磷酸三丁酯萃取-石墨爐原子吸收分光光度法測(cè)定海藻多糖空心膠囊中痕量六價(jià)鉻

張 毅，郭盈杉

（河北省食品藥品檢驗(yàn)院，河北 石家莊 050011）

不同價(jià)態(tài)的鉻有不同的生物效應(yīng)，三價(jià)鉻（Cr3+）是人體必需 的微量元素，而六價(jià)鉻（Cr6+）則被確認(rèn)為有致癌作用。樣品中Cr3+和Cr6+常用的測(cè)定方法有直接分光光度法[1]、利用離子締合物的共振散射和二級(jí)散射直接測(cè)定[2]、吸附分離-分光光度法[3-4]、原子光譜法[5]。本試驗(yàn)中，對(duì)海藻多糖空心膠囊中存在的痕量Cr6+萃取分離后，使用石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定，消除了其他價(jià)態(tài)鉻元素和其他元素的干擾，方法簡(jiǎn)便、靈敏度高，適用于海藻多糖空心膠囊中存在的痕量Cr6+的檢測(cè)。

1 儀器和試藥

原子吸收分光光度計(jì)（日本島津 AA-6300，GFA-EX7i石墨爐原子化器）；日本島津熱解涂層石墨管；濱松鉻元素空心陰極燈。硝酸（德國(guó)默克公司，優(yōu)級(jí)純，65%）；六價(jià)鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，GSB 04-1723-2004，1 000μg/mL）；磷酸二氫銨（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，優(yōu)級(jí)純）；水為純化水；基體改進(jìn)劑為2%磷酸二氫銨溶液。所有玻璃及聚四氟乙烯儀器，均以硝酸溶液（20%）浸泡24 h以上，用純化水反復(fù)沖洗，晾干。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品處理與溶液制備

取樣品0.5 g，置 100mL離心管中，精密加水 50mL，置 60℃水浴中時(shí)時(shí)振搖使溶解，放冷，精密加鹽酸1 mL，搖勻，再精密加入磷酸三丁酯（TBP）5 mL，密塞，強(qiáng)力振搖 2 min，3 000 r/min 離心10 min，精密量取上清液1 mL，置聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸 10 mL，180℃預(yù)消解 30 min[6]，放冷，補(bǔ)加硝酸 5 mL，密塞，微波消解完全后，放冷，180℃蒸至近干，用水轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取不含六價(jià)鉻的空白樣品0.5 g，置100 mL離心管中，精密加水50 mL，照供試品溶液制備方法處理，制備空白基質(zhì)溶液。取六價(jià)鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水制成含鉻 0，5，10，20，40 ng /mL 的溶液，精密量取 50mL，照供試品溶液制備方法處理，制備對(duì)照品溶液。

2.2 測(cè)定條件

進(jìn)樣量:4μL；加基體改進(jìn)劑2μL，注入石墨管，檢測(cè)波長(zhǎng)為357.9 nm（見(jiàn)圖 1）；燈電流:4.0 mA；狹縫:0.5 nm；峰高定量，氘燈扣背景，石墨爐升溫程序見(jiàn)表1。

圖1 最大吸收波長(zhǎng)

表1 石墨爐原子吸收測(cè)定鉻的升溫程序

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn):取不含六價(jià)鉻的空白樣品3份，每份0.5 g，分別置100 mL離心管中，精密加合成試樣（含 Cr6+20 ng/mL，Cr3+1 000 ng/mL，Na+1 000 ng/mL，K+1 000 ng/mL，Ca2+1 000 ng/mL，Mg2+1 000 ng/mL，Al3+1000 ng/mL，Zn2+1 000 ng/mL，F(xiàn)e3+1 000 ng/mL的 0.2 mol/L鹽酸溶液）50 mL，照 2.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理。按擬訂的測(cè)定條件測(cè)定，結(jié)果樣品本底質(zhì)量濃度未檢出，加入六價(jià)鉻質(zhì)量濃度為20 ng/mL，測(cè)得六價(jià)鉻平均質(zhì)量濃度為17.868 7 ng /mL，回收率為 89.3% 。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取六價(jià)鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水制成含鉻20 ng/mL的溶液，精密量取50 mL，置100 mL離心管中，依法制備對(duì)照品穩(wěn)定性試驗(yàn)溶液，室溫放置 1，2，4，6，8 h，注入石墨管，結(jié)果響應(yīng)值的 RSD為 2.7%（n＝5）。另取不含六價(jià)鉻的空白樣品0.5g，置100 mL離心管中，精密加六價(jià)鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 ng /mL）1.0 mL，精密加水至 50 mL，依法制備穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液，室溫放置 1，2，4，6，8 h，注入石墨管，結(jié)果響應(yīng)值的RSD 為 3.6% （n＝5）。

線性關(guān)系考察:參照2010年版《中國(guó)藥典（二部）》[6]明膠空心膠囊總鉻的限度，按擬訂的方法測(cè)定，以吸光度對(duì)質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程 A＝0.015 435C+0.000 4，r＝0.999 7（n ＝6）。結(jié)果表明，六價(jià)鉻最佳檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0～40 ng/mL。

最低檢測(cè)限確定:取空白基質(zhì)溶液，連續(xù)測(cè)定11次。結(jié)果的RSD ＝0.001 7% ，當(dāng)信噪比(S/N)≥3 時(shí)，檢測(cè)限為 0.33 ng/mL（0.033 mg /kg）。

精密度試驗(yàn):取六價(jià)鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水制成含鉻20 ng/mL的溶液，精密量取50mL，置100mL離心管中，依法制備精密度試驗(yàn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果響應(yīng)值的 RSD為1.3%（n＝6）。

加樣回收試驗(yàn):取不含六價(jià)鉻的空白樣品9份，每份0.5 g，分置100mL離心管中，精密加六價(jià)鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 ng/mL）0.8，1.0，1.2 mL，各 3 份，分別精密加水至 50 mL，照供試品溶液制備方法制備回收率試驗(yàn)溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 六價(jià)鉻加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.4 樣品檢測(cè)

取各批號(hào)樣品，分別按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2項(xiàng)下條件測(cè)定，結(jié)果及參照2010年版《中國(guó)藥典（二部）》明膠空心膠囊鉻檢查方法測(cè)得的總鉻量對(duì)比見(jiàn)表3。

3 討論

Cr2O72-可與 TBP和Cl-形成Cr6+-TBP-Cl-溶劑化合物，故選用鹽酸提供酸性環(huán)境[7]。至于5 mL的磷酸三丁酯，加入15mL硝酸微波消解能充分破壞有機(jī)物，剩余的硝酸經(jīng)趕酸處理至近干，可有效減少酸效應(yīng)，結(jié)果重復(fù)性良好。加入2%磷酸二氫銨溶液作為基體改進(jìn)劑，可以提高灰化溫度，減少背景干擾，增加信號(hào)的穩(wěn)定性。

表3 樣品檢測(cè)結(jié)果

參考文獻(xiàn):

[1]薛 斌，李月華，白曉琳，等.可見(jiàn)分光光度法對(duì)水樣中痕量Cr（Ⅲ）和Cr（Ⅵ）的同時(shí)測(cè)定[J].沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26（1）:117-120.

[2]申金山，李獻(xiàn)銳.羅丹明B-I-3離子締合物共振散射測(cè)定環(huán)境水樣中的鉻（Ⅲ）和鉻（Ⅵ） [J].分析化學(xué)，2001，29（8）:944-946.

[3]劉海玲，劉樹(shù)深，陳英淼.聚酰胺富集分離環(huán)境水中鉻鉻（Ⅲ）和鉻（Ⅵ） [J].分析化學(xué)，1998，26（8）:963-967.

[4]余建新，曾漢口.出口手套皮革中水溶性六價(jià)鉻含量的測(cè)定 [J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，1998，17（8）:59-61.

[5]Sperling M，Xu SK，Kelz B.Determination of chromium（Ⅲ）and chromium（Ⅵ）in water using flow injection on line perconcentration with selective absoption on activated alumina and flame atomic absorption spectrometric detection[J].Anal Chem，1992，64:3 101-3 108.

[6]雷 慶，林琪宇，陳建平.微波兩步消解-石墨爐原子吸收光譜法快速檢測(cè)明膠空心膠囊中的鉻[J].2013，22（19）:46-47.

[7]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:1 204.