額敏縣弓形蟲病的血清學調查

【摘 要】本實驗采用間接血疑實驗（IHA）方法，對新疆額敏縣主要畜禽品種及犬和貓的弓形蟲感染情況進行了調查。共采集血清樣品1085份，調查結果表明牛，羊，豬，蛋雞，肉雞，犬和貓弓形蟲病的感染陽性率分別為2.54%，5.62%，3.48%，0%，0%，4.17%和7.14%。

【關鍵詞】弓形蟲；間接血疑；感染率；血清學

弓形蟲病是由剛第弓形蟲（Toxoplasma gondii）引起的一種人畜共患原蟲性疾病。1908年法國學者Nicolle和Manceaux在北非剛第最早發現，蟲體呈弓形，敵命名為剛第弓形蟲。

弓形蟲的感染在人和動物中很常見。家畜感染弓形蟲病后，一般無明顯的臨床癥狀，通常呈亞臨床癥狀，或隱性感染，但也可呈散發性發病或急性暴發流行。于恩遮于1955年在我國福建省首次發現該病。20世紀80年代，我國有多個省、市、自治區相繼報道了豬感染弓形蟲病的情況。新疆自1989年證實有弓形蟲病以來，1992年首次分離到3株弓形蟲，此后陸續開展了一些調查及研究工作，但調查工作大都局限于人，對畜禽的調查很少，為了摸清新疆額敏縣主要畜禽弓形蟲病的感染情況，我們采用了微量間接血疑實驗（IHA），用于檢測牛，羊，豬，雞，犬和貓的動物血清，定性測定其抗體效價，結果如下：

1 材料與方法

1.1 材料

額敏縣牛羊屠宰場，額敏縣獸醫站共采集各種動物血樣1085份。

1.1.1 試劑及儀器

弓形蟲IHA抗原（批號：070618），稀釋液（批號：070613），陽性，陰性血清；購于血清中國農科院蘭州獸醫研究所。96（12×8）孔110。V形有機玻璃反應辦，100ul微量加樣器，振蕩器，小型離心機，移液管等。

1.1.2 被檢血清牛血清：上戶86份，種羊場150份；

羊血清：突擊294份，二道橋30份，郊區85份。

豬血清：種羊場115份；

雞血清：蛋雞上戶50份，郊區137份（包括二道橋30份，突擊46份）；

犬血清：種羊場54份，二道橋42份；

貓血清：種羊場26份，二道橋16份。

1.2 試驗方法

1.2.1 血清分離

無菌采取被檢動物靜脈血3～5ml。將所采樣斜置于37℃恒溫培養箱中1h，之后置于4℃冰箱中，待其折出血清；或1500～2000r/rain離心3min分離血清，凡有溶血者棄之不用。將分離血清-20℃保存備用。

1.2.2 檢測方法

弓形蟲IHA診斷抗原按瓶上標示毫升數加入滅菌蒸餾水稀釋液搖勻，1500刪miLL離心5～10win，棄上清液，加等量稀釋液搖勻，4℃靜置24h后使用。

用微量加樣器往96孔板每孔加75ul稀釋液。每個樣品加4孔。每塊板設陽性，陰性對照。對照均加8孔。

往各組第1孔加25ul的被檢血清，或陽性血清，或陰性血清。

用加樣器對每組進行1∶4系列稀釋。被檢血清組稀釋至第3孔。陽、陰性對照組稀釋至第7孔。被檢血清組第4孔，陽，陰性對照組第8孔為稀釋液。將IHA診斷抗原搖勻，加25ul于每孔中。之后將反應板置微型振蕩器上振蕩1～2s，直至診斷夜中的雪球分布均勻，用干凈的玻璃板或紙板蓋住反應板，置22～37℃靜置2～3h后觀察結果。

1.2.3 判定方法

在陽性對照血清滴度不低于1∶1024（第5孔）；陰性對照血清除第1孔允許存在前滯現象（+）外，其余各孔均為（-）；稀釋液對照為（-）的前提下，對被檢血清進行判定，否則應重做。間接血凝試驗的判定標準如下：

“++++”：100%紅細胞在孔壁下部呈均質的膜樣凝集。邊緣整齊，致密。因重力關系，膜樣凝集的紅細胞有時出現下滑現象。

“+++”：75%的紅細胞在孔壁下部呈膜樣凝集，不凝集的紅細胞在孔低中央集中成很小的圓。

“++”：50%的紅細胞在孔壁更下部呈稀疏的凝集，不凝集的紅細胞在孔低中央集中成較大的圓點。

“+”：25%的紅細胞在孔低凝集，其余不凝集的紅細胞在孔低中央集中成大的圓點。

“-”：所有的紅細胞均不凝集。并集中于孔低中央呈規則的最大的圓點。

被檢血清第3孔（1∶64稀釋）達到“++”或以上，將被檢樣品判為陽性。被檢血清第3孔（1∶64）為“+”或“-”，將被檢樣品判為陰性。

2 結果

本次調查過程中，新疆額敏縣家畜中羊的感染率最高，其次是豬，再次是牛，陽性率分別為5.62%，3.48%和2.54%。種羊場的弓形蟲病陽性感染率性相對較高為7.14%。蛋雞和肉雞的弓形蟲病陽性感染率為0%。隨著寵物的興起，作為弓形蟲惟一終末宿主的貓以及起機械傳播作用的犬與人們的關系越來越密切，在弓形蟲病的傳播中起著尤為重要的作用，在本次調查中，貓和犬感染較高，陽性率分別為7.14%和4.17%。

新疆畜禽弓形蟲病陽性率低于國內一些報道。王權2006年報道上海犬的陽性率為13%，陸艷2005年報道青海省豬，綿羊陽性率分別為7.19%和4.38%，王天奇2006年報道洛陽豬陽性率為16.5%，于詠蘭2006年研究報道北京地區犬和貓的感染率分別為13.21%和14.06%。其主要原因可能新疆屬于干旱地區，卵囊在干旱的土壤中不利于傳播有關，這也與李國清1990年德觀點相同；其次是由于新疆土地資源廣闊，飼養區域相對較大，感染弓形蟲病的幾率相對較小；再次是由于近15年來隨著畜禽規模化，集約化養殖逐漸增多，改變了以往家庭式的牛、羊、雞、豬、犬、貓混養的方式，減少了弓形蟲病的傳播機會。