淺談糞便標本的微生物檢驗

摘要：目的： 探討糞便標本的微生物檢驗措施。方法： 通過在實驗室化驗，掌握糞便的基本屬性和狀況，總結出系統的檢驗措施。結論： 科學準確的糞便檢測措施，才能了解和掌握糞便的醫學特點，為有效的控制和預防相關疾病提供可靠的依據。

關鍵詞：：糞便；微生物；檢驗

【中圖分類號】R446.13 【文獻標識碼】B 【文章編號】1672-8602（2014）01-0195-01

糞便是人或動物的食物殘渣排泄物。糞便的四分之一是水分，其余大多是蛋白質、無機物、脂肪、未消化的食物纖維、脫了水的消化液殘余、以及從腸道脫落的細胞和死掉的細菌，還有維生素K、維生素B。

1形成

食物在大便標本（2張）胃和腸道內進行消化、主要是各種消化酶的作用。結腸不產生酶，只有細菌起消化作用。結腸內有多種細菌，大腸桿菌70%，厭氧桿菌20%，還有鏈球菌、變形桿菌、葡萄球菌、乳桿菌、芽胞和酵母。另有極少原生動物和螺旋體。腸細菌的重要作用是能產生生理需要的物質，如食物缺乏維生素時可在腸內合成維生素K、維生素B1、B2、維生素H、維生素B12、B6、蔚酸，葉酸和消旋泛酸。

2臨床意義

2.1腸道病原菌可引起人類感染性腹瀉，也可由細菌代謝產物造成食物中毒，長期應用抗生素導致菌群紊亂也可引起嚴重腹瀉，因此，應及早作出診斷，以免延誤治療。

2.2健康人體腸道內有許多正常菌群寄居，包括大量厭氧菌和大腸桿菌，腸桿菌等。

2.3腸道致病菌主要有沙門菌、志賀菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、小腸結腸炎耶爾森菌、空腸彎曲菌、金黃色葡萄球菌、難辨梭菌、白念珠菌、結核分枝桿菌、氣單胞菌、鄰單胞菌和蠟樣芽胞桿菌。

2.4致病性大腸桿菌包括5種類型腸毒素型大腸桿菌（ETEC）、腸侵襲型大腸桿菌（EIEC）、腸致病型大腸桿菌（EPEC）、腸出血型大腸桿菌（EHEC）和腸凝聚型大腸桿菌（EAggEC）。志賀菌屬是腸桿菌科中引起人類感染性腹瀉最常見的致病菌之一，主要引起人類細菌性痢疾，其中福氏和宋內志賀菌最為常見。菌痢主要有三種臨床類型：急性細菌性痢疾、慢性細菌性痢疾和攜帶者。典型的急性菌痢初期為水樣便，數日后為膿血便，伴有里急后重現象。

2.5沙門菌有較強的內毒素，可使體溫升高，白細胞減少。主要通過污染食品和水源經口感染，臨床上表現主要為三種類型：

2.5.1腸熱癥： 表現為發熱，血培養或肥達反應陽性。

2.5.2胃腸炎： 此型最常見，引起輕型和爆發型腹瀉，伴有低熱，惡心和嘔吐。

2.5.3菌血癥和敗血癥： 多發生于兒童和免疫力低下的成年人，病原菌隨血至組織，導致腦膜炎、心內膜炎、膽囊炎、骨髓炎等。往往出現血培養陽性而糞便培養陰性。

2.6出血性大腸桿菌引起嚴重的出血性腸炎，可發生在任何年齡，年齡小和老者死亡率高。少數患者并發溶血性尿毒綜合征（HUS）。臨床表現為低熱，痙攣性腹瀉，開始水樣便，繼而血樣便。此病的診斷完全依靠細菌學檢查，生化特征為不發酵山梨醇，可進行篩查[1]。

3標本要求

3.1糞便標本雖然含有多種雜菌，但應盡量使用無菌容器，采集新鮮糞便做培養。

3.2標本最好在用藥前采集。

3.3腹瀉患者應盡量在急性期采集標本（3天以內），以提高陽性率。

3.4采集膿血或黏液部分的新鮮糞便2～3g，液狀糞便應挑取絮狀物2～3ml。

3.5不易獲得糞便時，可采用直腸拭子采樣，即用無菌棉拭子經生理鹽水濕潤后，插入肛門內4～5cm（幼兒2～3cm）處，輕輕轉動后取出，然后將拭子置于運送培養基或無菌試管內。

3.6標本置于無菌盒內、運送培養基或增菌培養基中立即送檢。

3.7檢查糞便中難辨梭菌，標本應盡量避免與空氣接觸，將標本置于密封蓋試管中，量約試管2/3高度。

4儀器

25℃孵箱和37℃孵箱。

5試劑

（1）XLD瓊脂平皿糞便標本中常見病原菌在XLD瓊脂平皿上生長為紅色或有黑心菌落。（2）山梨醇瓊脂平皿大腸桿菌（0157）在山梨醇平皿上生長，利用山梨醇為無色透明菌落。（3）CCFA瓊脂平皿選出艱難梭狀芽胞桿菌。（4）慶大霉素平皿查霍亂弧菌。（5）堿性蛋白胨水查霍亂弧菌。（6）賽保羅平皿查真菌。（7）沙門菌、志賀菌及大腸桿菌Ol57：H7鑒定血清。

6操作步驟

6.1志賀菌屬檢驗糞便標本-XLD平皿，37℃孵箱培養過夜-挑取可疑菌落（紅色）轉種克氏雙糖培養基過夜-乳糖（-）、葡萄糖（+）、產氣（-）、H2S（-）、動力（-）-志賀菌血清凝集和藥敏試驗-報告。

6.2沙門菌屬檢驗： 糞便標本-XLD平皿，37℃孵箱培養過夜-挑取可疑菌落（紅色、或有黑心）轉種克氏雙糖培養基培養過夜-乳糖（-）、葡萄糖（+）、產氣（+）、H2S（+）、動力（+）-沙門菌血清凝集和藥敏試驗-報告。

6.3大腸桿菌Ol57： H7檢驗糞便標本-山梨醇平皿，37℃孵箱培養過夜-挑取可疑菌落（無色、透明）轉種克氏雙糖培養基培養過夜-乳糖（+）、葡萄糖（+）、產氣（+）、H2S（-）、動力（+）-大腸桿菌Ol57：H7凝集試驗-報告。

6.4霍亂弧菌檢驗取米泔樣糞便2ml，接種于堿性蛋白胨水中，35℃增菌6小時后，取表面生長物或菌膜，用劃線分離法接種慶大霉素平皿，35℃培養18～24小時，觀察有無灰青色菌落，挑取可疑菌落與霍亂弧菌01和0139診斷血清分別做玻片凝集試驗[2]。

6.5難辨梭狀芽胞桿菌檢驗：取送檢試管中深部的液狀糞便接種CCFA平皿，35℃厭氧環境培養48小時后，挑選不透明，黃色，邊緣不整齊的粗糙型菌落，做革蘭染色，如看到革蘭陽性桿菌且次極端有卵圓形芽胞，做進一步生化鑒定。

6.6真菌檢驗將標本接種賽保羅平皿，25℃和35℃培養，根據染色形態，菌落特征及生化試驗進一步鑒定。

參考文獻

[1]熱西旦·沙吾提，吳新華.腹瀉患者糞便病原微生物培養方法分析.中國保健營養（下旬刊），2012，22（07）：1866-1867.

[2]蘇加云.腹瀉患者糞便病原微生物培養方法的探討.檢驗醫學與臨床，2011，08（08）：924-925，327.