食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定方法的效果分析

摘要：目的 比較分析在食品微生物學中檢驗菌落總數(shù)時用到的平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測試片法檢驗方法以及TTC培養(yǎng)基3種測定方法的檢測效果，以達到提高食品菌落總數(shù)檢驗的檢出率和靈敏度的目的。方法 對需要測定的153個樣品，按照國家相關標準采用標準平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測試片法檢驗方法和TTC培養(yǎng)基法進行培養(yǎng)，培養(yǎng)一段時間后記錄菌落檢出數(shù)。結果 在測定的153個樣品中，標準平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測試片法和TTC培養(yǎng)基法三種測定法中合格的份數(shù)分別為137、129、126，三中測定方法之間無顯著性差異（P＞0.05）。結論 三種測定方法進行食品微生物學檢驗，得到的效果相當，但是TTC培養(yǎng)基法的檢出率和靈敏度要明顯優(yōu)于其他兩種測定方法。

關鍵詞：菌落總數(shù)檢驗；標準平板菌落計數(shù)法；菌落總數(shù)測試片法檢驗方法；TTC培養(yǎng)基法對食品中的細菌總數(shù)進行微生物學檢驗，目前常采用的方法主要有兩種，一種是測試紙片法，另一種是計數(shù)瓊脂傾注皿培養(yǎng)計數(shù)法[1]。然而在實際的檢測工作中，送檢樣品中常出現(xiàn)含有一些體積較小的沉渣和顆粒等物質，它們不容易被乳化，在傾倒瓊脂時常隨著培養(yǎng)基一起注于培養(yǎng)皿中，并夾雜在瓊脂深層，形態(tài)與細菌菌落類似，因此容易與細菌菌落發(fā)生混淆從而不利于準確檢測樣品中的菌落總數(shù)，對檢測結果造成一定影響。因此，在本研究中選取了標準平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測試片法檢驗方法和TTC培養(yǎng)基法（在計數(shù)培養(yǎng)基中加入0.5%的氯化三苯四氮唑，即TTC，作為染色劑，對菌落進行染色）3種方法對送檢的153個樣品進行細菌總數(shù)測定，比較3中方法的檢出效果，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1測定材料

1.1.1平板計數(shù)瓊脂選用國內(nèi)某廠家生產(chǎn)的處于有效期內(nèi)的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基。

1.1.2菌落總數(shù)測試片選用國內(nèi)某廠家生產(chǎn)的處于有效期內(nèi)的菌落總數(shù)測試片。

1.1.3 TTC瓊脂按照體積比100:1的比例在瓊脂中加0.5%的氯化三苯四氮唑（TTC），的瓊脂中的TTC濃度為0.005%。

1.2測定樣品所有的153個測定樣品均來源于我中心所轄區(qū)域內(nèi)的食品加工廠企業(yè)。

1.3方法

1.3.1平板標準平板菌落計數(shù)法1：10樣品母液的配制：首先準備一定數(shù)量的內(nèi)盛有225ml磷酸緩沖液的三角瓶，瓶內(nèi)預裝適當數(shù)量的玻璃珠，用滅過菌的無菌移液管吸取25ml待檢樣品，輕微振搖、混勻三角瓶內(nèi)液體。1:100樣品母液的配制：用移液器吸取配制的1:10樣品母液1ml，沿著試管壁緩慢注入預先盛有9ml稀釋液的無菌試管中，輕微振搖、混勻試管內(nèi)液體。以同樣的方法，配制1:1000，1:10000的樣品母液。注意在配置過程中，各個濃度梯度所用的無菌槍頭不能重復使用，以防止交叉污染。根據(jù)待檢樣品受到污染的程度，選擇1～3個適宜濃度的樣品母液，每個濃度梯度均吸取1ml樣品母液與無菌的培養(yǎng)皿中，同時取1ml樣品母液于兩個無菌的培養(yǎng)皿中作為空白對照。并立即將事先準備好的瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，在37℃條件下倒置培養(yǎng)48h。

1.3.2菌落總數(shù)測試片法將事先準備好的測試片置于水平臺面上，將紙片上附著的薄膜去掉，從上述4個濃度梯度的樣品母液中選取1～3個適宜濃度的母液，用移液器吸取1ml的樣品原液或者稀釋后的母液均勻地加至測試片的中間位置，并蓋上上蓋膜，靜置1min待培養(yǎng)基凝固，并用壓板的平板將紙片壓緊，使樣品分布均勻，每一個濃度梯度接種2片[2]。37℃條件下培養(yǎng)48h。

1.3.3 TTC培養(yǎng)基法吸取0.5%的TTC溶液1ml于100ml瓊脂培養(yǎng)基中，制成0.005%的TTC瓊脂培養(yǎng)基，其余接種步驟和培養(yǎng)方法同平板標準平板菌落計數(shù)法。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS 17.0 軟件包對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料采用χ2檢驗，P＜0.05為具有統(tǒng)計學差異。

2結果

標準平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測試片法檢驗方法和TTC培養(yǎng)基法三種測定法中合格的份數(shù)分別為137、129、126，TTC培養(yǎng)基法與標準平板菌落計數(shù)法和菌落總數(shù)測試片法相比，檢出的菌落數(shù)均不存在統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。見表1。

3討論

隨著人們生活水平的改善，食品安全問題也越來越受到人們的重視，特別是近年來我國食品安全問題多發(fā)，更將食品衛(wèi)生問題推到了風口浪尖之上。食品在加工、貯存、運輸過程中都有可能接觸到各種微生物，從而導致食品變質，給人的身體埋下重大健康隱患。因此，對食品中的微生物數(shù)量進行檢測是十分必要的，摸索探究微生物檢測的新手段也具有十分重要的意義。

本研究中，TTC培養(yǎng)基法菌落與標準平板菌落計數(shù)法和菌落總數(shù)測試片法相比，檢出率較高。這主要是因為部分細菌體積小或者生長于瓊脂內(nèi)部，用肉眼難以觀察到，從而導致計數(shù)不準確。由于大多數(shù)細菌都含有脫氫酶，TTC作為一種氫受體可以接受脫氫酶脫下的氫，并且顏色由白色變成紅色，從而可以達到對細菌進行染色的目的，有利于檢驗人員準確有效地對細菌菌落數(shù)進行觀察和計數(shù)。在本研究中，運用3種方法檢測食品中的菌落總數(shù)，差異不具有統(tǒng)計學意義，這說明TTC培養(yǎng)基法能夠特異地使細菌著色而食品殘渣仍然保持原來的顏色不變，并且對細菌的生長情況也不會產(chǎn)生影響，便于菌落的鑒別。

綜上所述，TTC培養(yǎng)基法檢測食品中的菌落總數(shù)具有速度快、靈敏度高的優(yōu)點，值得廣泛推廣。

參考文獻：

[1]Turner KM．Efficacy of chromocult coliform agar for coliform and escherichia coil detection in foods［J］．J Food Port，2002，63(4)：539-547.

[2]Gunasekera TS，Attfield PV，Veal DA.A flow cytometry method for rapid detection and enumeration of total bacteria in milk［J］．Appl Environ Microbiol，2000，66(3)：1228-1232．

編輯/哈濤