正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選醇提水沉法純化柴胡皂苷類成分工藝條件

曹德萬(wàn)

(吉林博德醫(yī)學(xué)免疫制品有限公司，吉林省 吉林市 132000)

?

正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選醇提水沉法純化柴胡皂苷類成分工藝條件

曹德萬(wàn)

(吉林博德醫(yī)學(xué)免疫制品有限公司，吉林省 吉林市 132000)

目的：采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選醇提水沉法純化柴胡皂苷類成分的工藝條件。方法：以柴胡皂苷含量為評(píng)判指標(biāo)，考察影響提取效果的乙醇、浸膏∶乙醇、乙醇∶水三個(gè)因素，每個(gè)因素又各選擇三種水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：乙醇濃度是影響柴胡皂苷類成分醇提水沉純化工藝條件的主要因素。最佳純化方法為一次水沉。結(jié)論：該提取工藝合理可行，可用于柴胡中皂苷成分的純化。

柴胡皂苷；正交設(shè)計(jì)；醇提水沉

柴胡皂苷是柴胡的有效成分，用于治療寒熱往來(lái)、胸滿脅痛、口苦耳聾、頭痛目眩、瘧疾等癥。柴胡是我國(guó)傳統(tǒng)中藥和常用中藥，《中國(guó)藥典》規(guī)定傘形科多年生草本植物柴胡(北柴胡)BupleurumchineseDC. 和狹葉柴胡(南柴胡)BupleurumscorzonerifoliumWilld為中藥正品的原植物。柴胡性味苦涼，有疏散退熱、疏肝解郁、升陽(yáng)舉氣之功效，其主要有效成分為柴胡皂苷和揮發(fā)油。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，柴胡具有多種生物活性[1]。目前，有關(guān)柴胡提取的研究[2-3]均以柴胡中某一有效成分為考察對(duì)象，而以多項(xiàng)成分為檢測(cè)指標(biāo)的綜合考察尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者以柴胡皂苷a為檢測(cè)指標(biāo)，優(yōu)選醇提水沉法純化柴胡中皂苷類成分的工藝條件，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 試劑與儀器

材料：柴胡購(gòu)于天士力集團(tuán)，柴胡皂苷a由成都思科華生物技術(shù)有限公司提供。

儀器：JASCO LC-1500高效液相色譜儀(附UV-1575檢測(cè)器)(日本和光)；UV-2550紫外分光光度計(jì)(Shimado公司)；試劑：乙腈為色譜純，美國(guó)Fisher公司產(chǎn)，水為高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為KYA TECH Corporation生產(chǎn)，HiQSil C18W(4.6mmφ×250mm)；流動(dòng)相：乙腈-水(40∶60) ；柱溫：40℃；流速：0.9mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；靈敏度：0.05AUFS。

2.2 因素和水平確定

選擇乙醇濃度、浸膏∶乙醇、乙醇∶水作為3個(gè)考察因素，每個(gè)因素又各選擇3種水平、選用正交表進(jìn)行L9(34)設(shè)計(jì)試驗(yàn)，見(jiàn)表1。

表1 L9(34)因素水平

表2 正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及評(píng)分結(jié)果

2.3 純化方法

取95%柴胡浸膏5g，按照9個(gè)試驗(yàn)條件，平行測(cè)定2次，共18份。按正交表要求(下同)，用5倍量的95%乙醇。

2.4 柴胡皂苷a標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制[4-5]

對(duì)照品溶液制備：精密稱取柴胡皂苷a 4.97mg ，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即為對(duì)照品溶液，濃度為0.497mg·mL-1。精密吸取3、6、9、12、15μL 柴胡皂苷a 對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，測(cè)定峰面積積分值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為Y=6.21+56.41X，γ=0.999 7。

2.5 供試品溶液制備與測(cè)定

精密稱取相應(yīng)的提取物干粉適量，置于10mL 容量瓶中，加60%乙醇溶至刻度，混勻，微孔濾膜濾過(guò)得到供試品溶液。分別精密吸取各份供試品溶液適量，按上述色譜條件HPLC測(cè)定柴胡皂苷a 含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

作為溶劑溶解，回流前浸泡2h，每次3h，合并兩次提取液，減壓蒸餾回收溶劑，得到濃縮液，過(guò)濾離心后用95%乙醇充分溶解，過(guò)濾離心后合并兩次濾液，加水沉淀過(guò)濾離心后，55℃以下減壓干燥得棕色粉末，即為柴胡皂苷。水沉后濾液經(jīng)噴霧干燥得到固體物，先用95%醇溶解，加水沉淀完全后同上操作，減壓干燥后再次得到棕色粉末，與上次棕色粉末合并為總柴胡皂苷，進(jìn)行含量測(cè)定，篩選影響純化工藝的主要因素(見(jiàn)表2、表3、表4)。再將上一次水沉物加乙醇溶解，加水沉淀得到二次水沉物，平行測(cè)定3次，共12份，再進(jìn)行含量測(cè)定，比較兩次提取結(jié)果，確定純化工藝(見(jiàn)表5)。

表3 以柴胡皂苷收率、含量為指標(biāo)的極差分析結(jié)果

表4 以柴胡皂苷收率、含量為指標(biāo)的方差分析結(jié)果

2.4 柴胡皂苷a標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制[4-5]

對(duì)照品溶液制備：精密稱取柴胡皂苷a 4.97mg ，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即為對(duì)照品溶液，濃度為0.497mg·mL-1。精密吸取3、6、9、12、15μL 柴胡皂苷a 對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，測(cè)定峰面積積分值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為Y=6.21+56.41X，γ=0.999 7。

2.5 供試品溶液制備與測(cè)定

精密稱取相應(yīng)的提取物干粉適量，置于10mL 容量瓶中，加60%乙醇溶至刻度，混勻，微孔濾膜濾過(guò)得到供試品溶液。分別精密吸取各份供試品溶液適量，按上述色譜條件HPLC測(cè)定柴胡皂苷a 含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 純化工藝比較

3 結(jié)論

因素B的極差和方差分析結(jié)果表明，以收率為指標(biāo)和以含量為指標(biāo)時(shí)都是最大，說(shuō)明浸膏∶乙醇值是影響柴胡皂苷收率和含量的主要因素，乙醇∶水值是影響柴胡皂苷收率和含量的最小因素。由于純化工藝中二次水沉物的含量低于一次水沉物，因此，該工藝只采用一次水沉的方法。該提取工藝合理可行，可用于柴胡中皂苷類成分的純化。

[1] 李芳,李建北,張東明.柴胡的藥理研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2004,15(2):120-121.

[2] 張玲,徐本明,徐新剛,等.柴胡提取工藝研究[J].中成藥,1997,19(8):1-3.

[3] 劉培建,孟江,楊云,等.柴胡揮發(fā)油提取條件的研究[J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊,2002,17(2):32-33.

[4] 董友毅,羅思齊,潘勝利.柴胡主要皂甙成分的高效液相色譜測(cè)定[J].中國(guó)中藥雜志,1989,14 (11):38-41.

[5] 羅燕燕,張紹青,林明美.柴胡藥材中皂甙a、d的HPLC測(cè)定[J].中藥藥學(xué)雜志,1992,27(4):215-217.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-07-14

曹德萬(wàn)(1977-)，男，吉林博德醫(yī)學(xué)免疫制品有限公司工程師，研究方向?yàn)樯镏扑幑こ獭?/p>

R284.2

A

1673-2197(2014)22-0021-02