干眼癥結膜印跡細胞學檢查的臨床研究

郭建軍，陳則云，田學武，王 敏

(東莞市常平醫(yī)院眼科，廣東 東莞 523000)

干眼癥結膜印跡細胞學檢查的臨床研究

郭建軍，陳則云，田學武，王 敏

(東莞市常平醫(yī)院眼科，廣東 東莞 523000)

目的探討結膜印跡細胞學檢查(CIC)在干眼癥診斷中的作用。方法選擇2011年1月至2013年6在我院就診的干眼癥患者180例為觀察組，按干眼癥的分級，輕度65例，中度58例，重度57例；另選擇180例健康者作為對照組。所有研究對象均進行淚液分泌實驗(S-I-T)、淚膜破裂時間(BUT)、熒光素染色(FLS)檢查；同時重點進行CIC檢查。結果S-I-T、BUT、FLS檢查指標結果，觀察組與對照組差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。觀察組杯狀細胞數量明顯少于對照組(P＜0.01)；觀察組輕、中、重度患者的杯狀細胞數均少于對照組(P＜0.05或P＜0.01)。對照組CIC分級主要集中于0級和1級；干眼癥患者則多集中于1、2、3級；其中輕、中度多集中于1、2級，重度主要為3級。觀察組與對照組CIC分級有明顯不同，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。觀察組輕、中、重度患者CIC分級分別與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。結論CIC檢查能夠反映淚膜黏液層的病理變化情況，可用于區(qū)分正常人與干眼癥患者并可了解干眼的病程變化。

結膜印跡細胞學(CIC)；杯狀細胞；臨床研究

干眼癥是一種常見的慢性眼表疾病，其發(fā)病率隨年齡增長而逐漸提高[1]。臨床常用的診斷干眼癥的檢查方法包括角膜熒光染色(Corneal fluorescein staining，FLS)、淚膜破裂時間(Break up time，BUT)、淚液分泌試驗(Schirmer test，S-I-T)等。上述方法特異性均不高[2]。眼部印跡細胞檢查(Conjunctival impression cytology，CIC)是一種采用醋酸纖維素濾紙或生物孔膜獲取結、角膜表層細胞標本的一種檢查法。對于傳統(tǒng)的三項試驗結果可以進行再檢驗，以減少假陰性及假陽性[3]。本研究觀察了CIC檢查情況，現總結如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年1月至2013年6在我院就診的干眼癥患者180例為觀察組；另選擇180例健康者作為對照組。觀察組中男性98例，女性82例；年齡32～65歲，平均(53.24±8.36)歲；經檢查均符合干眼癥診斷標準；按干眼癥的分級，輕度65例，中度58例，重度57例。對照組中男性95例，女性85例；年齡32～65歲，平均(54.76±8.74)歲；對照組健康者均符合以下條件：①經裂隙燈仔細檢查，排除干眼、瞼緣炎及眼過敏癥；②無眼瞼及眼表異常；③無角膜接觸鏡配戴史；④無影響淚液分泌的全身與局部用藥史；⑤無眼部手術史；⑥無膠原血管病或其他全身疾病史。

1.2 干眼癥的診斷標準 ①主觀癥狀：如干澀、視疲勞等；②BUT結果異常；③S-I-T結果＜10 mm；④FL：觀察眼表面損害情況。在排除眼表其他疾病后，BUT≤5 s時，①+②可確診為干眼；或BUT≤10 s時，①+②+③或①+②+④可確診為干眼癥。干眼癥的分級見表1。

表1 干眼癥的輕、中、重度的分級

1.3 方法

1.3.1 癥狀及病史詢問 詳細詢問患者主要癥狀，如眼睛干澀、燒灼感等；以及生活工作環(huán)境、曾患疾病，如長期空調環(huán)境工作、駕車、使用電腦、眼表化學傷、熱灼傷等等。

1.3.2 常用淚液檢查方法 ①裂隙燈檢查：淚河線寬度(＜0.3 mm)；瞼緣充血，不規(guī)整；腺口出現黏稠分泌物；結膜充血，乳頭增生；角膜上皮角化、水泡、變性、潰瘍、白斑、血管翳。②S-I-T：室內普通光線下采用標準淚液分泌量測試條(SHOWA YAKUHIN KAKOCO，LTD)檢測，折線處折起，置于下瞼中外1/3結膜囊內，5 min取下從折起處記濕長。③BUT：1%熒光素鈉10μ1滴入，測BUT。④FLS：1%熒光素鈉10μ1滴入，觀察角膜上、中、下三部分著染情況。每部分按0～3計分。0=無著染，1=散在點染，2=中等量斑點染色，3=密集斑點狀染色。

1.3.3 CIC檢查

1.3.3.1 方法 患者平臥于檢查床上，0.5%的卡因點眼兩次，開瞼器開瞼。用濾紙吸去下穹隆部淚液。用小顳子夾醋酸纖維濾紙，印取角膜顳側球結膜上皮細胞；然后置入10%福爾馬林中；行PAS染色，脫水干燥后光學顯微鏡下觀察。

1.3.3.2 分級 據Nelson's分級[4]標準進行分級：0級，結膜上皮細胞形態(tài)、大小正常，胞漿藍綠色，N/C為1:2，杯狀細胞密集，平均1個低倍視野下見12.1個杯狀細胞；1級，結膜上皮細胞輕擴大，胞漿藍綠色，N/C為1:3，杯狀細胞密度下降，平均1個低倍視野下見7.4個杯狀細胞；2級，所有結膜上皮細胞均擴大，變扁平，胞漿蘭綠或粉紅色，N/C為1:4～1:5，輕度角化，平均1個低倍視野下見2.7個杯狀細胞；3級，結膜上皮細胞胞漿內出現顆粒狀物，核固縮崩解，胞漿成粉紅色，N/C為1:6～1:8，出現不同程度的角化，杯狀細胞完全喪失。

1.4 統(tǒng)計學方法 使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數±標準差()表示，其組間比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各項檢查結果比較 S-I-T、BUT、FLS檢查指標結果，觀察組與對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。觀察組中輕度、中度、重度患者S-I-T、BUT、FLS檢查指標分別與對照組比較，差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)，見表2。

表2 S-I-T、BUT、FLS檢查指標比較()

表2 S-I-T、BUT、FLS檢查指標比較()

注：與對照組比較，aP＜0.05；與對照組比較，bP＜0.01。

觀察組輕度中度重度對照組180(360) 65(130) 58(116) 57(114) 180(360) 3.63±2.52b8.03±0.64a5.16±0.53b1.83±0.62b11.63±3.53 4.13±2.14b8.14±0.73a5.32±0.62b1.74±0.64b10.93±3.32 5.93±2.63b2.73±0.53a6.02±0.46b10.83±1.64b0.16±0.11

2.2 結膜杯狀細胞數量 觀察組杯狀細胞數量明顯少于對照組(P＜0.01)；輕、中、重度患者的杯狀細胞個數均少于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，見表3。

表3 結膜杯狀細胞數量()

表3 結膜杯狀細胞數量()

注：與對照組比較，aP＜0.05；與對照組比較，bP＜0.01。

觀察組輕度中度重度對照組180(360) 65(130) 58(116) 57(114) 180(360) 58.74±8.94b126.32±12.43a56.23±7.34b 11.64±3.46b 237.64±14.57

2.3 CIC分級情況 正常對照組CIC分級主要集中于0級和1級，干眼癥患者分級多集中于1、2、3級，其中輕度、中度患者多集中于1、2級，N/C主要為1:3、1:4、1:5，杯狀細胞明顯減少，上皮細胞核變長、梭形；重度患者主要為3級，N/C主要為1:6或1:7，明顯角化，核固縮、崩解，幾無杯狀細胞。觀察組與對照組CIC分級明顯不同(P＜0.05)。輕、中、重度患者CIC分級與健康者均不同(P＜0.05或P＜0.01)。

3 討論

干眼癥是一種常見的眼表疾病。近年來，盡管已有大量動物模型及臨床試驗研究干眼病，但其確切發(fā)病機制仍不明確。研究表明引起淚膜不穩(wěn)定的原因均可導致干眼癥。淚膜是眼表結構的重要組成部分，由外向內分為三層，最內層為粘液層，黏液層粘附于角膜微絨毛、微皺壁上，使淚膜能均勻地覆蓋于眼表，并可降低眼表面張力。黏液主要由結膜杯狀細胞產生，因此通過觀察杯狀細胞數變化可了解眼表黏液層的情況。20世紀70年代，Egbert等首次提出CIC方法，該方法對眼部細胞無損傷，同時又能觀察到不同細胞之間的比例特點。因此，被廣泛應用于多種眼表研究。對于干眼癥的診斷，傳統(tǒng)的3項診斷性試驗結果(S-I-T、BUT、FLS)由于受到個體差異、檢查者操作及主觀判斷等諸多因素影響。文獻報道上述三項診斷客觀性和可重復性分歧較大[5]。CIC檢查是通過一種帶有微孔，具有較強吸附力的濾膜在結膜面貼覆片刻后能夠得到杯狀細胞分泌的黏蛋白印記，通過PAS聯(lián)合蘇木素染色可以顯示黏蛋白及所有細胞核的分布，間接反映杯狀細胞及結膜上皮細胞的形態(tài)和數量。CIC檢查屬于病理形態(tài)學診斷，通過觀察患者結膜上皮細胞形態(tài)及杯狀細胞的變異情況提供診斷依據，因此，可作為杯狀細胞缺乏型干眼癥的診斷金標準。

本研究結果顯示，干眼癥患者上皮細胞呈現各種不同形態(tài)的變化，出現擴大、扁平等形狀；杯狀細胞的數量明顯減少以至完全消失。隨著CIC分級的升高，患者的臨床癥狀更加嚴重，淚液分泌明顯減少。其中輕、中度患者大多數為1、2級，重度患者主要為3級。說明結膜印跡細胞學檢查在早期干眼癥的診斷中具有特異性，與臨床患者的癥狀、體征相符。臨床可通過CIC分級進行干眼癥的診斷。通過CIC還可觀察炎細胞的情況：正常眼CIC中很少見炎細胞，而在KCS患者CIC中炎細胞常出現，說明干眼的發(fā)病中伴有炎癥。由于淚液中的IgA等免疫球蛋白具有抑制微生物的作用，干眼癥的炎癥可能由淚液減少、防御力降低所致[6]。已有研究表明T細胞介導的炎癥反應可能是干眼病發(fā)生的核心機制[7-9]，這與本研究的推論相符。臨床研究亦發(fā)現，局部抗炎藥物治療可以改善干眼患者的眼部不適癥狀，明顯提高患者生活質量[10-11]。此外還應注意，眼部分泌物會干擾檢查的準確性，導致出現假陽性。因此，在檢查的過程中，如果發(fā)現患者分泌物較多，應先清理或沖洗結膜囊后，再進行檢查操作。

綜上所述，CIC檢查安全、實用，可對KCS的早期診斷及療效評估提供幫助，且操作簡便，值得臨床推廣應用。

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Clinical study of conjunctival impression cytology for dry eye.

GUO Jian-jun,CHEN Ze-yun,TIAN Xue-wu, WANG Min.Department of Ophthalmology,the Hospital of Changping,Dongguan 523000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo evaluate the applicability of Conjunctival impression cytology(CIC)in the diagnosis of dry eye.MethodsA total of 180 patients with dry eye in our hospital from Jan.2011 to Jun.2013 were assigned into observation group and another 180 healthy physical examinees were selected as control group.Both groups were tested by CIC in addition to Schirmer Test(S-I-T),Tear Break-Up Time(BUT),and Corneal Fluorescein Staining(FLS).And then the results were compared.ResultsThere was a significantly difference in indexes of S-I-T,BUT,FLS and CIC between the observation group and the control group(P＜0.01).The number of goblet cells in the observation group was less than that in the control group(P＜0.01).Furthermore,the number of goblet cells of the mild,moderate and severe patients in the observation group were all less than those in the control group(P＜0.05 or P＜0.01).The controls were mostly graded to 0 or 1 revealed by CIC,while patients in the observation group were graded as 1,2 or 3 with the same method.In the observation group,mild and moderate patients were revealed to be grade 1 or grade 2,while severe patients were grade 3.There was a significant difference in CIC grade between the observation group and the control group(P＜0.01).The CIC Grades of mild,moderate,and severe patients in the observation group were all significantly different from those in the control group(P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion CIC grading and goblet cell density can be used to distinguish dry eye patients and track the progression of dry eye as well.

Conjunctival impression cytology;Goblet cells;Clinical study

R777.34

A

1003—6350（2014）14—2072—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.14.0804

2014-02-14)

東莞市科技（衛(wèi)生）計劃項目（編號：201110515035192）

郭建軍。E-mail：1577590959@qq.com