ACSL3在前列腺癌細胞系中的表達及其對前列腺癌轉移的影響*

李科，陳怡，董艷，葉志強

(中山大學附屬第三醫院1泌尿外科，4急診科，廣東廣州 510630;2中山大學孫逸仙紀念醫院乳腺外科，廣東廣州 510120;3暨南大學生命科學技術學院生物工程系，廣東廣州 510632)

ACSL3在前列腺癌細胞系中的表達及其對前列腺癌轉移的影響*

李科1，陳怡2，董艷3，葉志強4△

(中山大學附屬第三醫院1泌尿外科，4急診科，廣東廣州 510630;2中山大學孫逸仙紀念醫院乳腺外科，廣東廣州 510120;3暨南大學生命科學技術學院生物工程系，廣東廣州 510632)

目的:觀察比較長鏈脂酰輔酶A合成酶3(long-chain acyl-CoA synthetase 3，ACSL3)在前列腺正常上皮細胞和不同類型前列腺癌細胞系中的表達差異，通過構建ACSL3基因穩定表達的前列腺癌細胞株研究ACSL3對前列腺癌細胞侵襲能力的影響。方法：利用RT-PCR方法檢測ACSL3 mRNA在前列腺正常上皮細胞、局限性及轉移性前列腺癌細胞中的表達情況，分析其表達與前列腺癌發生、進展及轉移的關系;以前列腺癌細胞基因組cDNA為模板，通過PCR擴增ACSL3基因，重組構建含有Flag標簽的pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3質粒，包裝慢病毒，轉染前列腺癌細胞，通過熒光顯微鏡、RT-PCR和Western blotting等方法鑒定ACSL3在細胞內的表達情況;利用Transwell侵襲實驗研究ACSL3對前列腺癌細胞侵襲能力的改變。結果:較前列腺正常上皮細胞，各種前列腺癌細胞中ACSL3 mRNA表達均明顯下降。同時，局限性前列腺癌細胞中ACLS3 mRNA表達較轉移性前列腺癌細胞明顯升高;此外，雄激素非依賴性前列腺癌細胞比雄激素依賴性前列腺癌細胞中ACLS3 mRNA表達顯著降低。進而，我們成功構建和包裝了表達ACSL3基因的pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重組質粒及慢病毒，并轉染前列腺癌細胞，篩選出穩定表達株;并且，通過Transwell實驗證實ACSL3表達與前列腺癌細胞的侵襲能力呈負相關。結論:前列腺正常上皮細胞及不同前列腺癌細胞系中ACSL3的表達存在明顯差異，提示ACSL3可能在前列腺癌的發生發展中起重要作用;成功構建了ACSL3基因穩定表達的前列腺癌細胞株，并初步證實ACSL3過表達可以抑制前列腺癌細胞的侵襲力。

前列腺腫瘤;長鏈脂酰輔酶A合成酶3;腫瘤侵襲

前列腺癌(prostate cancer，PCa)是歐美男性發病率最高的惡性腫瘤，死亡率僅次于肺癌［1］。近年來，隨著生活環境的改變、飲食結構的調整和人口的老齡化比例上升等高危因素的增多，我國PCa發病率和死亡率逐年升高，且上升趨勢較快［2］。PCa發病及病程均較隱匿，研究發現PCa一旦進展轉移，臨床根治的可能性就微乎其微，轉移已成為患者死亡的最主要原因［3］。目前，雄激素剝奪仍是PCa的主要治療方法之一;然而報道指出，去勢治療12～18個月后，因為雄激素受體(androgen receptor，AR)相關信號通路的作用，雄激素依賴性PCa(androgen-dependent prostate cancer，ADPC)可逐漸演化為雄激素非依賴性PCa(androgen-independent prostate cancer，AIPC)，從而導致患者最終死于雄激素不敏感細胞的廣泛轉移［4］。遺憾的是，現今臨床上無論是病理分期，還是Gleason評分等因素均無法有效地對PCa的轉歸進行有效的評估。因此，尋找新穎可靠的PCa特異性標志物以及治療干預靶點，對于準確預測PCa的發生與進展，深入研究HDPC向AIPC演變的機制，探索有效的治療措施，延長患者生存期和提高患者生活質量有著重大意義。

近來，國外有研究利用蛋白組學技術和表達微陣列分析篩選PCa中AR信號通路的相關調節蛋白，發現長鏈脂酰輔酶A合成酶3(long-chain acyl-CoA synthetase 3，ACSL3)為AR信號通路調節的目標基因之一，并在臨床PCa組織樣本中證實其轉錄和蛋白表達水平明顯下調，提示ACSL3可能與PCa的發生、進展密切相關［5］。此外，另有文獻報道，ACSL3 與ETV1所組成的新型融合基因是導致ETV1在PCa中重排的重要因素，從而導致了PCa生物學行為的改變［6］。ACSL3作為長鏈脂酰輔酶A合成酶家族的成員之一，其主要生物學功能是調節機體內脂肪酸代謝，催化脂肪酸轉化成長鏈乙酰輔酶A，對于脂質的合成、蛋白質的修飾、β-氧化等過程都具有重要意義［7］;而脂肪酸代謝的異常與能量的獲得與傳遞緊密相連，是腫瘤發生、進展的重要環節。本研究檢測ACSL3在前列腺正常上皮細胞、局限性PCa細胞以及轉移性PCa細胞中的表達差異，并比較ACSL3表達與PCa細胞的雄激素依賴性與否是否存在著關聯;繼而，通過構建ACSL3真核表達質粒，并包裝慢病毒，轉移PCa細胞后篩選出ACSL3穩定表達細胞株，為進一步研究ACSL3在PCa發生、進展和轉移中的作用、分子機制及臨床意義奠定實驗基礎。

材料和方法

1 材料

1.1 質粒、細胞、菌株實驗所需前列腺正常上皮細胞RWPE-I、局限性PCa細胞株22Rv1(雄激素依賴性)、轉移性PCa細胞株LNCaP(雄激素依賴性)和PC-3(雄激素非依賴性)均由武漢大學中國典型培養物保藏中心提供。pCDNA3.1(+)-Flag質粒為本實驗室保存;pLenti-GFP-Neo載體購自GenScript;慢病毒載體系統購自Tronolab;大腸桿菌DH5α購自TaKaRa。

1.2 主要試劑Trizol Reagent、Lipofectamine LTX、Keratinocyte Serum-Free Medium和胎牛血清購自Invitrogen;EcoR I、Xho I、Ex Taq聚合酶、DNA Ligation Kit Ver.2.0、PrimeScriptTMOne Step RT-PCR Kit和PrimeScriptTMRT reagent Kit(Perfect Real Time)購自TaKaRa;凝膠DNA純化回收試劑盒、質粒DNA小提試劑盒、PCR回收試劑盒以及去內毒素質粒中提試劑盒均購自Omega;Matrigel購自BD;Transwell板購自Corning;鼠源抗Flag標簽單克隆抗體購自CST。

1.3 引物根據GenBank已發表的ACSL3基因序列設計RT-PCR特異性引物，正義鏈5’-CAATTACAGAAGTGTGGGACT-3’，反義鏈5’-CACCTTCCTCCCAGTTCTTT-3’，由上海生工公司合成并檢測。根據GenBank已發表的ACSL3基因序列設計常規PCR特異性引物，正義鏈5’-CCGGAATTCGCCACCATGAATAACCACGTGTCTT-3’，反義鏈5’-CCGCTCGAGTTTTCTTCCATACATTCGCT-3’，在上游引物引入EcoR I酶切位點，下游引物引入Xho I酶切位點。引物均由上海生工公司合成并檢測。

2 方法

2.1 RT-PCR檢測ACSL3 mRNA在不同前列腺細胞中的表達水平前列腺正常上皮細胞RWPE-I、PCa細胞LNCaP、22Rv1和PC-3分別培養于6孔板中，當細胞鋪滿培養孔時，Trizol抽提RNA，并以RNA為模板進行逆轉錄反應，PCR程序為:37℃15 min;85℃5 s。然后以不同細胞的cDNA為模板，ACSL3特異性熒光定量引物進行RT-PCR實驗，具體操作步驟參考PrimeScriptTMRT reagent Kit(Perfect Real Time)說明書，本實驗采用相對定量PCR反應，以GAPDH基因作為內參照。

2.2 重組pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3質粒的構建以PC-3細胞基因組cDNA為模板擴增得到上、下游分別加有EcoR I和Xho I酶切位點的ACSL3基因序列，片段總長度為2 100 bp。按Gel Extraction Kit說明書進行ACSL3基因片段擴增產物的回收，將ACSL3與pCDNA3.1(+)-Flag質粒用EcoR I和Xho I雙酶切，分別回收純化，將兩者酶切純化的產物按照8∶1的摩爾比混合，用TaKaRa DNA Ligation Kit Ver 2.0試劑盒連接1 h，轉化DH5α感受態細菌，然后涂布于含氨芐青霉素50 mg/L的LB固體培養基中。次日，隨機挑取10個單菌落，分別接種于3 mL含氨芐青霉素的LB培養液中，37℃、150 r/min振蕩培養過夜。將菌落PCR篩選呈陽性的菌落用質粒DNA小量提取試劑盒抽提質粒DNA。將提取的質粒DNA用EcoR I和Xho I雙酶切，進行電泳檢測，以DS5000 marker為分子量參照，將篩選出的陽性克隆產物的菌液進行測序鑒定，獲得pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重組質粒，-20℃凍存備用。以同樣方法構建pLenti-GFP-Neo-ACSL3質粒。

2.3 ACSL3慢病毒包裝構建慢病毒載體系統為四質粒系統，包括pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G以及Lenti-ACSL3。慢病毒包裝細胞轉染用胰蛋白酶消化對數生長期的293T細胞，細胞密度為0.5× 109/L時重新接種于25 mL的15 cm細胞培養皿，37℃、5%CO2培養箱內培養;pRsv-REV(10 μg)、pMDlg-pRRE(15 μg)、pMD2G(7.5 μg)和pLenti-GFP-Neo-ACSL3(20 μg)加入無菌水及CaCl2(2.5 mol/L)溶液中;當細胞密度達60%～70%時轉染，將DNA和磷酸鈣混合液轉移至含單層細胞的培養液中，培養12 h后棄去含有轉染混和物的培養液，加入胎牛血清繼續培養48 h;收集轉染72 h的293T細胞上清液，離心后收集上清液，將病毒上清液以0.45 μm濾器過濾;把病毒粗提液樣品過濾離心，獲得病毒濃縮液，分裝后保存在病毒管中，-80℃長期保存。在進行病毒生物學滴度測定后獲得Lenti-ACSL3慢病毒。

2.4 ACSL3穩定表達PCa細胞株的構建PC-3細胞培養于6孔板中，當細胞長到80%～90%的匯合度時進行轉染實驗，轉染96 h后，倒置熒光顯微鏡下觀察到熒光證實慢病毒轉染成功，待細胞生長狀態良好，取轉染效率最高的PC-3細胞株加入含G418(500 mg/L)的培養基中培養3周，獲得穩定表達ACSL3的雄激素非依賴性轉移性PCa細胞PC-3ACSL3+。相同方法構建雄激素依賴性轉移性PCa細胞LNCaPACSL3+和雄激素依賴性局限性PCa細胞22Rv1ACSL3+。

2.5 RT-PCR及Western blotting檢測轉染PCa細胞中ACSL3的表達pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3轉染PC-3細胞24 h后，Trizol抽提RNA，并以RNA為模板進行逆轉錄反應獲得cDNA，再以其為模板，ACSL3特異性熒光定量引物進行RT-PCR定量檢測ACSL3 mRNA表達。pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3轉染PC-3細胞48 h后，加入100 μL含蛋白酶抑制劑的細胞裂解液，用細胞刮刮下細胞，離心制備蛋白樣品，利用Western blotting檢測ACSL3蛋白表達。

2.6 Transwell侵襲小室實驗檢測ACSL3過表達對PCa細胞侵襲力的影響實驗分為pCDNA3.1(+)-Flag空白質粒轉染對照組和pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重組質粒轉染實驗組。Transwell每孔上室加入100 μL Matrigel，37℃培養箱孵育3 h。紫外照射滅菌過夜。下室中加入趨化液、細胞無血清培養上清后，鋪膠上室套入下室。細胞轉染24 h后，分別加入對照組和實驗組細胞懸液各200 μL，37℃培養箱孵育20 h。取出上室，吸去殘液和Matrigel膠。在上室中添加70%甲醇固定30 min，常規結晶紫染色，光鏡下觀察。隨機取3個高倍鏡視野，計數小室面細胞數即為穿透Matrigel細胞數，實驗重復3次，取均數作為結果。

3 統計學處理

用SPSS 13.0 for Windows統計軟件進行分析。計量資料以均數±標準差(mean±SD)表示，采用t檢驗;計數資料采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

1 RT-PCR實驗結果

以前列腺正常上皮細胞RWPE-I、PCa細胞LNCaP、22Rv1和PC-3的cDNA為模板，進行實時定量PCR反應，并以前列腺正常上皮細胞RWPE-I內ACSL3 mRNA的表達水平為參考，比較分析PCa不同細胞與RWPE-I中ACSL3 mRNA的表達水平的差異。結果表明，較RWPE-I細胞，各種PCa細胞中ACSL3 mRNA表達明顯下降(P＜0.05)。同時，局限性PCa細胞22Rv1中ACLS3 mRNA表達較轉移性PCa細胞PC-3升高(P＜0.05)。此外，本研究還發現雄激素非依賴性PCa細胞PC-3比雄激素依賴性PCa細胞LNCaP及22Rv1中ACLS3 mRNA的表達顯著降低(P＜0.05)。因此，我們認為ACSL3的表達水平與PCa的發生、進展轉移，以及與PCa細胞從雄激素依賴向雄激素非依賴演變具有一定的關聯性，見圖1。

Figure 1.ACSL3 mRNA expression in RWPE-I，LNCaP，22Rv1 and PC-3 cells.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs RWPE-I;△P＜0.05 vs LNCaP;#P＜0.05 vs 22Rv1.圖1 前列腺正常上皮細胞及各種PCa細胞中ACSL3 mRNA的表達

2 pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重組質粒的構建及鑒定

以PC-3細胞基因組cDNA為模板擴增ACSL3基因，1%的瓊脂糖凝膠電泳顯示PCR產物大小分別為2 100 bp左右，與預期ACSL3基因片段大小相符，見圖2A;重組質粒菌落PCR鑒定，得到1條2 100 bp的條帶，與預期ACSL3基因片段大小相符，見圖2B;菌落PCR鑒定為陽性的菌株重新搖菌，抽提質粒后經EcoRⅠ和XhoⅠ雙酶切鑒定，得到1條2 100 bp 和5.4 Kb的條帶，都與預計大小相符，見圖2C。以上結果初步證明成功構建了pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重組真核表達質粒。

Figure 2.Construction and identification of eukaryotic expression plasmid pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3.A:ACSL3 gene amplified fragment;B:colony PCR of ACSL3 gene;C:ACSL3-plasmids digested by EcoRⅠand XhoⅠ;M:DS5000 marker.圖2 pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重組質粒的構建及鑒定

3 RT-PCR及Western blotting鑒定ACSL3 mRNA和蛋白在細胞內的表達

重組真核表達質粒pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3轉染PC-3細胞后，利用ACSL3特異性熒光定量引物進行RT-PCR定量檢測mRNA表達，證實較對照組，ACSL3 mRNA水平明顯升高(P＜0.01)，見圖3A。同時，利用Flag標簽單克隆抗體進行Western blotting檢測Flag-ACSL3蛋白表達，結果表明轉染組蛋白水平比對照組顯著增加(P＜0.01)，見圖3B。上述結果證明pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重組真核表達質粒在PCa細胞內可以有效過表達ACSL3。

Figure 3.ACSL3 mRNA(A)and protein(B)expression in PC-3 cells after transfected with pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3.Mean±SD.n=3.＊＊P＜0.01 vs control.圖3 pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3轉染PC-3細胞后的ACSL3 mRNA和蛋白表達

4 ACSL3穩定表達PCa細胞株的構建

PCa細胞培養于6孔板中，慢病毒Lenti-ACSL3轉染細胞96 h后，取轉染效率最高的PC-3細胞株加入含G418(500 mg/L)的培基中培養3周，從而獲得ACSL3穩定表達的雄激素非依賴性轉移性PCa細胞PC-3ACSL3+、雄激素依賴性轉移性PCa細胞LNCaPACSL3+和雄激素依賴性局限性PCa細胞22Rv1ACSL3+，見圖4。

5 重組質粒轉染對細胞遷移能力的影響

LNCaP細胞轉染pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3質粒24 h后，侵襲能力較pCDNA3.1(+)-Flag空白質粒轉染組明顯下降，對照組和轉染組穿膜細胞數分別為45±8.85和23±7.62，差異具有統計學意義(P＜0.01)，提示ACSL3表達與PCa細胞的侵襲能力呈現明顯的負相關，見圖5。

Figure 4.Representative images of PCa cells which stably expressed ACSL3 gene(×60).A:PC-3ACSL3+;B:LNCaPACSL3+;C: 22Rv1ACSL3+.圖4 熒光倒置顯微鏡下觀察ACSL3穩定表達的PCa細胞株

討論

腫瘤的轉移和復發是腫瘤患者死亡的主要原因。盡管隨著分子生物學的發展，認識到腫瘤相關基因的過表達和沉默在腫瘤的進展和轉移中起著重要作用，但目前所發現的轉移相關基因的數量仍較少，且對其具體的調控機制依舊缺乏深入的研究，從而限制了相關基因在臨床診斷和治療中的應用。因此，發現更多新的腫瘤轉移相關基因，闡明其調控腫瘤轉移的分子機制，對研發新型診療方法，提高患者的生存率和生活質量具有決定性意義。

PCa作為最常見多發的男性惡性腫瘤之一，其早期癥狀并不明顯。雖然隨著臨床診斷技術的發展，PCa早期診斷率有所提高，但多數患者確診時常已處于較晚的進展期［8］，而90%的進展期PCa都已發生轉移［9］。同時，由于PCa生物學習性多變，其侵襲轉移是患者死亡的主要原因。每年因腫瘤轉移而導致死亡的比例占總死亡病例的70%。此外，常規的PCa去勢治療，在一段時間后PCa逐漸由激素依賴性轉變為激素非依賴性，使得治療變得更加困難，而這其中AR扮演著重要的角色;在ADPC向AIPC的轉變過程中，AR通路通過多種方式發揮作用，AR基因的擴增、突變以及與共激活子之間作用的改變都可能使PCa細胞獲得激素非依賴型的生養能力，因此，闡明AR信號通路在PCa中的作用對PCa的診斷和治療有著重大意義［10］。

國外新近報道發現ACSL3是AR信號通路的相關調節蛋白，其作為長鏈脂酰輔酶A合成酶家族的成員，主要表達于前列腺、骨骼肌、睪丸、心臟和胎盤等組織中，在細胞內的主要生理功能是調節細胞內脂質代謝，催化長鏈脂肪酸激活的第一步，在細胞內可以作用于脂質的合成或者蛋白質修飾。細胞膜脂質的組成和新陳代謝調節的改變與許多疾病有關，包括癌癥。研究表明長時間抑制ACSL3表達會對細胞產生毒性［11］;在鼠的肝細胞中，通過RNA干擾抑制ACSL3基因的表達，導致很多與脂肪生成相關轉錄因子活性的降低，如過氧化物酶體增殖激活受體γ、糖類反映元素結合蛋白、固醇調節元素結合蛋白1C、肝受體α和它們目標基因的表達。另外，脂酰輔酶A合成酶的活性還可以改變AMPK活性，調節多種轉錄因子進而調節相關基因的表達［12］。此外，細胞內脂滴(lipid droplets，LDs)作為中性脂的儲存場所，在人肝細胞HuH7中ACSL3是LDs的主要連接蛋白、LDs包含各種各樣的蛋白、如PAT家族蛋白，小窩蛋白(caveolins)和Rab家族蛋白，而這些蛋白均為癌癥相關蛋白，表明ACSL3也可能與癌癥有關［13-15］。

本研究選擇ACSL3作為研究對象，初步證實了較前列腺正常上皮細胞，各種PCa細胞中ACSL3 mRNA表達明顯下降;而轉移性PCa細胞中ACSL3的表達較局限性PCa細胞更低。與此同時，AIPC細胞中ACSL3表達比ADPC中也要顯著減少。由此我們推斷，ACSL3的表達水平可能與PCa的發生、進展轉移，以及與PCa細胞從雄激素依賴向雄激素非依賴演變具有一定的關聯性;從而為PCa的早期診斷和預后評判提供了新的標志物，同時為PCa的治療提供了潛在的干預靶點。此外，本研究通過分子克隆方法，將目的片段ACSL3基因插入到含有Flag標簽的真核表達載體pCDNA1.3(+)質粒上，并包裝了慢病毒，然后對重組質粒的轉染效果進行了檢測，繼而構建了穩定表達ACSL3的PCa細胞株，繼而通過Matrigel侵襲實驗證實ACSL3表達與PCa細胞的侵襲能力呈負相關，這一切工作都為后續研究ACSL3在PCa的發生、進展中的生物學功能，以及其在AR受體信號通路中的分子調控機制奠定了基礎。

［1］Siegel R，Naishadham D，Jemal A.Cancer statistics，2013［J］.CA Cancer J Clin，2013，63(1):11-30.

［2］Peyromaure M，Debré B，Mao K，et al.Management of prostate cancer in China:a multicenter report of 6 institutions［J］.J Urol，2005，174(5):1794-1797.

［3］Preston SH.Prostate-cancer screening［J］.N Engl J Med，2009，361(2):202-203.

［4］方習武，夏術階，唐孝達.雄激素受體在人類前列腺癌發展中的作用研究［J］.中國病理生理雜志，2004，20(7):1275-1279.

［5］Marques RB，Dits NF，Erkens-Schulze S，et al.Modulation of androgen receptor signaling in hormonal therapy-resistant prostate cancer cell lines［J］.PLoS One，2011，6 (8):e23144.

［6］Attard G，Glark J，Ambroisine L，et al.Heterogeneity and clinical significance of ETV1 translocations in human prostate cancer［J］.Br J Cancer，2008，99(2):314-320.

［7］Nchoutmboube JA，Viktorova EG，Scott AJ，et al.Increased long chain acyl-CoA synthetase activity and fatty acid import is linked to membrane synthesis for development of picornavirus replication organelles［J］.PLoS Pathog，2013，9(6):e1003401.

［8］Stamey TA，Caldwell M，McNeal JE，et al.The prostate specific antigen era in the United States is over for prostate cancer:what happened in the last 20 years?［J］.J Urol，2004，172(4 Pt 1):1297-1301.

［9］Bubendorf L，Sch?pfer A，Wagner U，et al.Metastatic patterns of prostate cancer:an autopsy study of 1，589 patients［J］.Hum Pathol，2000，31(5):578-583.

［10］王鋼，王曉慧，張金山，等.雄激素受體基因(CAG) n重復多態性與前列腺癌［J］.中國病理生理雜志，2000，16(10):1076.

［11］Yao H，Ye J.Long chain acyl-CoA synthetase 3-mediated phosphatidylcholine synthesis is required for assembly of very low density lipoproteins in human hepatoma Huh7 cells［J］.J Biol Chem，2008，283(2):849-854.

［12］Bu SY，Mashek MT，Mashek DG.Suppression of long chain acyl-CoA synthetase 3 decreases hepatic de novo fatty acid synthesis through decreased transcriptional activity ［J］.J Biol Chem，2009，284(44):30474-30483.

［13］Cao A，Li H，Zhou Y，et al.Long chain acyl-CoA synthetase-3 is a molecular target for peroxisome proliferatoractivated receptor delta in HepG2 hepatoma cells［J］.J Biol Chem，2010，285(22):16664-16674.

［14］Mashek DG，Li LO，Coleman RA.Rat long-chain acyl-CoA synthetase mRNA，protein，and activity vary in tissue distribution and in response to diet［J］.J Lipid Res，2006，47(9):2004-2010.

［15］Fujimoto Y，Itabe H，Kinoshita T，et al.Involvement of ACSL in local synthesis of neutral lipids in cytoplasmic lipid droplets in human hepatocyte HuH7［J］.Lipid Res，2007，48(6):1280-1292.

Role of ACSL3 expression in suppressing prostate cancer cell metastasis

LI Ke1，CHEN Yi2，DONG Yan3，YE Zhi-qiang4
(1Department of Urology，4Department of Emergency，The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510630，China;2Department of Breast Surgery，Sun Yat-sen Memorial Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510120，China;3Department of Biotechnology，School of Life Science and Technology，Jinan University，Guangzhou 510632，China.E-mail:zqye@163.com)

AIM:To analyze the difference of long-chain acyl-CoA synthetase 3(ACSL3)expression between normal prostate epithelial cells and prostate cancer cells.METHODS:ACLS3 mRNA expression between normal prostate epithelial cells and prostate cancer cells was compared using RT-PCR.Meanwhile，ACSL3 gene was amplified from prostate cancer cells，and the eukaryotic expression plasmid pCDNA3.1(+)-Flag-ACLS3 and lentivirus Lenti-ACLS3 were constructed.After transfection of ACSL3-plasmid and lentivirus into the prostate cancer cells，ACSL3 expressive was detected by RT-PCR and Western blotting，and then Matrigel invasion assay was performed to investigate the alteration of the invasive ability of the prostate cancer cells with over-expression of ACSL3.RESULTS:A significant difference of ACSL3 mRNA level between normal prostate epithelial cells and prostate cancer cells was observed.ACSL3 was highly expressed in localized prostate cancer cells compared to metastatic prostate cancer cells，while ACSL3 expression was higher in androgendependent prostate cancer cells than that in androgen-independent prostate cancer cells.Furthermore，the eukaryotic expression plasmid and lentivirus containing ACLS3 gene were successfully constructed.The prostate cancer cell line whichstably over-expressed ACLS3 was established.Up-regulation of ACSL3 inhibited the invasive ability of prostate cancer cells.CONCLUSION:ACSL3 plays an antagonistic role in invasiveness of prostate cancer.

Prostate neoplasms;Long-chain acyl-CoA synthetase 3;Neoplasm invasiveness

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2014.02.010

1000-4718(2014)02-0250-06

2013-09-29

2013-11-04

廣東省科技計劃(No.2011B061300011)

△通訊作者Tel:020-85253010;E-mail:zqye@163.com