通拉嘎-5對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠脂質(zhì)指標(biāo)的影響*

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（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028007）

通拉嘎-5對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠脂質(zhì)指標(biāo)的影響*

烏日?qǐng)D那順1包納日斯2△蘭 英2萬(wàn) 全3

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028007）

目的 觀察蒙藥通拉嘎-5對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠血清及肝組織中脂質(zhì)指標(biāo)的影響。方法 80只Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組和造模組，分別以蒸餾水和高度白酒灌胃8周。造模成功后再隨機(jī)分為空白組、模型對(duì)照組、硫普羅寧組和通拉嘎-5高、中、低劑量組。空白組和模型對(duì)照組以羧甲基纖維素鈉，硫普羅寧組以硫普羅寧40mg/kg，通拉嘎-5高、中、低劑量組分別以780mg/kg、390mg/kg、195mg/kg通拉嘎-5灌胃4周后處死，腹主動(dòng)脈采血，取肝組織，檢測(cè)血清及肝組織中總膽固醇（TC）和三酰甘油（TG）。結(jié)果 通拉嘎-5高、中、低劑量組分別與模型對(duì)照組比較，血清TC、TG差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；通拉嘎-5高、中劑量組分別與模型對(duì)照組比，肝組織中TC、TG差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 通拉嘎-5可有效地降低酒精性脂肪肝模型大鼠血清和肝組織中的TC和TG，并且通拉嘎-5中劑量為治療的首選劑量。

蒙藥 通拉嘎-5 酒精性脂肪肝 大鼠 脂質(zhì)指標(biāo)

依據(jù)酒精性脂肪肝發(fā)病過程中的臨床癥狀，從蒙醫(yī)學(xué)理論角度可將其分為3個(gè)階段，即初期、中期和晚期，初期屬蒙醫(yī)學(xué)“未消毒癥”［1］范疇，是因?yàn)殚L(zhǎng)期大量服用了含有人體非必需物質(zhì)酒精而導(dǎo)致胃中毒，出現(xiàn)惡心、嘔吐、泛酸、食欲減退，胃部出現(xiàn)燒灼感等“希拉”增盛性癥狀，而中期和晚期屬“通拉嘎未消癥”［1］范疇，主要出現(xiàn)非正常性脂肪過盛相關(guān)的癥狀和體征，如腹部肥胖、四肢消瘦、食欲減退、面色灰暗、乏力等。通拉嘎-5［2］（紅花、石榴、桂皮、蓽茇、白豆蔻）是蒙醫(yī)學(xué)中治療“通拉嘎未消癥”的代表性方藥，具有調(diào)節(jié)胃之消化能、促進(jìn)精華（通拉嘎）與糟粕（楚布）的分解、祛除“巴達(dá)干薩撒利蘇”之功效。因此將其選定為自然科學(xué)基金課題“蒙醫(yī)三根調(diào)節(jié)法及其代表性方劑對(duì)酒精性脂肪肝的作用機(jī)制研究”當(dāng)中調(diào)節(jié)“三根”之一“巴達(dá)干”的代表性方藥。本實(shí)驗(yàn)旨在闡明通拉嘎-5是通過影響酒精性脂肪肝的哪些相關(guān)指標(biāo)而發(fā)揮調(diào)節(jié)“巴達(dá)干”之作用，為系統(tǒng)闡明蒙醫(yī)三根法治療酒精性脂肪肝的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康雄性Wistar大鼠，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK-（軍2012-0004）。80只，體質(zhì)量150～170g。

1.2 儀器和試劑 通拉嘎-5［國(guó)家蒙藥制劑中心內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批準(zhǔn)號(hào)：呼衛(wèi)注字（97）001-104］，硫普羅寧片（山西云中制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20093445），膽固醇（TC）和三酰甘油（TG）試劑盒（由上海滬尚生物科技有限公司提供），酶標(biāo)儀。

1.3 造模和分組 大鼠隨機(jī)分為兩組，空白組15只，以蒸餾水每日0.5mL/100g連續(xù)灌胃8周；造模組65只，以56°白酒逐步增加酒精量灌胃，前3d稀釋為15％的酒精含量以0.5mL/100g灌胃，再稀釋為30％酒精含量灌胃3d，其后增加到45％的酒精含量灌胃8周。8周后空白組和造模組每組隨機(jī)選取3只鼠處死后取肝臟，制成肝組織病理切片，顯微鏡下觀察，判定是否造模成功。然后將模型組隨機(jī)分為模型對(duì)照組、硫普羅寧組及通拉嘎-5高、中、低劑量組，共5個(gè)組，每組10只［3-4］。

1.4 治療方法 空白組和模型對(duì)照組以1％羧甲基纖維素鈉溶液每日0.5mL/100g連續(xù)灌胃4周；通拉嘎-5高、中、低劑量組分別用780mg/kg、390mg/kg、195mg/kg的通拉嘎-5，以1％羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液后每日0.5mL/100g連續(xù)灌胃4周；硫普羅寧組用40mg/kg的硫普羅寧片研磨后以1％羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液，每日0.5mL/100g連續(xù)灌胃4周；與此同時(shí)各組繼續(xù)造模干預(yù)。

1.5 標(biāo)本采集 4周后各組同時(shí)禁食不禁水16h，用20％烏拉坦0.5mL/100g腹腔注射麻醉，開腹，腹主動(dòng)脈采血，3000r/min離心，取血清，-20℃冷藏備用；取肝組織用錫紙包裹，-80℃冷藏備用。

1.6 指標(biāo)檢測(cè) -20℃冰箱內(nèi)取出血清室溫自然融，-80℃冰箱內(nèi)取出肝組織制成勻漿，然后按試劑盒說(shuō)明，通過酶標(biāo)儀檢測(cè)血清和肝組織中的TC和TG指標(biāo)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。數(shù)據(jù)以（±s）表示，各組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組間血清和肝組織中TC、TG的比較結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，模型對(duì)照組與空白組各項(xiàng)指標(biāo)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。通拉嘎-5高、中、低劑量組分別與模型對(duì)照組比較，血清TC、TG差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而通拉嘎-5高、中劑量組分別與模型對(duì)照組比較，肝組織中TC、TG差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。血清TC和TG在硫普羅寧組、通拉嘎-5高、中、低劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。肝組織中的TC和TG在通拉嘎-5低劑量組和模型對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)于肝組織中的TG指標(biāo)，通拉嘎-5高、中劑量組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 各組大鼠血清及肝組織TC、TG比較（±s）

表1 各組大鼠血清及肝組織TC、TG比較（±s）

與空白組比較，*P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△P＜0.01；與通拉嘎-5高劑量組比較，☆P＜0.01。

組別空白組模型對(duì)照組肝組織TC、TG（mmol/gprot）TG TC TG 1.58±0.07 9.23±0.65 12.03±0.57 1.92±0.09* 14.24±0.77* 15.22±0.57*硫普羅寧組 1.55±0.08△ 11.30±0.72△ 13.32±0.58△通拉嘎-5高劑量組 1.54±0.08△ 12.34±0.73△ 14.22±0.64△通拉嘎-5中劑量組 1.61±0.09△ 11.69±0.67△ 13.05±0.55△☆通拉嘎-5低劑量組 1.65±0.10△ 13.34±0.73 14.85±0.62 n 血清TC、TG（mmol/L）TC 10 1.82±0.08 10 2.78±0.07*10 2.01±0.08△10 2.01±0.07△10 2.02±0.08△10 2.13±0.08△

3 討論

酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)理之一是脂肪的代謝紊亂［5］。例如酒精進(jìn)入肝細(xì)胞后在乙醇脫氫酶和微粒體乙醇氧化酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)橐胰俎D(zhuǎn)變?yōu)橐宜帷＿@會(huì)導(dǎo)致還原性輔酶Ⅰ（NADH）與反應(yīng)性輔酶Ⅰ（NAD）比值升高，從而抑制線粒體三羧酸循環(huán)，使肝內(nèi)脂肪酸代謝發(fā)生障礙，氧化減弱。于是中性脂肪就會(huì)堆積于肝細(xì)胞中。另外NADH的增多又促進(jìn)脂肪酸的合成，使脂肪在肝細(xì)胞中堆積而發(fā)生脂肪變性，最終導(dǎo)致脂肪肝的形成。而TC和TG是最重要的脂質(zhì)指標(biāo)，是提示人體脂肪堆積過剩的重要參照指標(biāo)。因此能否有效地降低血液和肝組織中的TC和TG是某種治療方法對(duì)脂肪肝是否有治療作用的重要依據(jù)。

從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，模型對(duì)照組與空白組間血清和肝組織中的TC和TG指標(biāo)出現(xiàn)了顯著性差異。這表明酒精性脂肪肝模型大鼠的血液和肝臟中TC和TG出現(xiàn)了顯著升高。而通拉嘎-5高、中、低劑量組分別與模型對(duì)照組比，血清TC、TG均有顯著性差異。通拉嘎-5高、中劑量組分別與模型對(duì)照組比，肝組織中TC、TG有顯著性差異。這表明通拉嘎-5對(duì)酒精性脂肪肝有顯著的降脂作用，并且也證實(shí)了中劑量通拉嘎-5為最佳治療劑量。從蒙醫(yī)學(xué)理論角度看，這恰好也符合通拉嘎-5的功能和主治。通拉嘎-5是治療“通拉嘎未消癥”的代表性方藥，具有調(diào)節(jié)胃之消化能、促進(jìn)精華（通拉嘎）與糟粕（楚布）的分解、祛除“巴達(dá)干薩撒利蘇”之功效。而酒精性脂肪肝的一個(gè)重要病理變化是肝細(xì)胞內(nèi)堆積了大量的脂肪。脂肪在蒙醫(yī)學(xué)理論中是構(gòu)成人體的基本要素“七素（包括食物精華、血液、肌肉、脂、骨、骨髓、精）”中的一員，是肌肉之精華。酒精性脂肪肝的蒙醫(yī)學(xué)發(fā)病機(jī)理是因長(zhǎng)期大量飲酒而造成胃之消化功能紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟內(nèi)的消化分能也遭到削弱，不能及時(shí)對(duì)體內(nèi)的脂肪進(jìn)行精華與糟粕的分解，不斷地堆積而造成了脂肪肝的發(fā)生。因此通拉嘎-5的降脂作用可能是治療酒精性脂肪肝的作用機(jī)理之一。

從現(xiàn)代藥理學(xué)角度來(lái)看，通拉嘎-5的組方藥材之中含有蓽茇，而蓽茇的主要有效成份是蓽斯茇寧和胡椒堿［8］，有研究發(fā)現(xiàn)蓽茇寧和胡椒堿均有降脂作用［9-10］。這也從另一方面證實(shí)了通拉嘎-5降脂作用的確切性。但對(duì)于酒精性脂肪肝而言，通拉嘎-5是否只是單純地通過降低血液和肝臟中的脂質(zhì)而發(fā)揮作用的呢?還是有其他的協(xié)同作用的機(jī)制呢？有待進(jìn)一步研究和闡明。

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Effect of Tonglaga-5 on Fat Index in Rats with Alcoholic Fatty Liver

Wuritunashun，Baonarisi，Lanying，et al.
School of Preclinical Medicine，Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100029，China

Objective：To observe the effect of Mongolian medicine Tonglaga-5 on the lipid indicators of serum and liver tissue in rats with alcoholic fatty liver.Methods：80 Wistar rats were randomly divided into blank group and model group，and administrated by distilled water and hard liquor in stomach for 8 weeks.After success of modeling，they were randomly divided into blank group，model group，Tiopronin group，Tonglaga-5 low，middle and high dose groups respectively.Blank and model groups were given carboxymethyl cellulose natrium while Tiopronin group were given Tiopronin 40mg/kg.Tonglaga-5 low，middle and high dosage groups were given 1400mg/kg，700mg/kg，350mg/kg of Tonglaga-5 respectively.After 4 weeks intragastric administration，they were put to death.Blood samples were collected from abdominal aorta.Liver tissue was taken，and total cholesterol（TC）and triglyceride（TG）in serum and liver tissue were tested.Results：Compared with model group，TC and TG of serum in Tonglaga-5 low，middle and high dose groups had significant differences（P＜0.01）.Compared with model group，TC and TG of liver tissue in Tonglaga-5 middle and high dose groups had significant differences（P＜0.01）.Conclusion：Tonglaga-5 can effectively reduce TC and TG levels of serum and liver tissue in rat with alcoholic fatty liver，and medium dose is preferred.

Mongolian Medicine；Tonglaga-5；Alcoholic fatty liver；Rats；Fat index

R29

A

1004-745X（2014）10-1779-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.10.003

2014-06-26）

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.81160549）

△通信作者