坎地沙坦酯氨氯地平片中降解產物的研究

靳茂禮 ，姚振江 ，申 磊 ，董珊紅

（1.河北省石家莊市食品藥品檢驗所，河北 石家莊 050031；2.石藥集團中諾藥業＜石家莊＞有限公司，河北 石家莊 050091）

坎地沙坦酯氨氯地平片是由坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平組成的復方制劑，為血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑和鈣離子拮抗劑的組合，雖然2個主要成分作用機制不同，但臨床療效確切、降壓平穩，臨床耐受性和安全性良好。本試驗中采用坎地沙坦酯片國家藥品標準中有關物質的檢測方法[1]測定了坎地沙坦酯氨氯地平片的降解產物，采用液相色譜－質譜/質譜（LC－MS/MS）分析3種分析方法，測定降解產物峰面積與坎地沙坦酯峰面積的比值、降解產物的保留時間，確定了坎地沙坦酯氨氯地平片降解產物的來源。現報道如下。

1 儀器與試藥

戴安U3000型高效液相色譜儀；LC－MS聯用系統；梅特勒AE－240型分析天平。坎地沙坦酯氨氯地平片（日本武田藥品工業株式會社，批號為0007，規格為每片8mg∶5mg）；乙腈為色譜純，磷酸、醋酸等為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

對坎地沙坦酯氨氯地平片配制的供試品溶液進行熱破壞，使其產生降解產物。取坎地沙坦酯氨氯地平片10片，研細，精密稱取細粉 1.625 g，加乙腈－水（3 ∶2）50 mL，超聲使溶解，溶液 98 ℃水浴2 h，放冷至室溫，過濾，量取續濾液適量，稀釋成每1 mL中含坎地沙坦酯0.4mg的溶液，作為供試品溶液。

2.2 檢測方法與條件

2.2.1 坎地沙坦酯氨氯地平片有關物質研究方法

色譜柱：菲羅門 C18柱 （250mm ×4.6mm，5μm）；流動相：A 為磷酸鹽緩沖液（取8mmol/L磷酸二氫鉀溶液，用8mmol/L磷酸氫二鉀溶液調節pH至6.0），B為乙腈，按表1進行線性梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：254 nm；進樣量：20 μL。

表1 流動相梯度洗脫表

2.2.2 坎地沙坦酯片國家藥品標準方法

色譜柱：菲羅門 C18柱（250mm ×4.6mm，5 μm）；流動相：A為乙腈－水－醋酸（57∶43∶1），B 為乙腈－水－醋酸（90∶10∶1），在30 min內使流動相A的比例由100%到0，流動相B的比例由0到 100%，分析時間約為坎地沙坦酯峰保留時間的 2.5倍；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：254 nm；進樣量：20 μL。2.2.3 LC－MS/MS質譜條件

質譜條件：離子源為電噴霧離子化（ESI）源；噴霧電壓IS為5 500 V；霧化溫度為 650 ℃ ；霧化氣 NEB（GAS 1）為 60 L/min；簾氣 CUR 為 25 L/min；輔助氣 AUX（GAS 2）為 60 L/min；檢測方式為正、負離子全掃描（Q1），解簇電壓分別為 50 V；掃描范圍為100～1 500 amu，圖譜顯示相對分子質量范圍為100～1 100 amu；對主要色譜峰主要生成碎片進行二級質譜全掃描。

色譜條件：液相色譜柱為菲羅門C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相體系1為流動相A甲酸－三乙胺緩沖液、流動相B、乙腈；體系 2為流動相 A 乙腈－水－甲酸（V∶V∶V，57∶43∶0.1）、流動相 B 乙腈－水－甲酸（V∶V∶V，90∶10∶0.1）；柱溫為 35℃。

2.3 降解產物定性

2.3.1 利用相同波長下降解產物與坎地沙坦酯峰面積之比

將 2.1 項下供試品溶液按 2.2.1 和 2.2.2 項下方法分別測定。色譜圖見圖1。各個降解產物峰面積與坎地沙坦酯峰面積比值見表2。暫將在2.2.1項下條件測得的雜質峰與坎地沙坦酯峰保留時間比值約為 0.85，1.1，1.2，1.3，1.5 的雜質分別定為雜質 1、雜質2、雜質 3、雜質 4、雜質5。在同一波長下，降解產物與坎地沙坦酯的吸收系數之比固定不變，上述2種色譜系統檢測波長均為254 nm，故同一供試品溶液中降解產物峰面積與坎地沙坦酯峰面積的比值在上述2種色譜條件下應相同。

2.3.2 利用雜質保留時間

將在2.2.1項下色譜條件分離出的雜質接出，得到雜質1、雜質 2、雜質 3、雜質 4、雜質 5接出液。按照 2.2.2項下色譜條件，分別進樣雜質接出液和供試品溶液。色譜圖見圖2和圖3，測得其保留時間見表 3。結果表明，雜質 1、雜質 2、雜質 3、雜質4、雜質5分別對應坎地沙坦酯有關物質Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ。

圖1 不同色譜條件下供試品溶液的高效液相色譜圖

表2 降解產物與坎地沙坦酯峰的峰面積比值

表3 雜質的保留時間

圖2 坎地沙坦酯氨氯地平片有關物質高效液相色譜圖

圖3 供試品溶液有關物質高效液相色譜圖

2.3.3 LC－MS/MS分析

將供試品溶液按照2.2.3項下質譜條件檢測，進行正離子的Q1全掃描。結果見圖4和圖5。在不同流動相體系下，12.19 min及36.48 min色譜峰可確定為坎地沙坦酯色譜峰，其余雜質峰相對分子質量信息與其類似者暫無法確定其歸屬情況。在不同流動相體系下，6.90 min及31.29 min色譜峰可確定為同一物質來源化合物產生的質譜信息，也就是說2個色譜峰可判斷為同一雜質成分產生。

圖4 正離子全掃描總離子流質譜圖

圖5 色譜峰的正離子全掃描質譜圖

3 討論

坎地沙坦酯氨氯地平片破壞性試驗中，其中以熱破壞試驗產生降解產物最多，故以熱破壞作為得到坎地沙坦酯氨氯地平片降解產物的方法。

采取了3種方法確定坎地沙坦酯氨氯地平片的降解產物，證實坎地沙坦酯氨氯地平片降解產物與坎地沙坦酯中有關物質存在對應關系，確定了坎地沙坦酯氨氯地平片降解產物的來源。

參考文獻：

[1] JX 20000248，國家標準·坎地沙坦酯片[S].