無醛固定液在病理技術中的應用價值

【摘要】目的分析病理技術中無醛固定液的應用價值。方法選擇我院臨床送檢的組織活體標本61例進行研究，每種組織分別取2塊，采用甲醛固定液和GS無醛固定液固定組織，進行免疫組化染色，觀察免疫組化染色效果。結果采用傳統(tǒng)甲醛固定液固定的一組，液面較渾濁，且組織上浮，而采用GS無醛固定液固定的一組，液面清亮，組織沉底，且變硬、變白，具有較好的連續(xù)性；免疫組化染色效果顯示，無醛固定液的標本組織細胞抗原性保存較好，背景清晰，且陽性結果定位較準確。結論無醛固定液的免疫組化染色效果與甲醛固定液基本一致，在某些組織中還優(yōu)于甲醛固定液，同時固定有效時間要長于甲醛固定液，因此在病理檢查中可用無醛固定液代替甲醛固定液。

【關鍵詞】病理技術；無醛固定液；甲醛固定液

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.05.060文章編號：1004-7484（2014）-05-2453-02在病理診斷中傳統(tǒng)應用較多的是甲醛固定液，但是甲醛固定液的毒性較大，對人體危害嚴重。無醛固定液是近年來病理診斷中逐漸應用的新型固定液，其免疫組化染色效果較好，且能保證組織細胞的完整性，是病理診斷中較為理想的固定液。為了探討無醛固定液在病理技術中的應用價值，本文選擇我院臨床送檢的61例組織標本，分別用甲醛固定液和無醛固定液固定后，對免疫組化染色效果進行對比，報告如下：

1資料和方法

1.1一般資料選擇我院2009年——2012年臨床送檢的組織活體標本61例進行研究，其中11例結腸癌組織，9肺癌組織，13例乳腺癌組織，12例淋巴癌組織，10例卵巢癌組織，6例前列腺癌組織。

1.2方法

1.2.1試劑每種組織分別取2塊，組織大小為2×1×0.2cm，將每種組織分別納入兩組中，采用甲醛固定液和GS無醛固定液固定組織。試劑：GS無醛固定液、脫水液、浸蠟液、無苯透明液全部由（哈爾濱格林標本技術開發(fā)有效公司）提供。甲醛、二甲苯試劑則由（北京益利精細化學品有限公司）提供。另外，在試驗中所需的RPR、HER-2、CAl99、LCA、CD20、CD45RO、EGFR、CK、p53、CAl25等即用型單克隆抗體由（福州邁新生物技術開發(fā)有限公司）提供。

1.2.2固定方法①GS無醛固定液固定方法：無醛固定液Ⅰ和無醛固定液Ⅱ分別固定1h和3h，之后用脫水液脫水1h，無苯透明液透明1.5h，浸蠟液1.5h，石蠟包埋，常規(guī)切片，切片厚度為5μm。②甲醛固定：采用4%的甲醛液將組織分別固定2h，之后用80%的乙醇脫水1h，無水乙醇脫水1h，二甲苯透明1.5h，浸蠟液1h，石蠟包埋后常規(guī)切片，厚度為5μm。

1.2.3免疫組化染色將兩種固定液固定的切片各取一張，切片先進行脫蠟，然后用3%的H2O2室溫孵育10min，用蒸餾水洗3次，每次3min，用高壓鍋修復，溫度為140℃，時間為2.5min，之后PBS洗3次，每次5min，加抗工作液1滴，在37℃下孵育2h，再次PBS洗3次，每次5min，加入Max VisionTM試劑，37℃下孵育30min，再次PBS洗3次，DAB顯色，用蒸餾水沖洗，蘇木精復染核1min后，分化返藍，乙醇脫水，二甲苯透明，用中性樹膠封固。根據組織標本進行免疫組化染色。對同一種組織采用不同固定液固定方法得到切片的免疫組化染色效果進行對比。

2結果

經對比，采用傳統(tǒng)甲醛固定液固定的一組，液面較渾濁，且組織上浮，而采用GS無醛固定液固定的一組，液面清亮，組織沉底，且變硬、變白，具有較好的連續(xù)性；免疫組化染色效果顯示，無醛固定液的標本組織細胞抗原性保存較好，背景清晰，且陽性結果定位較準確。

3討論

在病理診斷中免疫組化染色是非常重要的工具，當前大部分的病理診斷均需要通過免疫組化染色。在以往免疫組化染色過程中，結果不穩(wěn)定情況經常出現，近年來隨著免疫試劑質量的提高和免疫組化染色操作自動化的發(fā)展，該狀況有了一定改善，但是結果不穩(wěn)定情況依然存在。對免疫組化染色結果穩(wěn)定性產生影響的重要方面就是組織的固定質量，該步驟是實驗室檢測中的最初的一步，也是最關鍵的一步，通過對病理切片制作質量的影響來影響免疫組化的結果，固定液是該操作中必不可少的，而固定液的質量和性質對切片質量產生影響[1]。

在以往病理組織切片制作過程中應用較多的是甲醛固定液，除了具有較高的毒性之外，它具有較強的滲透性，組織收縮小，固定均勻，廉價以及保存組織結構好的優(yōu)點，因此在病理診斷中應用較多，但是甲醛固定液也存在較大的缺點：首先其揮發(fā)性較強，保存要求高，具有強烈的腐蝕性和刺激性，釋放到空氣中對環(huán)境的污染嚴重，根據相關的醫(yī)學研究，人體直接接觸甲醛可能會引發(fā)濕疹、過敏和皮炎，另外眾所周知，甲醛具有致癌性，人長期生活在甲醛環(huán)境中，則罹患各種癌癥和呼吸道疾病的可能性增高；甲醛的存放要求高，當存放時間夠長，則會產生白色沉淀，在標本制作中應用會影響固定效果；甲醛氧化活性較高，容易氧化為甲酸，導致整個溶液呈酸性，固定后標本也變?yōu)樗嵝裕诩毎巳旧珪r，對其效果產生影響，同時在固定肝、脾等的陳舊組織時，甲醛容易形成甲醛色素，與含鐵血黃色混合，直接影響到病理診斷效果；甲醛固定液用完之后的處理難度較大，需要特殊處理，廢液不能直接從下水管道排出，處理成本較高[2]。

鑒于甲醛固定液存在的缺陷，在醫(yī)學研究中，研究人員在不斷尋找甲醛固定液的替代品，我國研究人員經過長期的研究，研制出了GS無醛固定液，該固定液最明顯的特點就是環(huán)保，除了無色、無刺激性、低揮發(fā)性、對環(huán)境危害較小之外，還具有如下優(yōu)點：具有較強的滲透性，有效縮短了切片制作中脫水時間；具有較好的固定、脫水、脫脂、硬化等作用，減少了組織在制作中出現收縮、空泡、核固縮等；除了能保護組織形態(tài)學結構之外，還能保證細胞膜的完整性；用無醛固定液制作的標本易于分離，能有效清除脂肪組織，無需過多的清潔；減少了組織中抗原和核酸被破壞；能較為完整的保存RNA和DNA，可清除顯示細胞的內部結構，便于進行標本精細化研究；無醛固定液的處理較為簡單，以乙醇廢液處理方法相似[3]。

在本組研究中，同一標本采用無醛固定液和甲醛固定液，在相同的免疫組化條件下，在免疫組化染色效果中兩者基本一致，在部分切片中，無醛固定液組的免疫組化染色效果要優(yōu)于甲醛固定液組。另外在部分研究中對甲醛固定液和無醛固定液的固定時間進行了研究，當固定時間在30d以內，甲醛固定液與無醛固定液的免疫組化染色效果無差異（p>0.05），但是當固定時間超過60d后，相比于甲醛固定液組，無醛固定液組的免疫組化陽性結果呈現較大的優(yōu)勢（p<0.05），待到兩組固定時間均超過120d，則發(fā)現免疫染色效果差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05），說明了無醛固定液固定時間在120d內不會對免疫組化染色效果產生影響，而甲醛固定液則只在60d內不會對免疫組化染色效果產生影響。

綜上所述，無醛固定液的免疫組化染色效果與甲醛固定液基本一致，在某些組織中還優(yōu)于甲醛固定液，同時固定有效時間要長于甲醛固定液，因此在病理檢查中可用無醛固定液代替甲醛固定液。

參考文獻

[1]潘黎明.環(huán)保型無醛固定液與甲醛固定液對免疫組化染色的效果比較[J].現代實用醫(yī)學，2013，25（5）：583.

[2]田玉旺.GS無醛固定液與甲醛固定液對免疫組化染色結果的影響[J].診斷病理學雜，2013，20（6）：363.

[3]謝水強.無醛固定液在病理技術中的應用[J].診斷病病理學雜志，2011，14（2）：34.