特發性血小板減少性紫癜患者的血小板研究進展

摘要：特發性血小板減少性紫癜是一組免疫介導的血小板過度破壞的出血性疾病，是臨床上最常見的出血性疾病，目前其發病機制和實驗室診斷方法仍是國內外研究重點，本文就其現有的特殊實驗室診斷技術作出綜述。

關鍵詞：ITP；實驗室診斷；自身抗體；蛋白組學特發性血小板減少性紫癜(Idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP)是一組免疫介導的血小板過度破壞的出血性疾病，以廣泛皮膚出血及內臟出血、血小板減少、骨髓巨核發育障礙、血小板生存時間縮短及血小板膜糖蛋白特異性自身抗體出現為特征[1]。由于ITP早期并無特征性表現，且缺乏特異性的實驗室診斷方法，當前， ITP的診斷主要依據臨床表現和骨髓檢查 [2]。因此，ITP的早期診斷一直是醫學界的難題。近年來，國內外學者試圖通過檢測ITP患者的血小板來研究建立ITP的實驗室診斷方法，而血小板蛋白組學方法更是近年來的研究熱點。本文擬就近幾年針對ITP患者血小板的最新研究作一綜述。

1ITP概述

ITP是臨床最為常見的出血性疾病， 歐美國家統計年發病率為(5～20)/10萬[2]，而我國目前尚缺乏準確流行病學資料，其診斷依據（ICD-10）是：①廣泛出血累及皮膚、黏膜及內臟；②多次化驗血常規血小板計數減少；③脾臟不大或輕度增大；④骨髓巨核細胞數量增多或正常，伴有成熟障礙；⑤具備以下五項之中一項者：⑴潑尼松治療有效；⑵脾切除治療有效；⑶PAIg陽性；⑷PAC3陽性；⑸血小板生存時間縮短；⑥排除繼發性血小板減少癥。ITP的病因及發病機制迄今未明，目前研究多認為其與體液免疫[2-4]、細胞免疫[5，6]有關。

2ITP患者的血小板抗體

50%~70%的 ITP患者血漿和血小板表面都可以檢測到血小板膜糖蛋白特異性的自身抗體。目前認為自身抗體致敏的血小板被單核巨噬細胞系統過度吞噬破壞是ITP發病的主要機制。正常血小板平均壽命為7~11d，而ITP患者血小板的壽命僅40~230min。因為脾臟含有大量的巨噬細胞，可產生高濃度的抗血小板抗體，且血流緩慢可阻留抗體被覆的血小板，因此脾臟成為血小板破壞的主要場所。肝臟和骨髓也是血小板破壞的場所。慢性ITP血小板破壞是由于抗血小板抗體與其相關抗原結合后，被巨噬細胞吞噬所致。急性ITP血小板破壞是由于病毒抗原吸附于血小板表面，并與相應的抗病毒抗體結合，導致血小板被破壞。

2.1 ITP患者的血小板特異性自身抗體ITP被公認為自身免疫性疾病，其患者體內存在著針對血小板的特異性抗原的自身抗體，發現這些特異性抗體必然有助于ITP的診斷。但是，由于血小板自身固有的特性，血小板表達IgG的Fc受體(FcrR 1I型)在每個血小板上大約有1000~2000個，相對較大數量的非特異性結合抗體干擾血小板特異性抗體水平的檢測，使得特異性抗體的實驗室檢測的特異性低[8]。

近年來國內外發展了一系列關于ITP血小板自身特異性抗體檢測的方法，其中以單克隆抗特異性俘獲血小板抗原試驗（Monoclonal antibody immobilization ofplatelet antigen assay，MAIPA）為主要代表。MAIPA的原理是固相化的抗血小板單抗與血小板上相應的抗原決定簇結合后能將后者固相化，然后加入酶標記的另一種抗血小板抗體與固相化的血小板上相應為點結合并顯色，顯色的深淺與血小板抗體的濃度呈正比[10]。MAIPA法檢測血小板特異性抗原特異性的自身抗體特異性較高，對于免疫性與非免疫性血小板減少的鑒別具有較大的意義，有助于ITP的診斷。王述文[11]等利用MAIPA法檢測了70例血小板減少性紫癜患者的自身抗體，結果發現免疫性血小板減少患者顯著高于非免疫性血小板減少患者。王謙[12]等應用改良MAIPA試驗雙盲法檢測患者血小板膜糖蛋白特異性自身抗體，發現ITP患者血小板特異性抗體陽性率顯著高于非免疫性血小板減少患者，血小板特異性抗體水平與血小板數量呈負相關。

但是MAIPA仍存在不足之處，首先不能鑒別特發性血小板減少與繼發性免疫性血小板減少，如ITP與系統性紅斑狼瘡、干燥綜合癥等的鑒別診斷；其次國內外各實驗室的方法有差異，未制定統一標準。因此MAIPA在臨床上的應用仍受限制。

2.2 ITP患者的血小板相關抗體上世紀70年代，血小板相關免疫球蛋白（platelet associated immunoglobulin，PAIg）被認為是ITP診斷和預后判斷的重要指標。PAIg是病理性免疫反應所產生的針對血小板膜糖蛋白II b/Ilia、Ib/IX、Ia/II a等抗原的自身抗體，其中以PAIgG最為常見。PAIgG的檢測分為直接法和間接法，直接法測定血小板PAIgG（包括血小板表面及血小板溶解液），間接法檢測血清中的PAIgG。PAIgG檢測方法繁多，如血小板懸浮免疫熒光試驗、；125F葡萄球菌蛋白A試驗等，其中發展較為成熟的是酶聯免疫吸附試驗（ELISA）及流式細胞技術，也是使用最多的PAIgG檢測技術。ELISA法運用直接法測定PAIgG，血小板內免疫球蛋白和血漿中免疫球蛋白濃度均對其產生影響，可檢出較多的非特異性抗體。近年來流式細胞術對于PAIgG的檢測陽性率雖高，但特異性太低，因此對ITP的診斷無實質性意義[9]。

3ITP的血清蛋白組學

國內外已將蛋白組學用于血小板減少性紫癜疾病中，血栓性血小板減少性紫癜的血清蛋白組學研究發現其發病與血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS-13）活性有關。Jin M[18]等采用SELDI-TOF-MS技術分析了16例患者，發現ADAMTS-13活性為（1.73±3.62）%，而39例健康者的ADAMTS-13活性為（92.5%±16.6）%，從而為血栓性血小板減少性紫癜的快速診斷提供了一種可借鑒的檢測方法。劉春燕等[19]也曾利用SELDI技術尋找到是質荷比為4121.27 5327.56 5890.56的ITP的血清差異蛋白，但由于血清中高表達蛋白如白蛋白、球蛋白可能使其中低豐度表達蛋白受到抑制，使得其差異性蛋白運用于ITP診斷的影響因素較多，為其診斷模型的建立帶來困難。

4ITP的血小板蛋白組學研究

在ITP的發病過程中，血小板膜抗原性發生改變是疾病的根本所在，而且血小板無細胞核，比其他有核細胞及血清的蛋白成分簡單。所以，ITP的血小板差異蛋白組學研究必將為ITP的實驗室診斷研究掀開嶄新的一頁。Maguire PB 等[20]認為蛋白組學作為基因組學的補充，血小板蛋白組學對于無核細胞-血小板生理病理功能的了解具有極其重要的作用。Ofer Eidelman 等[21]運用質譜在血小板蛋白裂解液中找到一組具有性別差別的低豐度信號肽，而這組性別差異的低豐度信號肽差異與女性和男性之間心血管疾病患病正相關。E. maurer-spurej等[22]運用質譜法分析血小板蛋白組學，發現灰色血小板綜合癥-Quebec血小板疾病患者血小板存在15種正常人沒有的蛋白質，而正常人則有23種Quebec血小板疾病患者缺乏的蛋白質，從而建立了第一個運用血小板蛋白組學來診斷疾病的方法。

5展望

正如其它細胞一樣，血小板中蛋白質的變化能為我們提供疾病的新的診斷和治療途徑。多年來ITP無確切的實驗室診斷方法，導致其在臨床上早期診斷存在困難，我國衛生部曾就ITP的診斷問題在官網上公開招標(500萬)課題以建立ITP的實驗室診斷方法，但至今仍無實質性進展。ITP作為一種自身免疫性疾病，其血小板蛋白質成分及數量必然存在一定的改變，但是現目前國內外相關研究較少。因此，如何發現這些蛋白質的改變就成了我們今后的研究重點。血小板蛋白組學作為一門新興的蓬勃發展的學科必將為ITP的診斷掀開嶄新的一頁。表面增強激光解析電離飛行時間質譜技術(SELDI-TOF-MS）可直接對血液、尿液、腦脊液、細胞裂解液等樣品進行檢測，可發現和捕獲新的特異性疾病相關蛋白，從而探索疾病早期最微小的指征和征兆。因此，通過比較不同疾患者群血小板裂解液蛋白質，可能篩選出ITP相關蛋白標志物。

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編輯/哈濤