胡頹子葉不同提取物藥理活性的比較研究

李廣勝，魯光華，陳 寧，韓永成，劉 偉，黃麗杰

胡頹子（Elaeagnus pungens Thunb.）為胡頹子科胡頹子屬植物，別名：盧都子、半含春、甜棒子。中醫(yī)將其用作平喘藥［1］，胡頹子葉收載于1977年版《中國(guó)藥典》一部，是胡頹子科植物胡頹子的干燥葉［2］，具有止咳平喘、止血、解毒之功效，用于主治肺虛咳嗽、氣喘、咳血、吐血、癰疽、痔瘡腫痛等癥［3－6］。對(duì)胡頹子葉不同提取物進(jìn)行鎮(zhèn)咳、平喘、祛痰活性比較，為進(jìn)一步對(duì)胡頹子葉的化學(xué)成分及藥理活性進(jìn)行深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、羧甲基纖維素納、磷酸組胺、氯化乙酰膽堿、酚紅等均為分析純。

1.2 儀器 HH-S型水浴鍋（鞏義市英峪予華儀器廠），島津UV-220型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本），DFZ-01型電熱真空干燥箱（黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司）。

1.3 藥品 試驗(yàn)所用胡頹子葉于2012年購(gòu)自安徽亳州，由河南中醫(yī)學(xué)院董誠(chéng)明教授鑒定為：胡頹子葉為胡頹子科胡頹子屬植物（Elaeagnus pungens Thunb.）的干燥葉。蛇膽川貝液：廣西靈峰藥業(yè)有限公司，批號(hào)：5610011。

1.4 動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar小鼠，體質(zhì)量18～22 g，4～6周，♂♀各半，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物合格證號(hào)：scxk（豫）2011－0014。清潔級(jí) Wistar豚鼠，體質(zhì)量180～220 g，4～6周，♂♀各半，購(gòu)自河南省康達(dá)公司。動(dòng)物合格證號(hào)：scxk（豫）2011－0001。

2 方法

2.1 供試樣品的制備 取胡頹子葉粗粉500 g，分別用體積分?jǐn)?shù)為0.95、0.50的乙醇浸泡過(guò)夜，回流提取2次，首次加8倍量2 h，第2次加6倍量1 h，合并提取液，回收乙醇，濃縮至無(wú)醇味。加入水混勻，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮至稠膏，得到相應(yīng)的提取物（即石油醚組、乙酸乙酯組、正丁醇組），萃取后殘余水溶液減壓蒸餾回收溶劑，60℃真空干燥，得到水部位，備用。

2.2 鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)［7］取小鼠60只，隨機(jī)分為6組。分別為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、石油醚組、乙酸乙酯組、正丁醇組、水部位組。各組小鼠均分別灌胃（ig）給藥，模型組ig等容量蒸餾水，其中陽(yáng)性對(duì)照給予2.1 ml·kg－1的蛇膽川貝液，其余各組灌胃給予含生藥10.8 g·kg－1的胡頹子葉不同提取物的藥液，給藥容量為20 ml·kg－1。每天給藥1次，連續(xù)7 d，末次給藥1 h后，將小鼠置于燒杯中，另在燒杯內(nèi)放入一棉球，向棉球中注入0.2 ml濃氨水，迅速將燒杯倒置，讓小鼠引發(fā)咳嗽。觀察并記錄小鼠引咳潛伏期，以及小鼠在3 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

2.3 祛痰實(shí)驗(yàn) 取小鼠60只，隨機(jī)分為6組。分組給藥同實(shí)驗(yàn)“2.2”。末次給藥30 min后，分別給各小鼠腹腔注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%酚紅10 ml·kg－1。給予酚紅30 min后，頸椎脫臼處死，剝?nèi)夤苤車M織，取甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2 ml NaCl的試管中，再加入1 mol·L－1NaOH 0.1 ml，搖勻2 h，使氣管色素溶出，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于波長(zhǎng)546 nm處測(cè)定。

2.4 平喘實(shí)驗(yàn) 取豚鼠若干，逐只放入霧室，恒速、恒量噴入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%氯化乙酰膽堿（ACh）和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%磷酸組胺混合液15 s，觀察動(dòng)物呼吸急促、抽搐及跌倒翻滾時(shí)間，以跌倒翻滾時(shí)間小于120 s的動(dòng)物為哮喘合格。將合格動(dòng)物隨機(jī)分為6組，每組10只。各組豚鼠均分別灌胃（ig）給藥，模型組ig等容量水，其中陽(yáng)性組給予2.1 ml·kg－1的蛇膽川貝液，其余各組灌胃給予含生藥5.94 g·kg－1的胡頹子葉不同提取部位的藥液，給藥容量為20 ml·kg－1。各組每日灌胃給藥1次，連續(xù)7 d，末次給藥1 h后，依上述方法噴霧引喘，記錄豚鼠跌倒翻滾的時(shí)間。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0分析，數(shù)值變量將采用ˉx±s進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述，用單因素方差方法分析（One-WayANOVA）。

Tab1 Antitussiveeffectsinmice（ˉx±s，n＝10）

3 結(jié)果

3.1 鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn) 與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組和乙酸乙酯組對(duì)小鼠有明顯止咳作用（P＜0.01）；正丁醇組對(duì)小鼠咳嗽有顯示作用（P＜0.05）。與其余提取物組比，乙酸乙酯組明顯有效（P＜0.01）。見(jiàn) Tab1。

3.2 祛痰實(shí)驗(yàn) 與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組和乙酸乙酯組對(duì)小鼠含痰均具有明顯的祛痰作用（P＜0.01）；正丁醇組對(duì)小鼠含痰具有明顯的祛痰作用（P＜0.05），與石油醚組或水部位組比，乙酸乙酯組有效（P＜0.05）。見(jiàn)Tab2。

*P＜0．05，**P＜0．01vsModel；△P＜0.05vsPetroleumether；＃P＜0.05vsWater-part

3.3 平喘實(shí)驗(yàn) 與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、乙酸乙酯組和正丁醇組對(duì)2%氯化乙酰膽堿（ACh）和0.1%磷酸組胺混合液引起的小鼠哮喘均有明顯的平喘作用（P＜0.01）。與石油醚組或水部位組比，乙酸乙酯組明顯有效（P＜0.01）。與正丁醇組比，乙酸乙酯組有效（P＜0.05）。見(jiàn)Tab3。

Tab3 Protectiveeffectsofdrug-induced breathinginguineapigs（ˉx±s，n＝10）

4 討論

本研究采用3種動(dòng)物模型，分別為氨水引咳法、氣管酚紅法、組胺－乙酰膽堿致喘法。結(jié)果表明，乙酸乙酯組和正丁醇組對(duì)咳嗽、多痰和哮喘均有明顯作用，其中鎮(zhèn)咳、祛痰作用以正丁醇組為佳，平喘作用以乙酸乙酯組作用明顯，而石油醚組和水組均未見(jiàn)明顯效果。

本實(shí)驗(yàn)從藥效學(xué)角度證實(shí)了胡頹子葉乙酸乙酯組和正丁醇組確有鎮(zhèn)咳、平喘、祛痰的作用，為臨床用藥提供了實(shí)驗(yàn)支持。胡頹子乙酸乙酯組和正丁醇組對(duì)組胺引起的哮喘模型有一定的平喘作用，由此推測(cè)，胡頹子的平喘作用機(jī)制很可能是通過(guò)抑制對(duì)過(guò)敏遞質(zhì)的釋放來(lái)實(shí)現(xiàn)的。其祛痰作用可能是通過(guò)增強(qiáng)小鼠呼吸道分泌功能實(shí)現(xiàn)的。至于發(fā)揮上述作用的有效成分及機(jī)制尚待進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 中國(guó)科學(xué)院植物志編輯委員會(huì)中國(guó)植物志，第52卷第2分冊(cè)［M］.北京：科學(xué)出版社，1983：1.

［1］ EditorialCommitteeoffloraofChinaAcademyofSciencesChina flora［M］.Fifty-second.Beijing；Sciencepress.1983：1.

［2］ 代 黔，王園園，葛月賓，等.胡頹子葉對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌收縮功能的影響［J］.中草藥，2013，44（10）：1305－8.

［2］ DaiQ，WangYY，GeYB.etal.EffectofElaeagnuspungens leavesoncontractionofisolatedguineapigtrachealsmoothmuscle［J］.ChinTraditHerbalDrugs，2013，44（10）：1305－8.

［3］ MarW，LeeHT，JeKH，etal.ADNAstand-nickingprincipleof ahigherplant，Caesalpiniasappan［J］.ArchPharmacalRes，2003，26（2）：147－50.

［4］ 孟 江，和殿峰，周毅生，等.魚(yú)腥草不同提取部位藥理活性的比較研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（5）：1050－1.

［4］ MengJ，HeDF，ZhouYS，etal.Comparisononthepharmacologicaleffectsofdifferentextractpartsfromhouttuyniacordatathunb［J］.LishizhenMedMaterRes，2008，19（5）：1050－1.

［5］ 陳 奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：435，433，424.

［5］ ChenQ.Methodologyofpharmaco-logicalexperiment［M］.2nded.Beijing：People′sMedicalpublishingHouse，2006：435，433，424.

［6］ 秦冬梅，胡麗萍，文志萍，等.維藥毛菊苣提取物對(duì)小鼠四氮化碳急性損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（8）：1180－1.

［6］ QinDM，HuLP，WenZP，etal.ProtectiveeffectsofCichorium glandulosumBoissextractsonexperimentalliverinjuryinmice［J］.ChinPharmacolBull，2012，28（8）：1180－1.

［7］ 顏曉燕，童志遠(yuǎn)，晏子俊，等.暗紫貝母及浙貝母醇水提取物鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用比較研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（16）：250－4.

［7］ YanXY，TongZY，YanZJ.etal.Pharmacodynamiccompariasonbetweenaqueousextractsandethanolextractesfromfritillaria unibracteataandfritillariathunbergii.［J］.ChinJExpTraditMed Formul，2012，18（16）：250－4.