咽拭子快速培養在支原體感染診斷中的應用價值

倪樹芳，姚文江

(南京醫科大學附屬南京醫院南京市第一醫院兒科，江蘇南京 210006)

·臨床經驗·

咽拭子快速培養在支原體感染診斷中的應用價值

倪樹芳，姚文江

(南京醫科大學附屬南京醫院南京市第一醫院兒科，江蘇南京 210006)

目的探討咽拭子快速培養在兒童肺炎支原體(MP)感染早期診斷中的價值。方法對104例兒童下呼吸道感染者同時進行咽拭子肺炎支原體快速培養及MP-IgM檢測，比較兩者陽性率。結果病程≤7 d，MP快速培養陽性率(32.7%)明顯高于血清MP-IgM陽性率(16.4%)，差異有統計學意義(χ2=3.976，P=0.046)，而病程＞7 d咽拭子MP快速培養陽性率(22.4%)低于MP-IgM檢測陽性率(55.1%)，差異有統計學意義(χ2=11.004，P= 0.001)。結論病程≤7 d的患兒MP快速培養陽性率更高，MP快速培養對兒童MP感染的早期篩查診斷具有一定的參考價值。

咽拭子；肺炎支原體；快速培養

肺炎支原體(Mycoplasa pneumoniae，MP)是導致兒童急性下呼吸道感染的重要病原，其臨床表現多種多樣，如治療不徹底易反復發作，診斷不及時易誘發肺外并發癥，如腦炎、腎炎、心肌炎、肝功能受損、免疫性溶血性貧血等。因此探討肺炎支原體感染的早期診斷指標具有重要意義。筆者于2012年1月至2013年8月對我院兒科住院及門診診治的104例兒童下呼吸道感染者進行咽拭子支原體快速培養鑒定，并與MP-IgM檢測法(被動凝集法)進行比較，以探討咽拭子快速培養鑒定在支原體感染診斷中的應用價值，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料本組患兒104例，其中男性47例，女性57例。發病年齡：＜2歲17例，2～8歲35例，8～14歲52例。下呼吸道感染的診斷(主要是支氣管炎和肺炎)符合諸福棠《實用兒科學》第7版的臨床診斷標準。臨床表現均有咳嗽，多為刺激性干咳；發熱40例，多為弛張熱或不規則熱；喘憋10例；氣促14例。體征：肺部叩診濁音，可聞及中、小水泡音43例，哮鳴音18例，肺部聞及干啰音、痰鳴音24例。X線胸片提示支氣管炎25例，支氣管肺炎61例，大葉性肺炎18例。

1.2 方法104例患兒同時進行咽拭子肺炎支原體快速培養鑒定和MP-IgM檢測。

1.2.1 肺炎支原體快速鑒定培養試劑盒由武漢菁花時間科技有限公司提供(生產許可證：鄂食藥監械生產許可20090427號)，采樣部位及樣本：取無菌咽拭子一支，用生理鹽水浸潤甩干，于咽后壁、扁桃體部位捻轉數次，粘取咽部、扁桃體部位的分泌物。接種時用浸潤過生理鹽水的棉簽或接種環沾取足量標本，將帶樣拭子于瓶口處折斷置于瓶內，擰緊蓋搖勻，在(37±1)℃溫箱內培養6 h后觀察結果。按操作程序要求完成檢測。由專人進行操作，質量控制。

1.2.2 MP-IgM檢測采集患兒靜脈血2 ml分離血清，應避免溶血，當天予以檢測。檢測方法采用被動凝集法檢測，采用日本富士瑞必歐株式會社生產的肺炎支原體抗體檢測試劑盒，商品名：賽樂迪亞-麥可Ⅱ[注冊證編號：國食藥監械(進)字2009第3402832號]。檢測原理：被動凝集法檢測肺炎支原體抗體是體外診斷試驗，用肺炎支原體細胞膜成分致敏人工明膠粒子制造而成，致敏粒子與人血清中存在的肺炎支原體抗體發生凝集反應。按操作程序要求完成檢測，結果判斷標準：MP抗體滴度≥1:80者為陽性，最高檢出限可達1:1 280。結果可疑的患兒入院7～10 d再次采血，滴度≥1:80者為陽性，或雙份血清MP抗體滴度四倍以上升高也為陽性。

1.3 統計學方法應用SPSS13.0軟件進行統計學分析，陽性率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法檢測肺炎支原體感染的結果104例下呼吸道感染患兒中MP快速培養陽性29例(27.9%)，血清MP-IgM陽性36例(34.6%)，差異無統計學意義(χ2=1.097，P=0.295)。104例MP抗體檢測患兒中單份血清送檢者41例，雙份血清送檢者63例，第一份血清檢測MP-IgM陽性共25例(24.0%)，雙份血清陽性共36例，有11例第二份血清MP-IgM轉為陽性。

2.2兩種方法檢測不同年齡階段患兒的MP感染情況MP-IgM陽性率：＜2歲最低(11.8%)，8～14歲最高(44.2%)，陽性率隨年齡增加逐漸增高，各年齡組之間的差異有統計學意義(χ2=6.203，P=0.045)。咽拭子MP快速培養鑒定：＜2歲陽性率最高(35.3%)，2～8歲陽性率最低(20.0%)，各年齡組之間的差異無統計學意義(χ2=1.761，P=0.415)，見表1。

表1 兩種方法檢測不同年齡階段患兒MP感染陽性率變化(例)

2.3 兩種方法檢測不同病程階段患兒MP陽性率情況病程≤7 d的患兒55例，MP快速培養陽性率為32.7%，明顯高于MP-IgM檢測陽性率(16.4%)，差異有統計學意義(χ2=3.976，P=0.046)；而病程＞7 d的患兒MP快速培養陽性率為22.4%，明顯低于MP-IgM陽性率(55.1%)，差異有統計學意義(χ2=11.004，P= 0.001)，見表2。

表2 兩種方法檢測不同病程階段患兒的MP感染情況(例)

3 討論

支原體是一種介于病毒和細菌之間能獨立生活的最小微生物，年幼兒MP感染率低于年長兒，但更為嚴重[1-2]。肺炎支原體感染一般起病隱匿，胸部X線也無特異性，僅靠臨床診斷較為困難，同時病程長、肺外并發癥多，易造成漏診、誤診，及早的病原學檢查對早期診斷及臨床用藥有重要指導意義。

肺炎支原體感染的實驗室診斷方法主要依靠支原體培養、血清學檢查和核酸檢測等實驗室檢查手段[3]。PCR方法可用于檢測咽喉分泌物、痰液及血清中MP-DNA，敏感性和特異性高，對MP感染的早期診斷意義較大[1，4-5]。但PCR方法假陽性高，操作復雜，對實驗室環境要求較高，需要昂貴的儀器，檢測費用也較高，從而在一般實驗室不能普及開展[6]。經典的MP分離培養鑒定操作十分繁瑣，且陽性率低，對結果進行判定需要2～3周，不利于早期診斷。肺炎支原體感染機體后可刺激機體產生IgG和IgM抗體，MP感染臨床癥狀出現后的1周血清中IgM方可檢出，10～30 d達高峰，12～26周消失，MP-IgG則在體內可存在1～2年，甚至更長。

目前MP-IgM檢測是診斷MP感染的主要指標[7-9]。本研究顯示：MP-IgM陽性率＜2歲最低，8～14歲最高，MP-IgM陽性率隨年齡增加逐漸增高，這與機體免疫系統發育成熟度有關[10]，年齡越小，免疫系統發育越不成熟，易導致假陰性結果。本研究還顯示：病程大于7 d MP-IgM陽性檢出率較高，MP感染臨床癥狀出現后7～10 d是MP-IgM檢測的最佳時機[11]。104例患兒63份復查第二份血清，有11例MP-IgM轉為陽性，故雙份血清可減少漏診。MP快速培養法，利用培養基中快速生長因子進行增殖，分解糖類，產生氫離子使培養基中的pH值降低，培養基中的指示劑由原來的紅色轉變為黃色來判斷MP生長，標本中其他細菌因培養基中加入了青霉素、醋酸鉈和生物抑菌劑等被抑制，MP快速培養法簡便快速，陽性標本24 h即可報告。本研究顯示：MP快速培養陽性率(27.9%)低于血清MP-IgM陽性率(34.6%)，但差異無統計學意義。咽拭子MP快速培養不受免疫系統的影響，但受口腔中食物殘渣、酸性飲料和采樣方法的影響而出現假陰性；本研究顯示，病程≤7 d的患兒MP快速培養陽性率明顯高于MP-IgM檢測，而病程大于7 d的患兒MP-IgM陽性率更高。故病程早期的患兒，咽拭子MP快速培養鑒定有一定的參考意義，更有助于早期診斷。

血清MP-IgM檢測易受患兒的病程、年齡、機體免疫功能狀態等多種因素影響，MP感染臨床發病7～10 d為檢測IgM為最佳時機，不利于早期診斷與治療[12]，而雙份血清采集耗時較長，且不易為患兒家長接受。MP快速培養法簡便快速，陽性標本24 h即可報告，實驗條件要求不高，無需特殊儀器設備，適合一般實驗室或基層醫院開展應用。因此，兩種方法各有特點，我們認為，臨床應根據患兒的不同病程、不同年齡情況，結合上述兩種特異性檢測結果進行綜合分析，從而提高小兒肺炎支原體感染診斷的準確率，有利于早期診斷，早期治療，指導抗生素的合理應用。

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R563.1

B

1003—6350（2014）12—1807—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.12.0700

2013-09-30)

倪樹芳。E-mail：nsf951203@sina.com