GC法測定中藥黃芪中五氯苯胺和滅蟻靈的殘留量

汪海宣程慶兵姜 麗

（1 安徽省合肥市食品藥品監督檢驗所，安徽 合肥 238000；2 安徽省巢湖市今辰藥業有限公司，安徽 合肥 238000）

GC法測定中藥黃芪中五氯苯胺和滅蟻靈的殘留量

汪海宣1程慶兵1姜 麗2

（1 安徽省合肥市食品藥品監督檢驗所，安徽 合肥 238000；2 安徽省巢湖市今辰藥業有限公司，安徽 合肥 238000）

目的 立測定栽培黃芪中五氯苯胺和滅蟻靈的殘留量的一種毛細管柱氣相色譜的分析方法。方法 樣品經有機溶劑超聲萃取、以濃硫酸磺化后，采用不分流進樣方式，用HP-5彈性石英毛細管柱經柱程序升溫技術分離，并用電子捕獲檢測器檢測。結果 五氯苯胺和滅蟻靈三水平的平均回收率分別為75.31%～106.31%，RSD分別為2.51%～6.98%；五氯苯胺的標準曲線為：y=194465x+209.21（r=0.9996）、滅蟻靈的標準曲線為：y=88626x+209.21（r=0.9995），五氯苯胺和滅蟻靈的線性范圍：2～0.02 μg/mL。結論 該法簡便，精密度、重復性及凈化效果好，可用于黃芪中五氯苯胺和滅蟻靈的殘留檢測。

黃芪；五氯苯胺和滅蟻靈殘留量；氣相色譜法

近年來，回歸大自然的潮流使人們對綠色藥品更為關注，世界各國對天然藥物的需求日益擴大。有機氯農藥是用于防治植物病、蟲害的組成成分中含有有機氯元素的有機化合物。其化學性質穩定，脂溶性大，殘效期長，易在脂肪體內蓄積，造成慢性中毒，嚴重危及人體健康[1]。我國出口的中草藥在歐美等國市場上多次因農藥殘留超標等原因被查扣，農藥殘留污染已成為中藥材走向世界的障礙，成為當前中藥材生產中急待解決的重要問題[2]。盡管我國已在1983年禁止使用六六六、滴滴涕等有機氯農藥，但由于其殘效期長，至今在土壤、地下水等環境中仍有殘存。而藥材的種植期較長，尤其是多年生的根類藥材，易受有機氯農藥的污染。對甘草中有機氯農藥的殘留量做了分析研究，呼吁有關方面對農藥污染中藥材的問題引起重視，確保中藥材的質量。

1 實驗材料

1.1 藥材

黃芪（批號：20130101、20130212、20130401，上海海虹實業（集團）巢湖今辰藥業有限公司提供），于60 ℃干燥4 h，冷至室溫后，粉碎，過三號篩，放入具塞錐形瓶中備用。

1.2 儀器

Agilent 7890A氣相色譜儀，附電子捕獲檢測器及自動進樣器；HP-5毛細管柱；XP-5電子天平；RV10旋轉蒸發器（IKA）。

1.3 試劑

農藥標準品：五氯苯胺標準儲備液（農業部環境保護科研監測所提供，濃度為200 μg/mL）；滅蟻靈標準儲備液（農業部環境保護科研監測所提供，濃度為200 μg/mL）；丙酮、石油醚（沸程60～90 ℃）、二氯甲烷均為分析純，且全部經過重蒸。

2 實驗方法[2,3]與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 標準溶液的配制

精密量取五氯苯胺和滅蟻靈標準儲備液各1 mL，置于100 mL容量瓶中，用石油醚（60～90 ℃）稀釋至刻度（2 μg/mL），作為標準使用液。

2.1.2 供試品溶液的配制[4]

精密稱取細粉4 g，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉6 g和二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲處理15 min，直至氯化鈉完全溶解，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置使水相與有機相完全分層，將有機相迅速移入裝有無水硫酸鈉10g的100 mL具塞錐形瓶中，脫水4 h，精密量取35 mL，置100 mL旋轉蒸發瓶中，40 ℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90 ℃）如前反復操作至二氯甲烷與丙酮除凈，用石油醚（60～90 ℃）溶解并轉移至10 mL具塞刻度離心管中，加石油醚（60～90 ℃）精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸1 mL，振搖1 min，離心（3000 r/min）10 min，精密量取上清液2 mL，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2 色譜條件

載氣：高純氮（純度＞99.999%），流速為1.0 mL/min；進樣口溫度：280 ℃，進樣量為1 μL，不分流進樣；ECD檢測器溫度為300 ℃；程序升溫：初始溫度90 ℃，保持1 min然后以40 ℃/min升至170 ℃，保持5 min；再以3 ℃/min升至230 ℃，保持3 min。在此色譜條件下，2 μg/mL的標準使用液中五氯苯胺和滅蟻靈的出峰順序見圖譜1。

圖1 五氯苯胺和滅蟻靈混合對照溶液的色譜圖[保留時間（min）：11.518-五氯苯胺、25.700-滅蟻靈]

2.3 精密度試驗

取2 μg/mL標準使用液連續進樣5次，按2.2色譜條件進行測定，五氯苯胺和滅蟻靈的峰面積值的RSD（%）分別為1.6%、2.0%。

2.4 標準曲線的繪制

精密量取標準使用液，用石油醚制成每毫升中分別含2.00 μg、1.00 μg、0.40 μg、0.20 μg、0.08 μg、0.04 μg、0.02 μg的溶液。分別進樣1 μL，按2.2色譜條件進行測定，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得到五氯苯胺的標準曲線為：y=194465x+209.21（r=0.9996）、滅蟻靈的標準曲線為：y=88626x+209.21（r=0.9995）。

2.5 穩定性試驗

取2 μg/mL標準使用液分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h進樣，按2.2色譜條件進行測定，五氯苯胺和滅蟻靈的RSD（%）分別為：2.1、1.3。可知五氯苯胺和滅蟻靈在12 h內穩定。

2.6 方法檢出限

首先用標準使用液配制一系列低濃度標準溶液，以石油醚為溶劑，然后按2.2色譜條件進樣，再以信噪比（S/N=3）時相應濃度確定檢出限。五氯苯的檢出限為0.40 ng/mL，滅蟻靈的檢出限為0.16 ng/mL。

2.7 重復性試驗

精密稱取批號為20130101的黃芪樣品6份，按2.1.2對樣品的處理方法進行提取、凈化，然后按2.2色譜條件進行測定，計算其峰面積的RSD，結果表明，該方法重復性良好。

2.8 供試品的測定

精密稱取不同批號的黃芪樣品各3份，按上述方法對黃芪樣品進行提取、凈化，然后按2.1.2色譜條件進樣分析，測定五氯苯胺和滅蟻靈的含量。結果表明：黃芪中沒有與滅蟻靈標準品相對應的峰出現，故該三批樣品中未檢出滅蟻靈，含五氯苯胺的分別為1.110-4ng/g、2.110-4ng/g和2.3×10-4ng/g。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取批號為20130101的黃芪樣品9份，分別加入標準混合對照品，三個添加水平，每個水平份樣，混勻，按2.2.1對樣品進行提取、凈化和測定，所得結果扣除相應樣品的各農藥含量后，計算各水平加樣回收率，用0.08 μg/mL標準混合對照品溶液做了隨行標準。結果表明，測定方法的準確度良好。

3 結論與討論

3.1 結論

由結果可知，本實驗的回收率、精密度及重現性試驗結果均符合農藥分析的要求。《中國藥典》2005年版均規定黃芪中五氯苯胺（五氯硝基苯的降解產物）不得高于100 ng/g，本實驗中藥材黃芪中農藥五氯苯胺的殘留量在1.55×10-4～2.3×10-4ng/g，符合標準。

3.2 討論

本實驗采用丙酮水溶液超聲波提取，加入氯化鈉和二氯甲烷，利用鹽析的原理使有機相和水相很好的分層[5]。同時使農藥由水相進入有機相，取出部分有機相濃縮、凈化，溶液的分配不需要在分液漏斗中進行，這樣可以減少提取的次數。再在旋轉蒸發儀水浴蒸至近干，濃縮后的有機相放在帶有可讀的離心管中，稀釋到所需刻度，然后加硫酸進行凈化處理，而且用硫酸磺化的步驟是在帶有刻度的離心管中進行，離心后取部分上清液作為待測液進行測定。另外，采用磺化法對于中草藥的干擾成分凈化非常完全，無干擾峰的存在。根據加樣回收率實驗和精密度實驗的結果可以看出，本法也符合國家關于農藥殘留檢測的要求且本法簡化了提取和凈化操作，減少了損失，提高了效率。

[1] 榮維廣,郭華,楊紅.我國中藥材農藥殘留污染研究現狀[J].農藥,2006,45(5):305-306.

[2] 朱日然,瀚海洋,朱宗民.黃芪中有機氯類農藥殘留量的毛細管氣相色譜測定[J].齊魯藥事,2009,28(11):663-664.

[3] 孟輝,劉晨明.中藥材黃芪中農藥殘留量檢測方法研究[J].遼東學院學報(自然科學版),2009,16(1):23-24.

[4] 中華人民共和國藥典(一部)[M].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社,2010:附錄57.

[5] 蔣開年,宋學偉,崔志斌,等.氣相色譜法測定黃芪甘草中有機氯農藥殘留量[J].西南民族大學學報(自然科學版),2008,34(1): 120-123.

R282.710.3

B

1671-8194（2014）18-0091-02