溶血標本對酶聯免疫吸附試驗檢測乙型肝炎表面抗原影響的分析

摘要：目的 探討溶血標本對酶聯免疫吸附試驗檢測乙型肝炎表面抗原結果的影響。方法 對400份不同的血清標本采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）進行乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的測定，其中陰性標本217份，強陽性標本95份，弱陽性標本88份；用人為方法造成溶血，對溶血標本重新測定，對2次檢測結果進行比較。結果 217例HBsAg陰性標本和95例HBsAg強陽性標本，非溶血標本和溶血標本血清檢測結果（陰性或強陽性）全部一致，非溶血標本和溶血標本血清的HBsAg的OD值無統計學意義；88例HBsAg弱陽性標本，溶血標本血清檢測出現假陽性率為7.95%（7/88），非溶血標本和溶血標本血清的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的OD值具有統計學意義。結論 溶血對乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性及乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強陽性的標本影響不大，而對乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽性標本的檢驗結果具有一定影響，甚至可能造成假陰性。

關鍵詞：乙型肝炎表面抗原；酶聯免疫吸附試驗；溶血標本

ELISA是檢測HBsAg的主要方法，但是，文獻[1]指出，ELISA檢測過程中易受到各種因素影響。溶血是臨床檢驗中最為常見的一種干擾和影響因素，我院通過對400份不同的血清標本采用ELISA進行HBsAg測定，探討溶血標本對ELISA檢測乙型肝炎表面抗原的影響，旨在為臨床提供參考，現報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 隨機抽取400份不同人群的血清標本，樣本中男性241例，女性159例；年齡19～65歲，平均年齡（40.1±5.7）歲；標本中陰性標本本217份，強陽性標本95份，弱陽性標本88份；采用人工方式，即冰凍法使血清標本溶血，再取血清檢測。

1.2 方法

1.2.1人工溶血血清制備 將全部標本放置于-40℃冰箱內，靜置20min后，取出，室溫融化，采用3000r/min離心10min，造成樣本溶血，離心后的溶血樣本上清液Hb濃度為8g/L。

1.2.2 ELISA夾心法檢測HBsAg采用二步法檢測 取出試劑盒，于常溫中放置約30min，在微孔反應條中加入75μL待測標本，取陰、陽性對照組，每陰加入對照組組，各1滴對照液；設立1個空白對照組；37℃避光孵育60min。棄孔內液體，洗板后拍干。每孔加酶結合物1滴，混勻后封板。37℃避光孵育30min。棄孔內液體，洗板后拍干。加顯色劑A、B各1滴，封板，再次于37℃避光孵育約15min，觀察顯色結果。

2 結果

溶血標本經檢測，217例HBsAg陰性標本和95例HBsAg強陽性標本，與非溶血標本檢測結果全部一致，非溶血標本與溶血標本HBsAg的OD值陰性分別為（0.33±0.10）、（0.41±0.21），兩組陰性或強性性檢測OD值對比，結果無統計學意義；但是，在對88例HBsAg弱陽性標本檢測時發現，溶血標本血清檢測7例假陽性，假陽性率為7.95%，非溶血標本和溶血標本血清的HBsAg的OD值分別為（0.34±0.14）、（0.61±0.11），結果對比具有統計學意義（P<0.05）。

3討論

ELISA檢測HBsAg快速、簡便、特異性強、靈敏度高，是各級實驗檢測HBaAg的主要方法，但是，實驗中不可避免會接受到溶血標本，對檢測結果產生影響。

臨床研究指出，樣本溶血后紅細胞內容物，如水、Hb、蛋白質、無機鹽等會對血清有稀釋作用，而細胞釋放出的Hb非特異性吸附于反應孔壁與包被物非特異結合，難以完全被洗脫；分析認為，溶血血清中細細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素作為一種過氧化酶物質，有類似過化酶的活性，這種過氧化酶物質可以還原出原生態氧，從而催化底物四甲基聯苯胺，從而生成可溶性的有色物質，使檢測結果呈藍色，呈陽性狀態，從而易導致標本用ELISA法檢測HBsAg易產生假陽性的現象。

本組采用ELISA檢測HBsAg時發現，溶血標本與非溶血標本在強陽性與陰性方面并無明顯差異，與文獻[2]基本一致，但是，在88例弱陽性標本中，7例檢測出假陽性，表明溶血對檢測結果在臨界陰性的HBsAg產生干擾。王碧玉等研究[3]指出，隨著溶血程度的加深，檢出OD值也不斷升高，表明溶血對ELISA試驗存在干擾作用。

分析認為，血清發生溶血的因素較多，一般來說可分為體外溶血與體內溶血兩種，體外溶血是由物理因素、化學因素、代謝性因素等造成的，物理因素如機械性破壞、冰凍等作用均可能造成，而化學因素如血樣接觸表面活性劑引起；內因素有物理因素，如人工心臟瓣膜或大血管手術后引起的機體物理反應，生物因素，藥物毒性反應等均可能引起溶血。溶血標本不宜做HBsA檢測，通常這類標本被認為是不合格標本，要求重新抽取，這會給臨床工作帶來許多重復性的工作。這種假陽性問題給臨床診斷產生了干擾，可在檢測中采用二步法進行檢測，將血清徹底洗脫掉，減少殘留的過氧化物酶的含量，從而降低假陽性的發生，以保證檢測結果。

總之，通過本組研究表明，溶血雖然對HBsAg強陽性及陰性標本的影響不大，但是對于弱陽性標本檢測結果會產生較大的影響，甚至可能存在假陽性，對臨床診斷帶來一定困難，在臨床操作上應給予重視，應嚴格按操作流程執行，盡量采用二步法減少假陽性干擾的問題。

參考文獻：

[1]王靜.酶聯免疫吸附試驗法檢測乙型肝炎病毒表面抗原的影響因素分析[J].檢驗醫學與臨床，2010，4（7）：671-672.

[2]白占杰.論酶聯免疫吸附試驗中影響因素及解決方法[J].實驗與檢驗醫學，2012，4（30）：185.

[3]王碧玉，黃芳.溶血對臨界陰性HBsAg結果的影響及抗溶血因素干擾的研究[J].文廣西醫學，2011，9（33）：1174-1175.

編輯/許言