MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG在兒童肺炎支原體感染中的動態變化

黃淑媛 覃川平 黎偉霞 黃涌森 楊 妍 廖衛華 運秀杰

1.深圳市龍崗區社會福利中心，深圳 518172；2.廣東省東莞市南城醫院，廣東東莞 523071

MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG在兒童肺炎支原體感染中的動態變化

黃淑媛1覃川平1黎偉霞2黃涌森1楊 妍1廖衛華1運秀杰1

1.深圳市龍崗區社會福利中心，深圳 518172；2.廣東省東莞市南城醫院，廣東東莞 523071

目的探討MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG在兒童肺炎支原體感染中的動態變化情況，為患兒的診治提供依據。 方法98例患兒均留取咽拭子和血清標本，采用實時熒光PCR檢測患兒咽拭子標本中的MP-DNA；采用顆粒凝集法檢測患兒血清中MP-IgM；采用ELISA檢測患兒血清中MP-IgG。MP-DNA陽性或MP-IgM陽性或兩者都是陽性者均確診為肺炎支原體感染病例，觀察分析確診病例在不同病程時MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG的動態變化規律。結果98例患兒在就診當天MP-DAN的陽性率達76.53%，隨著病程的延長，MP-DNA陽性率逐漸下降；MP-IgM的陽性率在就診當天為36.73%，大約2周時達高峰，后緩慢下降；MP-IgG在就診當天的陽性率很低，只有3.06%，大約4周時達高峰，至第8周時仍持續高值，三者在不同病程時期的檢出陽性率差異有統計學意義（P＜0.01），且在就診當天、治療后1、2、4及8周時差異均有統計學意義（P＜0.01）。 結論 在肺炎支原體感染患兒不同的病程時期應動態監測MP-DAN、MP-IgM及MP-IgG，并進行綜合分析，實現優勢互補，以提高診斷的特異度和靈敏度，減少漏診和誤診，使患者得到早期正確的診斷及治療。

肺炎支原體；兒童；動態變化

肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）是一種呼吸道感染的常見病原體，在兒童社區獲得性肺炎中，有近40%由MP引起[1-2]。隨著MP的變遷，MP已成為小兒肺炎的主要病原體，并且感染率呈上升趨勢[3-4]，發病年齡也逐漸趨小。據臨床報道，應用大環內酯類抗生素治療MP感染的效果顯著，而β-內酰胺類抗生素無效，故及時準確的診斷可以有效地控制病情，避免延誤MP感染的治療，避免濫用抗生素，并能降低嚴重感染患兒的死亡率，因此，早期診斷出MP感染尤為重要。本研究回顧性分析了本院收治的98例MP-DNA陽性或MP-IgM陽性或兩者均為陽性的門診及住院患兒的臨床資料，探討MP-DNA、MP-IgM 及MP-IgG在兒童MP感染中的動態變化情況，為患兒的診治提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月～2013年3月以本福利中心及東莞市南城醫院98例MP-DNA陽性或MP-IgM陽性或兩者均陽性的門診及住院MP感染患兒為研究對象，年齡6個月～13歲，其中，男52，女46例。

1.2 方法

每例患兒均取就診當天、1周、2周、4周及8周的咽拭子檢測MP-DAN，并同時抽血進行MP-IgM及MP-IgG檢測；所有患兒均給予阿奇霉素（商品名：希舒美，輝瑞制藥有限公司，0.1 g/袋），10 mg/（kg·d），1次/d，用3 d停4 d，1周為1個療程，共治療4周。

1.2.1 MP-IgG的測定 采用ELISA方法，由晶美生物工程公司提供的MP-IgG抗體試劑盒，操作參照試劑盒內說明書，標本OD值與陰性對照OD值比較，以OD值≥2.0為陽性。

1.2.2 MP-IgM的測定 采用顆粒凝集法，Sero-Dia-MycoⅡ試劑盒由日本Fujirebio Inc提供，血清抗體56℃滅活，操作方法按說明書進行，同時設立陽性與陰性對照孔，滴度≥80為陽性。

1.2.3 MP-DNA的測定 采用實時熒光PCR檢測患兒咽拭子標本中的MP-DNA，試劑由中山大學達安基因股份有限公司提供，儀器采用美國生物系統ABI-7500熒光定量PCR儀。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件對相關數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

共有98例患兒入選，隨著病情的好轉及治愈，至第8周時只有75例患兒參與隨訪。就診當天患兒MP-DAN的陽性率最高，達76.53%，隨著病程的進展，MP-DNA的陽性率逐漸下降；MP-IgM的陽性率至第2周時達高峰，然后緩慢下降；MP-IgG在就診當天的陽性率很低，至第4周時達高峰，至第8周時仍持續高值。MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG在不同病期檢出率差異均有統計學意義（P＜0.01），故三者對MP感染的診斷價值高低因病程不同而異（表1，圖1）。

表1患兒不同病程MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG陽性率的比較[n（%）]

圖1 患兒不同病程MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG陽性率的動態變化情況直方圖

3 討論

MP感染在全球范圍內均有發生，是繼細菌、病毒后，引起兒童呼吸道感染又一常見的病原，且MP感染的發病率有逐年上升趨勢，危害較大，嚴重者可引起全身炎癥反應綜合征及心功能不全等肺外并發癥[5]。MP對β-內酰胺酶類抗生素無效，對大環內酯類抗生素療效顯著。因此，早期正確診斷及如何提高MP感染的診斷水平受到普遍關注。MP的分離培養雖然對診斷和鑒別有決定性意義，但是由于耗時較長，培養較困難，且檢出率低，故在臨床上很少應用，血清特異性抗體測定是目前臨床診斷MP感染的最常用的實驗室證據[6-7]。

MP-IgM是機體受MP感染后最早出現的特異性抗體，于發病后1～2 d即可檢出，大部分患者在感染后1周內出現，少部分患兒在感染后7～10 d出現，約2周時達到高峰，可以持續12～16周甚至更長的時間[8]，IgM抗體陽性可作為早期或急性期感染的診斷指標。本研究提示，患兒MP-IgM在就診當天的陽性率為36.73%，至第2周時為79.59%，達到高峰，直至第8周時仍有較高的陽性率。MP-IgG的出現較晚，從病程第2周起陽性率開始增高，至第4周時達高峰，第8周時仍居高不下，基本與文獻報道一致。

國內普遍認為，MP-IgM在感染3～7 d后出現，比MP-IgG出現早，提示MP近期和當前感染，但MP-IgM陽性并不總是表示當前的感染狀態，部分患者可達半年之久，在某些病例中，MP-IgM在感染1年后仍然持續存在；另外，MP-IgM在再次感染MP后含量極微，或者無法檢測到[9]。MP-IgM抗體的檢測受多種因素的影響。①年齡：嬰幼兒免疫系統尚處于發展期，發育還未完全，在MP感染后患兒抗體生成不足，影響抗體檢出陽性率；②病程：抗原刺激機體免疫應答產生抗體需要一段時間，MP-IgM抗體發病1周左右時才開始上升，對于病程＜1周的患兒，檢測MP-IgM抗體時容易造成漏診、誤診；③機體免疫狀態：對于免疫功能低下的患兒，其免疫反應低，IgM升高幅度很小，導致MP-IgM抗體的陽性率低。因此，血清MP-IgM抗體的檢測在臨床應用中有一定的局限性[7，10]，僅依賴于MP-IgM的檢測，有可能造成誤診或漏診。而IgG 較IgM出現晚，在體內持續時間較長，可以作為回顧性診斷和亞急性感染狀態的指標，進行病原學追蹤。故需結合MP-DNA和MP-IgG以減少漏診和誤診，并進行病原學追蹤。

與MP-IgM相比，MP-DNA陽性率在發病初期就很高，且不受病程是否達到高峰及感染程度的影響，而產生抗體需要一定時間[11]。尚曉云[12]發現，不少經臨床及實時定量PCR確診的MP感染患兒，僅在出院前的最后1次MP-IgM檢測才出現陽性，有些病后1周MP-IgM為陰性的MP感染患兒，其病情可能較陽性者嚴重。如果研究者只選擇MP-IgM陽性的患兒，就有可能可能忽略了即將進展為重癥臨床表現的患兒[13]。因此，在發病初期MP-DNA對MP感染患兒具有很高的診斷價值，可以作為MP感染的早期診斷指標。MP-DNA在發病初期的陽性率較高，隨著治療和病情的轉歸，陽性率迅速下降轉陰，表明MP-DNA可以直觀地反映MP在體內感染和復制的情況。通過觀察MP-DNA動態變化，可以為臨床動態觀察治療效果提供依據[14]，故應聯合動態監測MP-DNA和MP-IgM來減少漏診和誤診的發生。本研究通過觀察MP-DNA在不同病程的動態變化，發現患兒的MP-DNA隨著病程的延長和康復好轉其陽性率逐漸下降，表明MP-DNA可以直觀地反映MP在體內的感染和復制情況，可以為臨床動態觀察治療效果提供依據，可用于患兒病情轉歸的預測評估。

綜上所述，臨床中遇到懷疑為MP感染的患兒時最好同時檢測MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG，以提高診斷的特異度和靈敏度，減少漏診和誤診的發生，使患者得到早期正確的診斷及治療，而動態檢測MP-DNA、 MP-IgM及MP-IgG，既可在診斷中優勢互補，又可了解疾病的病程及轉歸情況，為臨床診斷治療提供參考。

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Dynamic changes of MP-DNA,MP-IgM and MP-IgG in children with Mycoplasma pneumoniae infection

HUANG Shu-yuan1QIN Chuan-ping1LI Wei-xia2HUANG Yong-sen1YANG Yan1LIAO Wei-hua1YUN Xiu-jie1
1.Social Welfare Centre of Longgang District in Shenzhen City of Guangdong Province,Shenzhen 518172,China; 2.Nancheng Hospital of Dongguan City in Guangdong Province,Dongguan 523071,China

ObjectiveTo explore the dynamic changes of MP-DNA,MP-IgM and MP-IgG in children with Mycoplasma pneumoniae infection.MethodsThroat swabs and serum samples were taken from the 98 cases of children,MP-DNA in throat swabs was detected by real time fluorescence PCR,serum MP-IgM was detected by pellet agglutination assay, serum MP-IgG was detected by ELISA.Children with positive MP-DNA or MP-IgM alone or both MP-DNA and MPIgM were all diagnosed as Mycoplasma pneumoniae infection,the changes in the positive rates of MP-DNA,MP-IgM and MP-IgG during different courses were observed and analyzed.ResultsIn the early disease course,The positive rate of MP-DAN was up to 76.53%,and the positive rate of MP-DAN was gradually decreased with the prolongation of the disease.The positive rate of MP-IgM was 36.73%in the early disease course，about 2 weeks up to peak,then decreased slowly.In the early disease course,the positive rate of MP-IgG was very slow,which was only 3.06%,and then it reached the peak after 4 weeks of the treatent,and continued high value until to eight weeks,the differences of the positive rate of MP-DAN,MP-IgM and MP-IgG during different course were all statistically significant(P＜0.01),and there were statistical differences in the early disease course,second week,fourth weeks and eighth weeks(P＜0.01).ConclusionIn different periods of children with Mycoplasma pneumoniae infection,the dynamic monitoring of MP-DAN,MP IgM and MP-IgG should be taken,and gives synthetically analysis,complement each other in order to improve the diagnostic sensitivity and specificity,and reduce missed diagnosis and misdiagnosis,make the patients get early correct diagnosis and treatment.

Mycoplasma pneumoniae;Children;Dynamic change

R375+.2

A

1674-4721（2014）02（a）-0095-03

2013-11-26本文編輯：袁 成）