非酒精性脂肪肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的標(biāo)準(zhǔn)化及評價(jià)

摘要：隨著人民生活水平的提高、生活方式的改變，非酒精性肪性肝病（nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD）在我國發(fā)病率正呈現(xiàn)逐年增高趨勢，但迄今為止非酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)制仍不明確。目前非酒精性脂肪肝大鼠模型運(yùn)用廣泛，尤其是最常用的高脂飼養(yǎng)（highfattydiet，HFD）大鼠模型。為了對該模型有更進(jìn)一步地了解以及更深層次把握其運(yùn)用。本文主要通過查閱近10年運(yùn)用此模型造模的文獻(xiàn)，從中收集相關(guān)造模數(shù)據(jù)等資料，得出該模型合理、常用的造模方法。

關(guān)鍵詞：非酒精性脂肪肝；高脂飼養(yǎng)；大鼠模型

1 非酒精性脂肪性肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的研究背景

非酒精性脂肪性肝是指除外酒精和其他明確的肝損害因素所致的，其發(fā)病與遺傳-環(huán)境-代謝等因素相關(guān)，但其發(fā)病機(jī)理至今尚未明確。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為該病病因與嗜食肥甘厚味，多逸少勞有關(guān)，其病位在肝，與脾、腎等臟腑密切相關(guān)。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度看，脂肪肝的發(fā)病機(jī)制主要為肝細(xì)胞中的甘油三酯、極低密度脂蛋白合成和排出不平衡形成。為了對該病進(jìn)行進(jìn)一步研究，研究者們針對該病設(shè)計(jì)出了多種動物模型[1]。目前，國內(nèi)外用于科學(xué)研究的非酒精性脂肪肝動物模型主要分為兩類。而本文主要通過查閱近10年運(yùn)用此模型造模的文獻(xiàn)，從中收集相關(guān)造模數(shù)據(jù)等資料，通過分析探討，得出該模型合理、常用的造模方法，現(xiàn)綜述如下。

2 非酒精性脂肪性肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的應(yīng)用

高脂飼養(yǎng)大鼠模型誘發(fā)脂肪肝是國內(nèi)最常用的非酒精性脂肪肝模型。由于大鼠對膽固醇飼料較易耐受，因而不易形成動脈粥樣硬化病變，但其對營養(yǎng)成分改變敏感，特別是在氨基酸、膽堿等供應(yīng)不足時(shí)，可出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性、壞死等營養(yǎng)缺乏表現(xiàn)，因而是實(shí)驗(yàn)研究的好對象。樊麗琳，陳東風(fēng)等用健康成年雄性8w齡Wistar大鼠，高脂飼料為基礎(chǔ)飼料88%，豬油10%，膽固醇2%造模，分別于第4、8w取肝組織觀察。發(fā)現(xiàn)第4w時(shí)，大鼠肝組織顯示散在肝細(xì)胞脂肪變，細(xì)胞內(nèi)見大泡形脂肪滴，但肝小葉形態(tài)完整，匯管區(qū)界限清楚，無明顯炎性細(xì)胞浸潤。第8w時(shí)，大鼠肝細(xì)胞脂肪變明顯，多為大泡性脂肪變，見部分肝細(xì)胞氣球樣變，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，同時(shí)小葉內(nèi)見局灶性肝細(xì)胞壞死，有明顯淋巴細(xì)胞浸潤[2]。因此，找到該模型的造模主線，在此基礎(chǔ)上根據(jù)需要再進(jìn)一步改善，對我們更全面地掌握該模型的運(yùn)用以及推廣于臨床研究具有重要意義。

3 非酒精性脂肪性肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)

經(jīng)過查閱近10年的文獻(xiàn)，收集運(yùn)用高脂飼養(yǎng)大鼠造模非酒精脂肪肝模型相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)：①非酒精性脂肪肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的造模大鼠的類型有兩種：SD大鼠和wistar大鼠。這也是目前大鼠運(yùn)用于其他實(shí)驗(yàn)比較多的大鼠類型；②對于飼料的的選擇，對照組的飼料均為基礎(chǔ)飼料，雖然不同研究者所用的基礎(chǔ)飼料出自不同場地，但其與模型中所用的高脂飼料配料中的基礎(chǔ)飼料配料是統(tǒng)一的，所有對于基礎(chǔ)對照組中的基礎(chǔ)飼料，也是不存在差異的；③對于飼養(yǎng)時(shí)間，從文獻(xiàn)中發(fā)現(xiàn)有飼養(yǎng)3、4、5w甚至12w。這主要取決于模型所要用于的實(shí)驗(yàn)所需以及高脂飼料的配方；④觀察指標(biāo)和測定方法，文獻(xiàn)中者們觀察的主要有：①一般情況觀察如毛色、食欲動、糞便、對外界刺激的反應(yīng)情況等。②病理組織學(xué)檢查肉眼觀察大鼠肝臟大體變化，并作病理切片HE染色，光鏡下觀察大鼠肝臟脂肪變性情況，其判斷標(biāo)準(zhǔn)詳見《非酒精性脂肪肝診斷標(biāo)準(zhǔn)》（2002-10中華肝病學(xué)會脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組制定）或做蘇丹W染色和電鏡檢查了解肝細(xì)胞內(nèi)脂滴的存在情況。③血清生化指標(biāo)。④肝組織甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）含量的測定等等一些列觀測方法。其中所有模型觀測指標(biāo)中都存在肝臟病理組織學(xué)檢查[3]。

4 非酒精性脂肪性肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的主線

通過資料分析，我們對大鼠高脂飼養(yǎng)模型主線有了較為明確的認(rèn)識。下面就是得出的大鼠高脂飼養(yǎng)模型造模方法的主線：選取適當(dāng)周齡體重的SD大鼠或wistar雄性大鼠若干，分為正常組和模型組。給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)一周后，模型組給予高脂飼料飼養(yǎng)，高脂飼料配方為：膽固醇2%，豬油10%，基礎(chǔ)飼料88%；對照組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)8～12w，根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需可與2、4、8、12w對若干大鼠進(jìn)行處理，進(jìn)行大鼠肝臟病理組織學(xué)檢查和血清生化指標(biāo)觀測[4-5]。以及運(yùn)用相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析如肝組織勻漿指標(biāo)以及血清生化結(jié)果采用的單因素方差分析。有了標(biāo)準(zhǔn)化的造模方法，就能造出想要的模型。

5 結(jié)語

高脂飼養(yǎng)大鼠模型是目前為國內(nèi)外最常用的非酒精性脂肪肝動物模型，模型模擬了人類NAFLD的形成過程及病變特征，還能出現(xiàn)胰島素抵抗、代謝綜合征等全身代謝紊亂表現(xiàn)，病變有漸進(jìn)性發(fā)展過程符合肝臟病變多具有漸進(jìn)性發(fā)展的特點(diǎn)，造模停止后病變逆轉(zhuǎn)緩慢便于藥物干預(yù)研究，且該模型制作方法簡便、重復(fù)性好、價(jià)格低廉、模型復(fù)制率和造模動物成活率均高。是目前研究非酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)理和篩選新藥的一種較好的動物模型。但目前讓研究者們不滿意的是該模型造模時(shí)間較長，為此研究者們也進(jìn)行了各種改造，可仍然沒有沒有得出一個(gè)合理的造模方法。同時(shí)，高脂飼料配方膽固醇、豬油等物質(zhì)，致使飼料性質(zhì)發(fā)生改變，動物易出現(xiàn)厭食、腹瀉，造模所需時(shí)間長、病變輕等不足。另外，該模型還存在不能完全涵蓋人類非酒精性脂肪肝的疾病譜及發(fā)病機(jī)制的不足。因此，希望在今后的研究中研究者們更多地致力于高脂飼料配方的改良，以及探索新的造模方法，使該模型更符合人類疾病的特點(diǎn)及研究的需要。同時(shí)建立統(tǒng)更為統(tǒng)一穩(wěn)定的模型標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)體系，更客觀地反映該模型的復(fù)制率、穩(wěn)定性及科研應(yīng)用價(jià)值。

總之，建立更理想的非酒精性脂肪肝動物模型，為科研提供更高質(zhì)量的研究材料，有助于廣大學(xué)者對非酒精性脂肪肝進(jìn)行更深入的研究，從而盡快闡明其發(fā)病機(jī)制，更好的用于對臨床該類患者進(jìn)行診斷治療以及防止其轉(zhuǎn)變惡化，減輕患者的痛苦，提高患者的生活質(zhì)量。同時(shí)，也有助于人們在日常生過中合理的預(yù)防非酒精性脂肪肝的發(fā)生，做到如《素問.四氣調(diào)神大論》中說：“不治已病治未病；不治已亂治未亂”。從而對該病的預(yù)防診斷治療有更全面的把握，使人類不在受此病困擾，生活更加幸福。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉慶豐，李中東，施孝金，等.高脂血癥非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2013，24（1）：171.

[2]中華肝臟病學(xué)會酒精肝與脂肪肝學(xué)組.非酒精性脂肪性肝病診療指南（2010版）[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2010，19（6）483.

[3]翁小剛，朱曉新，楊慶，等.非酒精性脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（11）：104.

[4]鄭全喜，王昆，劉超.非酒精性脂肪性肝病動物模型的研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜，2013，19（2）：357.

[5]Alina P，Ralucaais，Vlad R.An overview of nonalcoholic steatohepatitis：past，present and puture directions[J].J Gastrointestin Liver Dis，2010，19（4）：415.

編輯/王敏