土炒對白術揮發油含量及組成的影響

王 琦 ，陳鴻平 ，劉友平 ，陳 林

（1.廣東省江門市藥品檢驗所，廣東 江門 529030； 2.成都中醫藥大學藥學院·中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 610075）

白術為菊科植物白術 Atractylodesmacrocephala Koidz.的干燥 根莖，具有補氣健脾、燥濕利水、止汗、安胎的功效[1]。《本草真經》

四川省教育廳青年基金，項目編號:2006B024；成都中醫藥大學校基金，項目編號:ZRYB200933，ZRYB201022。謂:“白術為脾臟第一要藥也。”白術為土炒代表藥物之一，傳統理論認為，白術土炒后健脾止瀉作用增強，從古至今一直在臨床廣泛使用[2]。關于白術土炒的炮制機理研究，目前主要集中于炮制前后成分的含量變化[3-5]。揮發油為白術的主要有效成分，同時也被認為是白術產生副作用的刺激性成分或“燥性”成分[6]。雖然關于白術炮制前后揮發油含量和組成變化的研究不乏文獻報道[7-10]，但現有研究無法說明這些改變到底是加熱引起的，還是輔料引起的，抑或是加熱和輔料共同作用的結果。本研究中采用[2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅩD]揮發油測定甲法測定白術揮發油含量，采用氣相色譜-質譜聯用（GC-MS）法分析白術中揮發油組分，并進一步采用薄層色譜（TLC）法和高效液相色譜（HPLC）法研究輔料土對揮發油成分的吸附作用，通過土炒白術與生白術、清炒白術、炒灶心土等之間的比較，探討輔料土在白術炮制過程中對揮發油成分的實質影響，為闡明白術土炒炮制原理提供科學依據。

1 儀器與材料

HP 6890/5973型 GC-MS氣質聯用儀，HP-Innowax石英毛細管柱（30 m ×0.25 mm ×0.25μm）；島津 LC-20ATVP 型高效液相色譜儀、紫外檢測器、島津工作站（日本島津儀器公司）；BP211D型（十萬分之一）、BP121S型（萬分之一）電子分析天平（德國賽多利斯公司）；BUG25-12型超聲波清洗機（25kHz，500W，上海必能信超聲波有限公司）；Raystzoxbap非接觸測溫儀（北京雷泰光電技術有限公司）；可調溫式電爐（重慶家旺家用電器廠）。薄層層析用硅膠G（青島海洋化工廠）；香草醛（天津市科密歐化學試劑開發中心）；甲醇、乙腈（色譜純，美國Fisher公司）；水為超純水，其余試劑均為分析純（成都科龍化工有限公司）。白術藥材于2010年2月購于西南藥都，經成都中醫藥大學盧先明教授鑒定為菊科植物白術 Atractylodesmacrocephala Koidz.的干燥根莖，經檢驗質量符合2010年版《中國藥典（一部）》白術項下規定。灶心土采自四川省眉山市仁壽縣龍正鎮沖天村5社某農家，經粉碎過80目篩后備用。

2 方法與結果

2.1 樣品炮制

參照2010年版《中國藥典（一部）》白術項下土白術的制備方法[1]，結合老藥工的經驗，固定各工藝參數，制備各炮制品。

白術:將白術藥材片凈選，篩去泥沙即得。

土炒白術:調節電爐為1 200W檔，預熱至鍋中心溫度達210℃時，加入灶心土炒4 min（鍋中心溫度達350℃），此時加入白術片，翻炒6 min，篩去多余的土，即得。每100 g白術片，用土25 g，土不重復使用。按此條件制備10批土炒白術。

清炒白術:調節電爐為1 200W檔，當預熱至鍋中心溫度達350℃時，加入白術片，翻炒6min，即得。按此條件制備10批清炒白術。

2.2 揮發油成分及含量的比較

2.2.1 白術揮發油提取

取白術生品及清炒、土炒炮制品粉末（過二號篩）約100 g，精密稱定，照2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅩD揮發油測定甲法測定，蒸餾得揮發油，待冷卻至室溫，讀數并記錄結果。生品、清炒品、土炒品所得揮發油的顏色逐漸由淡黃色至黃棕色加深，收集揮發油并低溫保存，備用。揮發油含量測定結果見表1。

表1 白術生品、土炒品、清炒品揮發油測定結果（n＝3，以干燥品計）

2.2.2 揮發油成分分析與比較

GC-MS條件:載氣為氦氣，流速 1.0 mL/min。進樣量為1μL，分流比為10∶1。氣化室溫度260℃，接口溫度270℃；程序升溫，初始溫度60℃，以10℃ /min的速率升至120℃，以5℃ /min的速率升至220℃，以10℃ /min的速率升至270℃。

質譜條件:離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃，電離方式為電子電離（EI）方式，電子能量 70 eV，掃描范圍 20～450 m/z。

成分分析結果:將各揮發油樣品按上述條件進行GC-MS測定，由色譜圖可知，生品、清炒品和土炒品揮發油峰形基本一致，表明三者在成分組成上無大的差異，且均分離出29個成分，經與標準譜庫檢索并與文獻標準譜圖對照，鑒定了26個成分。但從各成分相對含量來看，生品和清炒品接近，而土炒品與兩者相比存在顯著性差異，主要表現在，土炒后蒼術酮、香葉烯B相對含量明顯降低，γ-欖香烯、棕櫚酸、亞油酸等成分含量明顯升高。鑒定結果及相對百分含量見表2。

2.3 輔料土對成分的吸附作用初步研究

2.3.1 灶心土與白術 TLC比較

供試品溶液制備:取灶心土、藥炒后灶心土、炒灶心土各20 g，置具塞錐形瓶中，加入正己烷25 mL，密塞，超聲處理30 min，濾過，將濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1mL溶解即得。另取白術生品、清炒品、土炒品揮發油各0.1mL，加入乙酸乙酯1mL溶解即得。照TLC法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅵ B]試驗，吸取上述新制備的6種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚 -醋酸乙酯（50:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸試劑，加熱至斑點清晰。

結果:藥炒后灶心土及白術不同土炮制品的揮發油在色譜相應位置顯示相同斑點，可見桃紅色的主斑點，而灶心土、炒灶心土在相應位置無此斑點，表明在白術土炒過程中，炒土吸附了揮發油成分。

2.3.2 灶心土與白術HPLC分析比較

采用白術HPLC指紋圖譜色譜條件，比較生白術、清炒白術、土炒白術、灶心土、炒灶心土、藥炒后灶心土各樣品之間色譜圖，明確輔料土對白術成分是否有吸附作用。

供試品溶液制備:取灶心土、藥炒后灶心土、炒灶心土各20 g，各白術炮制樣品粉末約1.0 g，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，超聲提取30min，搖勻，濾過，即得。

色譜條件:色譜柱為 Hypersil BDSC18柱，（200mm ×4.6mm，5μm）；流動相 A為乙腈，B為水，梯度洗脫，0～12 min時，5%A和 95%B，120～125min時，100%A；柱溫 30℃；流速 0.8mL /min；波長 240 nm；分析時間125min。

測定法:分別吸取各供試品溶液20μL，注入高效液相色譜儀，測定色譜圖。

表2 白術生品、土炒品、清炒品揮發油GC-MS分析結果

結果:色譜圖見圖1。可見，藥炒后灶心土提取液與灶心土和炒灶心土相比，色譜圖具有明顯差異，吸收峰數目明顯增加；與白術各炮制品色譜圖比較，也存在保留時間相同的色譜吸收峰。因此土炒過程中，灶心土對白術中的某些化學成分產生了吸附作用。

3 討論

對白術生品、土炒品和清炒品揮發油的含量測定結果表明，白術經土炒炮制后揮發油含量有所降低，但清炒后含量卻增高。結合揮發油提取過程中清炒品出油時間較快等現象，推測其原因:一方面白術經炒制后組織結構疏松，利于揮發油溢出，故清炒品揮發油含量升高；另一方面，通過對灶心土、藥炒后灶心土、炒心土TLC及HPLC分析比較，證實在土炒過程中白術多個揮發油成分可被土吸附，揮發油含量降低，而清炒中揮發油則大多被吸附于飲片表面，故在提取中出油快且含量增高。

圖1 高效液相色譜圖

GC-MS分析結果表明，白術生品和清炒白術的揮發油組成成分和相對含量差異不大，而土炒品和生品、清炒品相比雖組成成分無差異，但相對含量則有較大差異，表明輔料土對白術揮發油成分的影響有實質作用。

揮發油中的主要成分蒼術酮為白術的“燥性”成分，土炒后白術揮發油含量、蒼術酮相對含量降低，表明土炒能緩和白術刺激性，與傳統中醫藥炮制理論相吻合。

參考文獻:

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