益陰消渴滴丸質量標準研究

張伏軍 ，須 建 ，尹小玲

（1.重慶三峽中心醫院藥劑科，重慶 404000；2.重慶醫藥高等?？茖W校，重慶 401331）

益陰消渴滴丸由葛根、苦瓜、山藥、荔枝核等4味藥材組方的中藥復方制劑，具有益氣養陰、清熱生津功效，臨床用于氣陰不足所致消渴，以及2型糖尿病見上述證候者，療效顯著。為有效控制該制劑的產品質量，本研究中采用薄層色譜（TLC）法對制劑中的葛根、荔枝核進行定性鑒別，采用高效液相色譜（HPLC）法測定葛根中有效成分葛根素的含量，所得定性、定量分析方法可客觀反映制劑的內在品質，為該品種的質量控制和評價指標提供了理論依據。

1 儀器與試藥

LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；薄層成像色譜儀（瑞士卡瑪公司）；AE-240S型電子天平（梅特勒-托利多儀器＜上海＞有限公司）；KQ-400DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；硅膠G預制薄層板（青島海洋化工有限公司）。葛根素對照品（批號為752-200108，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；益陰消渴滴丸樣品，缺葛根、缺荔枝核陰性樣品（本院提供）；甲醇（色譜純，廠家）；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別（TLC法）

葛根:取本品3丸，加甲醇15mL，超聲10min，濾過，濾液濃縮至約5 mL，作為供試品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺葛根陰性樣品3丸，同法制成缺葛根陰性對照品溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典（一部）》（附錄ⅥB）]試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一硅膠 H薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm處）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾（見圖1A）。

荔枝核:取本品15丸，加水50 mL，超聲溶解，用乙醚振搖提取3次，每次 30 mL，水溶液揮去乙醚，用水飽和正丁醇提取3次，每次25 mL，合并水飽和正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另稱取荔枝核藥材粉末1.0 g，加甲醇 25 mL，超聲 30 min，濾過，濾液濃縮至約1 mL，作為對照藥材溶液。再取缺荔枝核陰性樣品15丸，同法制成缺荔枝核陰性對照品溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典（一部）附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液、缺荔枝核陰性對照品溶液各10μL及對照藥材溶液6μL，分別點于同一硅膠H薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（9 ∶1 ∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色熒光斑點，陰性無干擾（見圖1B）。

圖1 薄層色譜圖

2.2 葛根素含量測定（HPLC法）

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:迪馬 C18色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流動相:甲醇 - 水（25 ∶75）；流速:1.0 mL /min；檢測波長:250 nm；柱溫:30℃。理論板數按葛根素峰計算應不低于3 000。

2.2.2 溶液制備

取樣品10丸，研細，取約0.1 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率 100W，頻率 40 kHz）10 min，放冷，用甲醇溶解，定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續濾液，即得供試品溶液；精密稱取干燥至恒重的葛根素對照品8.84 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得0.088 4 g/L葛根素對照品溶液；取不含葛根的陰性樣品適量，照供試品溶液制備方法，得缺葛根陰性對照溶液。

2.2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:精密吸取 2.2.2項下 3種溶液各 10μL，依法進樣測定。供試品溶液色譜在與對照品溶液色譜相應保留時間處有相應色譜峰，陰性對照品色譜中則無此色譜峰。結果表明陰性對照不干擾樣品測定，目標峰與相鄰色譜峰分離度均大于1.5。見圖 2。

圖2 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密吸取對照品溶液 2，4，8，12，16，20 μL，注入液相色譜儀。以峰面積積分值 A為縱坐標、進樣量（μg）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程 A＝7 011 291C-37 635.5，r＝0.999 9（n＝6）。結果表明，葛根素進樣量在 0.173 8 ～1.738 0 μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，重復進樣5次（進樣量10μL），測定峰面積。結果葛根素峰面積 RSD為 0.44%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一份供試品溶液，分別于制備后0，1，4，10，14 h進樣測定。結果葛根素峰面積 RSD 為 0.37%（n＝5），表明供試品溶液至少在14 h內穩定。

重復性試驗:取同一批樣品，按擬訂的含量測定方法，分別制備5份供試品溶液，測定葛根素含量。結果的 RSD為 1.14%（n＝5），表明方法重復性良好。

表1 葛根素加樣回收試驗結果（n＝6）

加樣回收試驗:取已知含量的樣品內容物適量，研細，精密稱定6份，分別加入葛根素對照品溶液適量（配成溶液加入），按擬訂的含量測定方法測定葛根素含量，計算回收率。結果見表1。

2.2.4 樣品含量測定

取不同批號的樣品，按供試品制備方法處理后依法測定，計算葛根素的含量。結果批號為130401，130402，130403的樣品中葛根素含量分別為 24.96，24.86，24.75mg /g。

3 討論

對本制劑中葛根、荔枝核的薄層鑒別研究，分別以對照藥品、對照藥材為對照，經方法學考察，薄層色譜斑點分離良好，斑點圓整清晰，陰性無干擾，同時試驗3批成品，結果均能檢出相應色譜斑點，表明選定的方法具有專屬性和重現性，可作為益陰消渴滴丸制劑質量控制的定性檢測方法。

用甲醇制備葛根素對照品溶液，進行紫外掃描，結果在250 nm波長處有最大吸收。參考2010年版《中國藥典（一部）》葛根藥材含量測定項下方法，本試驗選用250 nm為檢測波長。在此條件下，色譜圖基線平穩，陰性對照無干擾。

取益陰消渴滴丸40丸，研細成粉末，混勻，精密稱定3份，置25mL錐形瓶中，分別加甲醇、30%乙醇、70%乙醇各20mL，超聲處理10 min，取出，冷卻，轉移置25 mL容量瓶中，分別用甲醇溶解、30% 乙醇、70% 乙醇定容，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液，測定葛根素含量。結果表明，以甲醇提取效果更好，因此選擇甲醇作為提取溶劑。

本試驗中建立的鑒別葛根、荔枝核的TLC法，能鑒別出葛根、荔枝核的特征性斑點；建立的測定葛根素含量的HPLC法，精密度、穩定性、重現性符合要求。上述兩種方法為制訂益陰消渴滴丸的質量標準提供了理論依據。

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