淺析HPLC法測定諾氟沙星膠囊有效成分的含量

摘要：目的改進諾氟沙星膠囊含量HPLC測定。方法HPLC法，色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相：0.025mol/l的磷酸溶液（用三乙胺調節PH值至3.0±0.1），乙睛（80：20）；柱溫為室溫；流速0.800ml/min，檢測波長278nm。結果優化色譜條件后出峰時間提早而且穩定性好，測得的諾氟沙星膠囊的含量符合要求。結論色譜條件的改變增強了系統適應性，可作為改進后的測定諾氟沙星膠囊的含量的方法。

關鍵詞：HPLC法;諾氟沙星膠囊;含量測定高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。注入的供試品由流動相帶入柱內，各成分在柱內被分離并依次進入檢測器，有記錄儀、積分儀或數據處理系統記錄色譜信號。色譜系統的適應性實驗通常包括理論板數、分離度、重復性和拖尾因子等四個指標。按各品種項下要求對色譜系統進行適用性實驗，即用規定的對照品對色譜系統進行實驗，應符合要求。如達不到要求，可對色譜條件適當的調整。

以外標法測定供試品中某個雜質或主成分含量時，按各品種項下得規定，精密稱(量)取對照品和供試品配制成溶液，分別精密取一定量注入儀器并記錄色譜圖，測量對照品溶液和供試品溶液中待測成分得峰面積或峰高，按下式計算含量:含量(cx)=cR*AX/AR式中AX為供試品或其雜質峰面積或峰高;cx為供試品或其雜質的濃度;cR為對照品的濃度;AR為對照品的峰面積或峰高。由于微量進樣器不易精確控制進樣量，當采用外標法測定供試品中某雜質或主成分含量時以定量環或自動進樣器進樣為好。

1實驗部分

1．1儀器與試藥Agilent1200高效液相色譜儀，含四元梯度泵、自動進樣器、VWD檢測器、KQ-250DB型數控超聲波清洗機及隔膜真空泵，有機聚偏氟乙烯微孔濾膜，酸度計，諾氟沙星膠囊（批號070314070208），諾氟沙星對照品（批號130450-200304），磷酸，三乙胺，乙腈，水為二次蒸餾水及其它試劑均為分析純。

1．2溶液的制備及色譜條件

1．2．1供試品溶液的制備取20粒諾氟沙星膠囊的內容物混合均勻，精密稱取細粉25.00mg置100ml量瓶中并加0．1mol/L鹽酸溶液2ml使溶解后，加水稀釋至刻度搖勻并濾過，精密量取續濾液5ml置50ml量瓶中并加流動相80：20稀釋至刻度，搖勻即得。精密量取20ul注入液相色譜儀并記錄色譜圖。

1．2．2對照品溶液的制備精密稱取諾氟沙星對照品25.00mg同供試品溶液的制備即得。流動相比例采用在線調比例。

1．2．3色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，柱溫為室溫；流速是0.8ml/min檢測波長是278nm；流動相磷酸溶液并用吸量管量取磷酸15mol/l約1.67ml，置1000ml容量瓶中用水定容至刻度并搖勻，即得濃度為0.025mol/l的磷酸溶液。倒入大燒杯中用三乙胺調節PH值至3．0±0.1。抽濾足量的乙腈并用數控超聲機超聲磷酸溶液乙腈30min。

1．3實驗方法

1．3．1優化流動相比例把流動相（磷酸溶液和乙腈）分別調至以下比例90：10、87：13、85：15、80：20，各比例流動相下精密量取20ul對照品溶液注入液相色譜儀連續進兩次并記錄色譜圖。

1．3．2重復性把流動相（磷酸溶液和乙腈）的比例調至80：20精密量取20ul對照品溶液注入液相色譜儀連續進五次并記錄色譜圖。

1．3．3線性分別精密量取供試品溶液1ml、2ml、3ml、4ml置于4個50ml量瓶中用80：20的流動相定容至刻度搖勻即得濃度分別為0.005mol/ml、0.01mol/ml、0.015mol/ml、0.02mol/ml及0.025mol/ml的供試品溶液，各精密量取20ul注入液相色譜儀每種供試品溶液連續進兩次并記錄色譜圖。

1．3．4樣品含量測定精密稱取樣品(070314070208)，精密量取20ul依法測定并用外標法計算諾氟沙星膠囊的含量。

2結果

2．1優化流動相比例結果在其他色譜條件不變的前提下通過設定4種流動相的比例（90：10、87：13、85：15、80：20）對同一對照品溶液進行HPLC的測定。并記錄各比例流動相下的出峰時間、峰面積、峰高、峰高及塔板數。

2．2重復性結果實驗中設定流動相比例為80：20，對照品溶液做了5次HPLC測定并記錄在此比例流動相下的出峰時間、峰面積、峰高、峰寬、塔板數及峰面積百分比。

2．3線性結果把供試品溶液的儲備液稀釋配制成濃度分別為0.005mol/ml、0.01mol/ml、0.015mol/ml、0.02mol/ml、0.025mol/ml的供試品溶液對5種濃度的溶液分別進行HPLC的測定。

2．4樣品含量測定結果實驗設定兩個平行樣即供試品1、供試品2每個供試品連續進樣三次。

3討論

3.1結論通過對改變流動相比例能否增強系統適應性的實驗，證明把流動相比例調到80：20能夠增強系統適應性使出峰時間提早約10min，而且出峰穩定、峰寬變小及峰形好看。因此本實驗方法可作為改進后的HPLC法測定諾氟沙星膠囊的含量的方法。

3.2優化流動相比例從實驗結果可以看出隨流動相中有機相所占比例的增大，出峰時間在縮短、峰寬變小及峰高變大而塔板數和峰面積基本相同。查有關資料可知如果出峰時間<5min，會有溶劑峰的干擾，流動相中有機相所占的比例不宜再增大，故考慮到出峰時間把流動像的比例控制在80:20比較合適。

3.3復性從實驗結果可以看出在流動相比例為80：20時，出峰時間、峰面積、峰高、峰寬及塔板數都比較穩定；RSD%=0.33%<2.0%，說明流動相比例控制在80：20增強了系統適應性。

3.4線性從實驗結果可以看出，響應值跟被測物濃度程線性關系，其線性系數達到0．9995符合規定。

3.5樣品含量測定本品含諾氟沙星(C16H18FN3O3)應為標示量的90.0%~110.0%從實驗結果可以看出108.2%、108.3%符合規定。

綜上所述，把流動相比例調到80：20增強了實驗的系統適應性，使出峰時間提早約10min而且出峰穩定、峰寬變小及峰形好看。因此，本實驗方法可作為改進后的HPLC法測定諾氟沙星膠囊的含量的方法。

參考文獻:

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[2]實用高效液相色譜法的建立（第二版）（美）L·R·森德爾J·J柯克蘭J·L·格萊吉克著，2001：28~30705~708.編輯/孫杰