雙氯芬酸二乙胺乳膠劑的含量測定

林生文

（廣東省食品藥品檢驗所，廣東 廣州 510180）

雙氯芬酸二乙胺[1]是雙氯芬酸非金屬離子鹽，適合局部用藥，是一種兩親性分子，和其他雙氯芬酸鹽相比，更容易透過疏水性的角質層和親水性的表皮層。雙氯芬酸二乙胺目前的制劑品種主要為雙氯芬酸二乙胺乳膠劑和凝膠劑，質量標準需要進一步提高與統一。雙氯芬酸二乙胺乳膠劑為解熱鎮痛類非處方藥，對軟組織疼痛有良好療效[2]，可用于治療膝關節骨性關節炎[3]，具有抗炎、鎮痛作用。局部應用時，其有效成分可穿透皮膚到達炎癥區域，緩解急慢性炎癥反應，對因外傷或風濕病引起的炎癥，可使炎性腫脹減輕、疼痛緩解，可用于緩解肌肉、軟組織、關節的中度疼痛。雙氯芬酸二乙胺乳膠劑現行國家標準為國家食品藥品監督管理局藥品試行標準[4]，以雙氯芬酸二乙胺為對照品，采用高效液相色譜法測定含量，但不同劑型方法不統一。本試驗中新建了雙氯芬酸二乙胺乳膠劑的測定方法，統一了不同制劑的測定方法，同時解決了對照品缺乏的問題。現報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1200型液相色譜儀；Chemstation色譜工作站；梅特勒ME104E型電子天平。雙氯芬酸鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100334-201003）；雙氯芬酸二乙胺對照品、雙氯芬酸二乙胺乳膠劑（批號為 X1146，X1326，X1854，規格為 20 g∶0.2 g，以C14H10Cl2NNaO2計，均由諾華制藥有限公司北京分公司提供)；甲醇、乙腈均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[5]

色譜柱:CNW C18柱（150mm ×4.6mm，5μm）；流動相:甲醇 -4%冰醋酸水溶液（70∶30），流動相使用前經0.45μm有機濾膜抽濾并脫氣；流速:1.5mL /min；檢測波長[4]:276 nm；柱溫:40 ℃ 。

2.2 溶液制備[6]

取雙氯芬酸鈉對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1 mL中含0.25 mg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取本品 2.5 g（約相當于雙氯芬酸鈉25 mg），精密稱定，置 100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲30 min使溶解，放冷，用甲醇稀釋刻度，搖勻，離心，取上清液，通過0.45μm濾膜濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗[7]:取雙氯芬酸二乙胺適量，用水制成每1 mL中約含1 mg的溶液，取適量，置石英吸收池中，在紫外光燈（254 nm）下照射15 min，作為系統適用性試驗溶液。按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，在與雙氯芬酸二乙胺保留時間約0.8 min處出現一雜質峰，雜質峰和雙氯芬酸二乙胺峰的分離度應不低于4.0，理論板數按雙氯芬酸二乙胺峰計算應不低于5 000。見圖 1。

圖1 高效液相色譜圖

標準曲線繪制:取雙氯芬酸鈉對照品125 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。精密吸取上述溶液1，3，5，2，5 mL，置 50，50，50，10，10 mL 容量瓶中，配制成質量濃度為51.600～1 290.0μg/mL 對照品溶液，各進樣 20μL，按擬訂色譜條件測定峰面積。以對照品質量濃度為橫坐標（C）、峰面積為縱坐標（A）進行線性回歸，得線性回歸方程 A＝116.724 8C-72.462 6，r＝0.999 9（n＝5）。結果表明，雙氯芬酸鈉質量濃度在 51.600～1 290.0μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取對照品溶液，重復進樣6次，測定峰面積值。結果的 RSD為0.6%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一批供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，24 h時依法測定。結果的 RSD為0.8%，表明供試品在24 h內穩定。

重復性試驗:取同一批樣品，分別平行稱取6份，依法測定。結果的 RSD為1.2%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗[8]:取樣品（批號為 X1146），分別制備質量濃度為標示濃度80%，100%，120%的供試品溶液各3份，依法測定。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n＝9）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液及對照品溶液，分別精密吸取20μL，按擬訂色譜條件進樣測定峰面積，外標法計算含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

由于雙氯芬酸二乙胺對照品難以購買，而雙氯芬酸鈉對照品易獲得。本品的規格以雙氯芬酸鈉計，雙氯芬酸二乙胺乳膠劑按雙氯芬酸鈉為標示量計算。本試驗中采用雙氯芬酸鈉及雙氯芬酸二乙胺為對照品測定3批樣品，結果兩種方法測定的含量基本一致。因此認為，本品可以采用較容易得到的雙氯芬酸鈉作為對照品，測定含量。

本試驗中采用了4條色譜柱測定含量，分別為 CNW C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），Merck C18柱（125 mm ×4.6 mm，4 μm），Waters XBridge C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），安捷倫XDB-C18柱（150mm ×4.6mm，5 μm）。測定結果顯示，此 4條色譜柱均適用于雙氯芬酸二乙胺乳膠劑的含量測定。

本試驗中嘗試用甲醇和70%甲醇作為溶劑進行樣品前處理，發現乳膠劑在甲醇溶液中溶解較好，輔料無干擾，溶液比較澄清，故選用甲醇作為溶劑。測定過程中考察了流動相，發現冰醋酸濃度較高時峰形較好。雙氯芬酸二乙胺乳膠劑的測定采用水溶液破壞的方法，結果破壞試驗方法重現性好、方法簡單，解決了系統適用性試驗需要對照品的問題。

參考文獻:

[1]施 卉，吳 超，邱利焱，等.幾種促進劑對雙氯芬酸鈉離子導入效果的比較[J].中國藥學雜志，2006，41（12）:921-922.

[2]劉曉陽.雙氯芬酸二乙胺乳膠劑治療軟組織性腰痛的療效觀察[J].臨床醫藥實踐，2011，20（7）:511-513.

[3]曹 紅，范 里，趙勝豪.局部雙氯芬酸二乙胺乳膠劑治療膝關節骨性關節炎的療效觀察[J].臨床醫藥實踐，2011，20（7）:502-503.

[4]YBH07402009，國家食品藥品監督管理局國家藥品標準(試行)[S].

[5]王 勇，張海龍，周彥斌，等.高效液相色譜法測定雙氯芬酸二乙胺乳膠劑有關物質[J].中南藥學，2011，9（12）:909-912.

[6]徐燦輝，何維為.高效液相色譜法測定神風液中摻加的雙氯芬酸鈉[J].中國藥業，2006，15（21）:37-38.

[7]楊仲文，陳玄玄.雙氯芬酸二乙胺凝膠的紫外分光光度法測定[J].2003，34（9）:467-468.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄29-附錄 31.