不同采收期蒙藥庫頁懸鉤子中總皂苷的含量測定

王寶珍 ，解紅霞，烏日寧，孫冉冉

（1.內蒙古醫科大學藥學院，內蒙古 呼和浩特 010110； 2.內蒙古醫科大學附屬醫院藥劑部，內蒙古 呼和浩特 010059）

庫頁懸鉤子為薔薇科庫頁懸鉤子 Rubus sachalinensis Leveille的干燥莖，又名懸鉤子木，蒙藥名甘達嘎日[1]。從懸鉤子屬藥用植物中分離得到多種化學成分，主要包括黃酮類、萜類、生物堿類、甾體類、醌類(少量)、有機酸類及鞣質類[2－4]。萜類化合物是懸鉤子屬藥用植物的主要化合物類型。目前己對30余種同屬植物的化學成分進行了研究，報道了60余種三萜（苷）化合物，其母核主要為烏蘇烷型和齊墩果烷型，少數為羽扇豆烷型[5]。蒙藥治感冒、咳嗽、頭痛藥方中大多以庫頁懸鉤子為主藥或配伍有庫頁懸鉤子，為蒙醫常用藥[6－7]。吳香杰等[8]報道了庫頁懸鉤子的總黃酮含量測定方法，但有關庫頁懸鉤子總皂苷的含量測定未見報道。筆者建立了該藥材總皂苷的含量測定方法，并比較了不同采收期總皂苷的含量差異，確定了最佳采收期。

1 儀器與試藥

ESJ200－4型電子分析天平（沈陽龍騰電子有限公司）；HHS4型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）；TU－1901型雙光束紫外可見分光光度計（北京普析儀器有限責任公司）；IKA－RV10型旋轉蒸發儀（德國）。庫頁懸鉤子采集于內蒙古呼和浩特市小井溝，由內蒙古醫科大學藥用植物教研室喬俊纏教授鑒定；齊墩果酸對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號為20120228）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

精密稱取齊墩果酸對照品2.74mg，加無水甲醇溶解為每1.0 mL含齊墩果酸0.548mg的溶液，搖勻即得對照品溶液。精密稱取藥材 0.5 g，置圓底燒瓶，用70%乙醇30 mL回流提取3次，每次2 h，合并濾液濃縮旋蒸，轉移至分液漏斗，用石油醚等體積萃取3次，將下層濃縮至25 mL，精密吸取10 mL，用水飽和正丁醇萃取3次，每次10 mL，靜置，棄去水層，合并正丁醇，將正丁醇溶液減壓蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉移至10 mL容量瓶，即得供試品溶液[9]。

2.2 測定波長選擇

懸鉤子屬的三萜類化合物其母核主要為烏蘇烷型和齊墩果烷型，據其特點，選擇齊墩果酸為對照品，用5%香草醛－冰乙酸和高氯酸染色，采用分光光度法進行比色測定。在200～800 nm波長范圍進行光譜掃描，光譜圖見圖1。對照品和樣品在547 nm波長處均有明顯吸收，故選547 nm為測定波長。

圖1 紫外吸收光譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取齊墩果酸對照品溶液0.02，0.06，0.2，0.4，0.6，0.8 mL 置具塞試管中，水浴揮干溶劑，依次加入0.2 mL 5%香草醛－冰醋酸溶液、0.8 mL高氯酸，搖勻，于60℃水浴加熱15 min，取出迅速冷卻，終止反應。加入5 mL乙酸乙酯，搖勻，于547 nm波長處測定吸光度。以吸光度(Y)對齊墩果酸對照品取樣量(X)進行回歸分析，得回歸方程 Y＝6.77 X－0.022 1，（R2＝0.999 2），齊墩果酸進樣量在 0.010 96 ～0.438 40 g/L 范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液0.1 mL，按擬訂方法在547 nm波長重復進樣6次，分別測定吸光度值。結果的 RSD為0.22%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密量取同一供試品溶液0.5 mL，按擬訂方法分別配置溶液后于 0，15，30，45，60，75 min 時進樣，測定吸光度值，結果的 RSD為0.31%，表明樣品溶液在75 min內穩定，符合含量測定要求。

重復性試驗：取樣品 6份，每份約 0.5 g，精密稱定，按 2.1項下方法制備樣品溶液，按擬定方法測定吸光度值，計算含量。結果的 RSD為1.28%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的供試品粉末約0.25 g，精密稱定 6 份，加入質量濃度為 1.01 g/L 的標準品 1.75 mL，按 2.1 項下方法制備樣品溶液，精密吸取0.5 mL，按擬訂方法測定吸光度值，計算回收率，結果見表1。

表1 總皂苷加樣回收試驗結果（n＝5）

2.4 樣品含量測定

對5批不同采收期樣品，按2.1項下方法制備樣品溶液，按擬訂方法測定吸光度，計算含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝3）

本試驗通過加熱回流提取法對5批庫頁懸鉤子進行了總皂苷含量測定，其總皂苷含量均較高，其中9月的樣品含量最高，可初步認為9月為蒙藥庫頁懸鉤子的最佳采收時期。

3 討論

對空白試劑作為參比溶液，以及加顯色劑的空白溶劑作為參比溶液分別進行了考察，并與供試品溶液的測定結果進行了比較。結果表明，加顯色劑的空白溶劑作參比溶液的色譜圖較好，故選用加顯色劑的空白溶劑作為參比溶液。參考文獻[10]選用70%乙醇為提取溶劑，分別對熱回流、冷浸、超聲提取3種方法進行了對比。結果表明，熱回流提取方法提取較為完全，總皂苷含量較高，故選用熱回流方法提取供試品溶液。在萃取過程中，進行了2種萃取方法的考察，即采用正丁醇萃取和水飽和正丁醇萃取。考察結果表明，采用水飽和正丁醇萃取效果較好，故最終確定該方法。

通過考察不同采收期庫頁懸鉤子中總皂苷的含量，發現不同采收期含量差異較大，最佳采收季節為9月。

參考文獻：

[1] 占布拉·道爾吉.蒙藥正典[M].呼和浩特:內蒙古人民出版社，2006：184.

[2] 徐丹丹，周洪波，房志堅.粗葉懸鉤子的化學成分研究[J].廣東藥學院學報，2012，28(2):1－3.

[3] 梁成欽，蘇小建，周先麗，等.茅莓化學成分研究[J].中藥材，2011，34(1):64－66.

[4] 鄔美玉.山莓化學成分研究[J].藥學實踐雜志，2011，29(4):287－290.

[5] 孟祥娟，劉 斌，熱增才旦，等.懸鉤子屬植物化學成分及藥理活性研究進展[J].天然產物研究與開發，2011，23(4):767－775.

[6] 白淑珍，金紅光，包明蘭.蒙成藥額日敦－7湯研究進展[J].中國民族醫藥雜志，2008（1)69－71.

[7] 李敬朋，趙玉英，青 松，等.蒙成藥查干－湯黃酮的提取和含量測定[J].內蒙古民族大學學報，2010，25(3):270－271.

[8] 吳香杰，白明剛，陳常蓮.蒙藥材“桿達嘎日”的質量研究[J].遼寧中醫雜志，2007，34(9):9.

[9] 任凌燕，李惠芝，王繼生，等.茅莓總皂昔的含量測定[J].重慶醫科大學學報，2005，30(6):854－856.

[10] 王繼生，邱宗蔭，夏永鵬，等.茅莓總皂苷提取分離工藝考察[J].中國醫院藥學雜志，2011，31(13):1 138－1 139.