以梔子苷的含量確定房縣產梔子的最佳成熟度及藥用部位*

張曉燕,鄧雪華,謝勇,盧敏,毛如續

(1.湖北醫藥學院附屬人民醫院中藥藥理實驗室,十堰 442000;2.湖北醫藥學院藥學院,十堰 442000;3.湖北神農本草中藥飲片公司,十堰 442000)

以梔子苷的含量確定房縣產梔子的最佳成熟度及藥用部位*

張曉燕1,2,鄧雪華2,謝勇2,盧敏2,毛如續3

(1.湖北醫藥學院附屬人民醫院中藥藥理實驗室,十堰 442000;2.湖北醫藥學院藥學院,十堰 442000;3.湖北神農本草中藥飲片公司,十堰 442000)

目的 測定房縣產不同成熟程度梔子的不同部位中梔子苷的含量,為確定其最佳的成熟度和藥用部位提供依據。方法將進入成熟期的梔子果從全青到黃紅分為4種成熟度,建立高效液相色譜法分別測定每種成熟度果實不同部位梔子苷的含量。結果測得該4種成熟度梔子果實的梔子苷含量均可達到《中華人民共和國藥典》標準,其中青灰色全果中含量高達13.01%。結論成熟期梔子果的成熟度與梔子苷的含量呈負相關,果實青灰色為最佳成熟度。《中華人民共和國藥典》載全果入藥科學合理。

梔子,房縣;梔子苷;含量;成熟度

梔子來源為茜草科植物梔子(Gardenia jasminoidesEllis)的干燥成熟的果實[1],又名黃梔子、山梔子、水梔子、越桃、山黃梔等[2]。梔子具有瀉火除煩,清熱利尿,涼血解毒等功效。用于熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍等癥的治療[1]。梔子中含有環烯醚萜類物質、黃酮、揮發油、有機酸和皂苷等化合物,國內外公認其有效成分為環烯醚萜類,其中含量最高的是梔子苷[3],《中華人民共和國藥典》2010年版規定梔子的鑒別和定量指標也是梔子苷[4]。梔子主產于我國江西、湖南、浙江、福建和廣東等地。近年來湖北各地均有廣泛種植,在十堰市房縣有部分藥農從江西吉安引進種苗,進行了大面積人工種植。為了合理利用資源,保證藥效最大化,筆者以梔子苷含量為指標,研究梔子果實藥用最佳的成熟度和藥用部位,現將結果報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20AD高效液相色譜色譜儀(日本SHIMADZU);液相系列(LC-20AD泵,SIL-20A自動進樣器,SPD-M20A檢測器);LC solution色譜工作站;色譜柱:Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm);FA2004萬分之一電子分析天平(上海天平儀器廠),KQ-500DV超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。KWY-101型電熱恒溫干燥箱(武漢市武昌實驗儀器廠)。

1.2 材料 于2013年10月25日采湖北省十堰市房縣青峰鎮17組3年生梔子的果實,經本文作者與中國植物志核對鑒定為梔子(Gardenia jasminoidesEllis),按果皮顏色分為青灰、青黃、全黃和黃紅4種成熟度,分別置于60℃恒溫干燥箱中充分干燥,再分離果皮和種仁作為供試樣品;梔子苷對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:0749-9404,供含量測定用);甲醇、乙腈為色譜純;水為超純水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Gemini C18(250 mm× 4.6 mm,5μm);流動相:乙腈-水(15∶85);檢測波長:238 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:30℃。對照品與樣品色譜圖見圖1。

A.梔子苷對照品;B.梔子樣品;1.梔子苷圖1 梔子苷對照品及梔子樣品HPLC圖譜A.geniposide reference substance;B.gardenia specimen;1. geniposideFig.1 HPLC chromatograms of geniposide reference substance and gardenia specimen

2.2 對照品溶液的制備 精密稱定干燥至恒質量的梔子苷對照品2.8 mg,置5 mL量瓶中,加甲醇至刻度混勻,配成濃度為0.56 mg·mL-1對照品儲備液。取對照品儲備液1 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度超聲混勻,即得濃度為56μg·mL-1對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取不同成熟程度充分干燥的梔子樣品分別分成全果、果仁、果皮3部分,搗碎過四號篩,精密稱定各樣品粉末0.1 g,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱定質量,超聲提取20 min,放冷至室溫,用甲醇補足減失的質量,搖勻,濾過,取續濾液10 mL于25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,超聲混勻,用孔徑0.45μm的微孔濾膜過濾,即得。

2.4 線性范圍的考察 精密吸取“2.2”項下對照品儲備液3 mL于容量瓶中,倍稀法配成濃度為28,56, 201.6,336,560μg·mL-1的對照品溶液,分別進樣2μL,按上述色譜條件測定,記錄色譜圖。以進樣量(μg)為橫坐標(X),峰面積為縱坐標(Y),繪制標準曲線。回歸方程:Y梔子苷=1.59×106X-9.42×103,n=5,r= 0.999,表明梔子苷在28～560μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.5 精密度實驗 精密吸取上述梔子苷對照品溶液5μL,按上述色譜條件,分別進樣6次,記錄梔子苷峰面積,計算梔子苷峰面積的RSD=0.35%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.6 重復性實驗 取同一種成熟度的梔子全果樣品6份,精密稱定,按上述供試品溶液制備方法制備供試品,再按上述色譜條件進樣分析,記錄梔子苷峰面積,計算6份樣品中梔子苷的RSD=1.67%(n=6),表明該方法重復性良好。

2.7 穩定性實驗 取同一供試品溶液,按上述色譜條件,每2 h進樣5μL進行分析,共測6次,記錄梔子苷峰面積,計算得該樣品中梔子苷的RSD=1.85%(n= 6),結果表明供試品溶液在12 h內基本穩定。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的全黃梔子果實的果殼粉末0.106 4 g,準確加入56μg·mL-1的對照品溶液8 mL,按上述“2.3”項供試品溶液制備方法制備供試品,再按上述色譜條件進樣分析,計算梔子苷得加樣平均回收率為96.37%,RSD=1.2%,結果見表1。

2.9 梔子果實不同部位梔子苷含量測定結果 取上述充分干燥的不同成熟度的梔子果實,分成全果、果皮與果仁3部分,按“2.3”項供試品溶液制備方法制備各供試樣溶液,再按上述色譜條件分別進樣測試,記錄峰面積,以梔子苷含量計算各樣品溶液中環烯醚萜類的質量分數,結果表明,青灰色果實梔子苷含量最高。見表2。

3 討論

3.1 梔子采收的最佳成熟度 梔子果實膨大后果皮顏色要經歷青灰到黃紅漸變的成熟過程,果實的大小變化不大。合理采收的依據應以梔子苷含量最大化來確定最佳的成熟度[5]。本實驗用的4種不同成熟度的梔子平均質量無顯著差異,梔子全果與果仁不同成熟度的梔子苷含量均呈下降趨勢,與朱文佩等[6]報道的梔子果實梔子苷含量隨果實成熟度的提高含量逐漸降低一致。因此,藥用梔子果實采收的最佳成熟度為梔子果實充分膨大后果皮顏色由青轉黃前采收,作為色素原料的梔子除外。

表1 梔子苷的加樣回收率實驗結果Tab.1 Result of recovery test on geniposide

表2 不同成熟度梔子果實不同部位梔子苷質量分數Tab.2 Geniposide content in different parts of gardenia with different degree of maturity %

3.2 梔子的藥用部位 梔子很早就有果皮與果仁分別使用的記載[7],現代還有許多地方沿襲去皮用仁的習慣。從表2可見,不同成熟度梔子全果梔子苷的含量均可達到《中華人民共和國藥典》2010年版標準[1],其中果仁的含量最高,果皮含量較低,但同樣含有環烯醚萜類,果皮平均重量只占全果的28%。從有效成分的含量最大化并且結合合理的利用資源考慮,《中華人民共和國藥典》2010年版規定全果入藥比較科學合理。

3.3 房縣梔子的價值 房縣素有“華中藥庫”之稱,有規模種植藥材的經驗[8],筆者對房縣產梔子適宜采收最佳的成熟度進行的研究,有利于提高當地產梔子的質量。從實驗結果可知,合理的采收可以使房縣梔子的梔子苷含量高出《中華人民共和國藥典》2010年版規定的幾倍,這與房縣的土壤、氣候、水分、礦物質的分情況適合梔子的種植有關。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:231-232.

[2] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].第71卷1冊.北京:科學技術出版社,2004:332.

[3] 游偉良,平其能,孫敏捷,等.梔子苷的藥理學研究新進展[J].藥學進展,2012,36(4):158-162.

[4] 黃辛武,柳俊.反相高效液相色譜法測定安腦牛黃片中梔子苷的含量[J].醫藥導報,2009,28(1):108-109.

[5] 何國振,周妹,湯麗云,等.不同成熟期梔子果實有效成分累積的研究[J].天然產物研究與開發,2010,22(4): 678-682.

[6] 朱文佩,劉麗華,李克和,等.梔子果實成熟度對梔子苷含量積累的影響[J].中國野生植物資源,2012,31(4):23-24.

[7] 劉怡,陳磊,張留記.不同產地梔子皮和梔子仁中有效成分的含量比較[J].中藥新藥與臨床藥理,2012,23(1): 81-83.

[8] 閔懷臻,賀琴,李金科,等.絞股藍皂苷對2型糖尿病并NAFLD大鼠肝組織TNF-αmRNA表達和血硫化氫的影響[J].湖北醫藥學院學報,2013,32(4):317-324.

DOI 10.3870/yydb.2014.12.024

Determ ination of the Suitable Maturity Degree and Medicinal Parts by the Contents of Geniposide in Gardenia Fruit Produced in Fangxian

ZHANG Xiao-yan1,2,DENG Xue-hua2,XIE Yong2,LU Min2,MAO Ru-xu3
(1.Laboratory of Chinese Herbal Pharmacology,Renmin Hospital,Hubei University ofMedicine,Shiyan 442000,China;2.School of Pharmacy, Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China;3.Hubei Shennong Bencao Prepared Slices,Shiyan 442000,China)

Objective To determine the contents of geniposide in different parts of the fruit ofGardenia jasminoidesEllis with differentmaturity degree produced infangxian,in order to find the optimum harvest periods and themedicinal parts.MethodsThematurity of gardenia fruit are divided into four levels according to the color from totally green to yellow and red, and then the contents of geniposide were determined by HPLC.ResultsThe contents of geniposide in all four levels of maturity reached the standard by theChinese Pharmacopoeia.The content of geniposide in fruits of caesious color is up to 13.01%.ConclusionThere is a negative correlation between thematurity and the contentof geniposide in themature fruitofGardenia jasminoidesEllis.Caesious fruit has the best maturity degree.It is reasonable to use the whole fruit as medicine according to theChinese Pharmacopoeia.

Gardenia jasminoidesEllis,fangxian;Geniposide;Content;Maturity degree

R282.71;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1631-03

2014-01-14

2014-03-05

*湖北省高等學校創新能力提升計劃(鄂教科函[2012]56號)

張曉燕(1969-),女,湖北十堰人,主任藥師,副教授,碩士生導師,主要研究方向:藥用植物資源研究。電話: 0719-8637262,E-mail:coarff66@126.com。

謝勇(1965-),男,湖北鄂州人,副教授,碩士,主要研究方向:中藥藥理。電話:0719-8872192,E-mail: 1041154080@qq.com。