒

試驗所用豬傳染性胃腸炎病毒（ATCC VR-763）來自位于美國馬里蘭州羅克維爾的美國標準菌庫（American Type Culture Collection，ATCC）。該病毒懸浮液是組織培養基。

2.2 細胞組織培養液和培養基

豬睪丸細胞來自位于艾奧瓦州Ames市的國家獸醫服務局實驗室。培養物利用添加了10 %（V/V）牛胎兒血清（加熱到56 ℃，經30 min滅活）、0.5 mg/mL水解乳蛋白、142.5 單位/mL青霉素、142.5 μg/mL鏈霉素、54 μg/mL泰樂菌素、0.125 μg/mL兩性毒素B和25 mM四羥乙基哌嗪乙磺酸的最低必需養分培養基（Minimal Essential Medium，MEM）進行常規培養。經培養后置于37 ℃含 5 % CO2的潮濕空氣下的一次性實驗室器皿中，制成單層組織培養物。培養物感染病毒后，置于裝有相同成分但添加了2 %血清的維持培養基中。

2.3 試劑

磷酸鹽緩沖液（PBS緩沖液）采用Dulbecco和Vogt的方法配制（實驗醫學雜志[J]. 1954， Vol.99：167-182）。合成硬水在使用當天配制，配制方法參照AOAC 4.024法（美國[美國公職分析化學工作者協會（AOAC），第14版，1984，第70～71頁）。

2.4 消毒劑的制備

每份消毒劑在使用當天按照1∶256的比例用 1 236 mg/kg AOAC合成硬水進行稀釋。

2.5 病毒膜的制備

病毒膜通過將0.2 mL的病毒懸浮液涂復在滅菌的皮氏玻璃培養皿底部制作而成。隨后置于室溫（約23 ℃）及環境濕度下，避免直接光照直至明顯干燥（約45～75 min）。

2.6 用消毒劑處理病毒薄膜

干燥的病毒薄膜在約23 ℃下用2.0 mL消毒劑稀釋液（噴霧）處理，使兩者保持10 min的充分接觸。在規定時間的接觸后，用橡膠淀帚刮下培養皿底部物質，并立即取一小份病毒-消毒劑混合物加入交聯葡聚糖（Sephadex）凝膠過濾柱中，用凝膠過濾法將病毒從消毒劑中分離出。

2.7 病毒對照薄膜的處理

用消毒劑處理一份病毒薄膜的同時，另一份相同的病毒薄膜再次懸浮在2 mL的磷酸鹽緩沖生理鹽水中，隨后取一小份混合液加入交聯葡聚糖凝膠（Sephadex）過濾柱中。

2.8 交聯葡聚糖凝膠過濾（Sephadex Gel Filtration）

交聯葡聚糖凝膠過濾按照Blackwell和Chen的改良方法[美國公職分析化學工作者協會雜志53期（1970年）第1229～1236頁]進行操作。3 cc交聯葡聚糖柱（LH-60-120）利用磷酸鹽緩沖生理鹽水保持平衡，離心清除液體中的空隙體積，隨后裝入約0.6 mL病毒-消毒劑混合液或病毒-磷酸鹽緩沖對照混合液，并再次離心。給過濾液貼上“未稀釋”標簽以便滴定。

2.9 病毒回收分析

對每份病毒-消毒劑和對照病毒混合液進行稀釋，隨后接種至細胞培養液中。每份稀釋液至少使用4份培養液。單層細胞接種0.05 mL稀釋液，并在37 ℃下培養1 h。吸收后，加入維持培養基（0.2 mL），并在恒溫37 ℃下接種培養液。接種4 d后，記錄培養液細胞病變效應。細胞病變效應最終結果見表1。

2.10細胞毒性對照

每份已稀釋的消毒劑通過交聯葡聚糖凝膠過濾，利用磷酸鹽緩沖液進行倍比稀釋，隨后接種于添加病毒-消毒劑混合液的細胞培養液中。接種后4 d后，記錄細胞培養液的細胞毒性。

2.11 計算方法

采用Reed-Muench法（L. J. Reed和H. Muench. 美國衛生醫學雜志[J].1938，Vol.27：493-497），計算以50 %侵染性的log10（TCID50）和毒性（TD50），以表示病毒效價及細胞毒性。

3 實驗結果

格利特消毒劑GLUTEX GS2對豬傳染性胃腸炎病毒的病毒感染性和細胞毒性測定結果見表1。

4 實驗結論

陶氏化學公司格利特消毒劑GLUTEX GS2在測試條件下，能有效殺滅豬傳染性胃腸炎病毒。□□