2，3-吲哚醌對大鼠離體胸主動脈舒縮功能的影響

洪 銳，孫圓圓，金景玉，蘇雪慧，文今福，金松南

2，3-吲哚醌（2，3-indolinedione，isatin，ISA）為吲哚類衍生物，又名靛紅，是近年發現存在于人和動物體內的一種內源性活性物質，且廣泛存在于海洋生物如龍蝦和十字花科植物中［1－2］。基礎及臨床研究表明，ISA在人體不同器官和體液中均有分布［3－5］。研究表明，ISA使動物產生類似焦慮的行為，并且在焦慮和緊張的狀態下，心臟、腦、血漿中其水平會升高［6－8］。然而，目前ISA對胸主動脈舒縮功能的調控作用及機制尚不十分清楚。因此，本研究利用離體血管環實驗模型，探討ISA對大鼠離體胸主動脈舒收縮功能的影響及機制，為心血管疾病的防治提供新的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料 動物：♂Sprague-Dawley大鼠，由山東省濟寧魯抗公司提供，體質量250～300 g，在自然環境下飼養，自由飲水進食。試劑：2，3-吲哚醌、苯腎上腺素、乙酰膽堿、L-NAME及ODQ均購自Sigma公司。儀器：HSS-1B恒溫循環水浴槽（成都儀器廠）；BL-420E生理信號記錄儀（成都泰盟科技有限公司產品）。

1.2 大鼠離體胸主動脈血管環張力測定 大鼠斷頭處死，取出胸主動脈，剪成長約3 mm的血管環樣本，置于盛有6 ml Krebs-Henseleit（K-H）液的恒溫浴槽（36.5～37.5）℃內，一端固定，另一端經張力換能器通過BL-420E生物機能實驗系統記錄張力變化。先將血管張力值從零逐步提高至1 g，穩定后以1μmol·L－1的苯腎上腺素（phenylephrine，PE）引起血管收縮為100%，觀測不同濃度藥物對大鼠離體胸主動脈血管環舒縮功能的影響。

1.3 統計學分析 采用Prism 3.0軟件進行統計學分析，數據以ˉx±s表示，多組數據比較采用單因素方差分析。

2 結果

2．1 α1腎上腺素受體活性對ISA調節大鼠胸主動脈舒縮功能的影響 PE預處理后，ISA濃度依賴性地誘導大鼠胸主動脈收縮，與PE預處理組相比，無PE時ISA不能引起大鼠胸主動脈收縮（P＜0.01），見Tab 1。

2．2 內皮完整性對ISA調節大鼠胸主動脈舒縮功能的影響PE預處理后，與內皮完整血管相比，去內皮血管中ISA的縮血管效應消失，在30、100、300、1 000μmol·L－14個濃度點，P＜0.01（Tab 1）。

2．3 一氧化氮合酶和可溶性鳥苷酸環化酶抑制劑對ISA調節大鼠胸主動脈舒縮功能的影響 與PE預處理組比較，一氧化氮合酶抑制劑L-NAME（10μmol·L－1）和可溶性鳥苷酸環化酶抑制劑 ODQ（10μmol·L－1）預處理后，均能阻斷ISA的縮血管效應（P＜0.01），見Tab 1。

2．4 ISA對ACh舒血管效應的影響 用 ISA（100μmol·L－1）預處理20 min后，再加 PE，觀測 ACh（0.001～1μmol·L－1）舒血管效應。結果顯示，與對照組相比，ISA預處理組明顯減弱 ACh舒血管效應，在 0.01、0.03、0.1μmol·L－13個濃度點，P＜0.01（Tab 2）。

3 討論

ISA是在動、植物及人體內廣泛存在的內源性活性物質［11］，具有抗氧化［1］、抗癌［2］、調節腦內乙酰膽堿和多巴胺的平衡［9－10］等多種藥理活性。機體處于緊張狀態時，ISA水平明顯升高至正常的3～6倍［8］。但是，鮮有報道ISA對血管胸主動脈舒縮功能的影響。本實驗結果顯示，PE存在下，ISA濃度依賴性地誘導大鼠胸主動脈收縮，而無PE時，ISA不能引起大鼠胸主動脈收縮。

Tab 2 Effects of isatin on ACh-induced vasorelaxation in endothelium-intact aortic rings（ˉx±s，n＝6）

眾所周知，血管內皮與血管舒縮功能關系密切。本實驗結果顯示，去除胸主動脈內皮后，ISA誘導的縮血管效應明顯減弱，表明PE存在下ISA對大鼠胸主動脈的收縮效應是主要通過其血管內皮途徑來實現的。NO-cGMP信號通路在血管舒縮功能的調控中發揮重要作用［12］。以往的研究發現，激活NO-cGMP信號通路的藥物有利于血管舒張，而抑制NO-cGMP信號通路的藥物則促進血管收縮［12］。本實驗選用一氧化氮合酶抑制劑L-NAME和鳥苷酸環化酶抑制劑ODQ處理后，觀察了ISA的血管效應。結果顯示，上述兩種阻斷劑均可抑制ISA對大鼠胸主動脈的收縮效應。提示ISA對大鼠離體胸主動脈的收縮效應與抑制NO-cGMP信號通路有關。已知副交感神經遞質乙酰膽堿（acetylcholine，ACh）舒血管效應主要是通過內皮細胞NO釋放而實現的。本實驗結果顯示，ISA預處理明顯減弱ACh舒血管效應，推測ISA通過抑制ACh誘導的NO而減弱ACh舒血管效應。

綜上所述，本研究觀察到在PE存在下，高濃度的ISA可引起胸主動脈的收縮效應。此時，ISA主要通過抑制NO-cGMP信號通路和減弱ACh舒血管途徑，發揮其對胸主動脈舒縮功能的調控作用。

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