β－微管蛋白及M2型丙酮酸激酶在卵巢漿液性囊腺癌診斷中的意義

丁勻浚毓，鄒穎剛，田 園，閆淑芬，王淑麗，張立會＊

β－微管蛋白及M2型丙酮酸激酶在卵巢漿液性囊腺癌診斷中的意義

丁勻浚毓1，鄒穎剛2，田 園1，閆淑芬1，王淑麗1，張立會1＊

（1．吉林大學第二醫院婦科，吉林長春130041；2．吉林大學第二醫院生殖中心）

微管是組成細胞骨架的主要部分，具有聚合和解聚的動力學特性［1］。由α－微管蛋白和β－微管蛋白異二聚體組成［2］。γ微管蛋白參與微管的組裝，但并非微管的組分。微管的動力學特性使其在細胞有絲分裂起重要作用，其中β－微管蛋白的過表達是惡性腫瘤早期形成的關鍵［3］。Warburg效應指腫瘤細胞在氧氣即使充足時亦經糖酵解途徑代謝，消耗大量葡萄糖產生乳酸，這種現象被也稱為腫瘤的有氧糖酵解［4］。M2型丙酮酸激酶（PKM2）即是這一過程的限速酶。它在腫瘤細胞中過表達，并以二聚體形式存在［5］。本文通過對比β－微管蛋白及M2型丙酮酸激酶在卵巢漿液性囊腺瘤與卵巢漿液性囊腺癌組織中表達的差別，進一步探索這兩種蛋白與卵巢漿液性囊腺癌分期的關系，尋求卵巢漿液性囊腺癌早期診斷新指標。

1 資料和方法

1．1 一般資料

取吉林大學第二醫院2009年8月—2012年11月臨床病理資料完整的石蠟切片，經雙盲病理診斷，隨機抽取卵巢漿液性囊腺癌、卵巢漿液性囊腺瘤各40例。

1．2 試劑與儀器

C－FOS抗體購于北京博奧森生物技術有限公司；SP－9710試劑盒和DAB試劑盒購于福州邁新生物技術開發有限公司。

免疫組織化學檢測：取得臨床標本組織立即泡于10%福爾馬林固定液中固定24h，予以常規石蠟包埋、切片，制成4微米切片；先行HE染色，再切片貼附于涂有多聚賴氨酸的玻片上備用待行下一步的免疫組化染色，相應抗體檢測采用免疫組化S－P法（鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化物酶），按試劑盒說明書進行。

1．3 免疫組織化學結果評價標準

染色陽性：細胞質內呈均勻著色的棕黃色顆粒，背景清晰，無非特異性著色。依據Tanaka的定量計分法計算染色結果［6］：選取5個代表性區域，400倍鏡下評定顯色強度：棕褐色、棕黃色、淺黃色、未著色分別得3、2、1、0分；計數陽性細胞百分率：＞75%、50%～≤75%、25%～≤50%、5%～≤25%、≤5%分別得4、3、2、1、0分；兩項得分相乘，取各視野得分的平均值。按照分數分為4個等級：（＋＋＋）：≥9分，（＋＋）：5～8分，（＋）：2～4分，（－）：0～1分。

1．4 統計學處理

本實驗免疫組化檢測所得結果為等級資料，采用SPSS 17．0統計分析軟件，以χ2檢驗為統計學方法。P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 β－微管蛋白、PKM2表達和定位

鏡下可見棕黃色顆粒均勻著色于細胞質中（圖1，2），各組β－微管蛋白、PKM2免疫組織化學染色評分情況（表1），卵巢漿液性囊腺瘤組陽性率低于卵巢漿液性囊腺癌組。

表1 β－微管蛋白及PKM2在不同組織中的表達情況

圖1 β－微管蛋白在卵巢漿液性囊腺瘤及漿液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的表達

圖2 PKM2在卵巢漿液性囊腺瘤及漿液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的表達

2．2 β－微管蛋白、PKM2表達的組間相關性

β－微管蛋白、PKM2在卵巢漿液性囊腺癌及卵巢漿液性囊腺瘤病例中的表達差異均有統計學意義（β－微管蛋白：χ2＝39．596，P＝0．000；PKM2：χ2＝17．802，P＝0．000），但陽性率在卵巢漿液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期組間差異均無統計學意義（P＞0．05），且陽性級別與腫瘤分期無明顯相關性。

3 討論

目前卵巢癌的主要標志物為CA－125，但其早期其敏感性及特異性都不高。如在結核性胸膜炎、結核性腹膜炎、腎病綜合征并發腹水者，其CA－125均可升高［7］。有實驗證明β－微管蛋白、PKM2在卵巢癌組織中高表達［8］。本實驗進一步探究了卵巢漿液性囊腺癌及漿液性囊腺瘤組織中β－微管蛋白、PKM2表達情況：兩者在卵巢漿液性囊腺瘤組織中低表達，在漿液性囊腺癌組織中高表達。這種表達差異有統計學意義。說明這兩種蛋白在腫瘤的發生發展中有重要作用。但是這兩種蛋白在腺癌組中，染色的陽性級別及陽性率與腫瘤分期無明顯相關性，并未出現相關雜志上報道的與腫瘤分期呈正相關的現象。由于樣本例數尚不夠大，卵巢漿液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的分布不均勻，且缺少IV樣本，所以仍需加大樣本量進行進一步研究。有文獻報道在血清及糞便中均可檢測到PKM2。在糞便中檢測PKM2，結直腸癌的敏感性可達73%。但在血清中如何檢測β－微管蛋白，國內外鮮有報道，這為β－微管蛋白應用于臨床設置了一道難題。但是，隨著科學的不斷發展，相信將來必定會找到β－微管蛋白簡易方便的檢測方法。這必定為卵巢癌的患者帶來福音。

［1］Li JN，Jiang JD．Biological characteristics of microtubule and related drug research［J］．Acta Pharm Sin，2003，38：311．

［2］Jordan MA，Wilson L．Microtubules as a target for anticancer drugs［J］．Nat Rev Cancer，2004，4：253．

［3］尚 海，潘 莉，楊 澍等．微管蛋白抑制劑的研究進展［J］．藥學學報，2010，45（9）：1078．

［4］Warburg O．On the origin of cancer cells［J］．Science，1956，123：309．

［5］孫 倩．M2型丙酮酸激酶（PKM2）在腫瘤代謝和發生中的作用［J］．基礎醫學與臨床，2012，32（5）：462．

［6］Tanaka K，Iwamoto S，Gon G，et al．Expression of survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas［J］．Clin Cancer Res，2000，6（1）：127．

［7］彭 濤，夏 青，郭 玲，等．CA125檢測在腎病綜合征中的臨床意義［J］．臨床檢驗雜志，2010，28（3）：203．

［8］劉彥紅．卵巢槳液性囊腺癌及囊腺瘤的差異蛋白質組學分析［D］．吉林：吉林大學，2010．

2013－01－29）

1007－4287（2014）02－0281－02