多沙普侖在中國五民族健康受試者的藥代動力學

郭 濤，趙龍山，程 佳，，夏東亞，曾 平，肖 勇，趙東祥，李 強，白 音，楊長青

（1.沈陽軍區總醫院藥劑科，遼寧 沈陽 110016；2.沈陽藥科大學藥學院，遼寧 沈陽 110016；3.蘭州軍區烏魯木齊總醫院藥劑科，新疆烏魯木齊 830000；4.解放軍第五醫院藥劑科，寧夏 銀川 750004；5.解放軍第313醫院赤峰臨床部，內蒙古赤峰 024006；6.赤峰學院醫學部，內蒙古赤峰 024000；7.延邊大學醫學院，吉林延吉 133002）

多沙普侖（doxapram）為非特異性呼吸興奮藥，主要通過直接興奮延髓呼吸中樞、外周化學感受器及加強膈肌活動，使患者潮氣量增加，呼吸頻率變快，有效拮抗全麻后阿片類藥物引起的呼吸抑制。本品系臨床必備急救藥，常用于全麻術后催醒和呼吸衰竭搶救［1－2］。目前，除本課題組前期報道外［3－4］，尚未見到國內有關本品在中國多民族人體藥代動力學研究的報道。中國是一個多民族國家，各民族生活環境、飲食習慣以及遺傳因素的不同，可能會導致同一藥物在不同民族受試者體內的藥動學過程出現差異。本文以漢族、蒙古族、朝鮮族、維吾爾族和回族健康受試者為研究對象，采用高效液相色譜法測定多沙普侖的血漿濃度，研究并比較多沙普侖在不同民族健康受試者體內的藥動學，為戰、創傷及平時臨床合理用藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀，包括Waters 600型四元泵、Waters 2487型紫外檢測器（美國 Waters公司）；N-2000色譜工作站（浙江大學智達信息工程有限公司）；KQ3200DE型超聲波清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）；TGL型離心機（上海安亭科學儀器廠）；YKH-2型液體快速混合器（江西醫療器械廠）；AEL-160電子分析天平（日本島津制作所）。

1.2 藥品與試劑 多沙普侖對照品（含量：98.5%，批號：0068－9701，中國藥品生物制品檢定所）；內標：非那西丁對照品（含量：99%，中國藥品生物制品檢定所）；鹽酸多沙普侖注射液（規格：0.1 g／5 ml，批號：20090103，江蘇恩華藥業股份有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純?？瞻兹搜獫{（沈陽軍區總醫院輸血科提供）。

1.3 受試者選擇 選擇漢族、蒙古族、朝鮮族、維吾爾族和回族健康受試者50名（每個民族10人，男女各半），其父母、祖父母、外祖父母3代均為同族婚配。所有受試者試驗前均進行體檢和血液生化檢查，檢查結果顯示受試者心、肝、腎功能未見異常，無過敏史，家族無精神病史，試驗前兩周內未服用任何其他藥物，試驗期間禁煙、酒及含咖啡飲料等。受試者試驗前簽署書面知情同意書。受試者的基本情況見Tab 1。

1.4 給藥方案及藥品采集 試驗方案經沈陽軍區總醫院醫學倫理委員會批準。采用單劑量靜脈滴注給藥。受試者試驗前1 d進食清淡晚餐后禁食12 h，試驗當日清晨，將50 mg鹽酸多沙普侖注射液注入到100 ml 0.9%氯化鈉溶液中后開始滴注，恒速滴注時間為30 min，給藥后受試者避免劇烈活動；4、10 h進食統一標準餐。

受試者于給藥前0 h、靜脈滴注給藥后15、30、35、45 min，1、1.5、2.5、3.5、4.5、6.5、8.5、12.5 h分別取前臂靜脈血4.0 ml，置于肝素抗凝管中，離心取上清血漿，－20℃凍存，待測。

Tab 1 Demographic background of subjects for modeling

1.5 測定條件 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇 －乙腈 －0.01 mol·L－1磷酸二氫銨緩沖液 （pH 4.5）－（30∶14∶56）；流速：1.3 ml·min－1；柱溫：室溫；紫外檢測波長：214 nm；進樣量：20μl。

1.6 樣品測定

1.6.1 對照品與內標溶液的配制 精密稱取多沙普侖對照品10.00 mg，置于10 ml量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，使成1 mg·L－1的對照品溶液，－4℃保存備用。另精密稱取非那西汀對照品10.00 mg，置于10 ml量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，使成1 mg·L－1的內標儲備液，用時取儲備液1 ml，置于100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，制成10 mg·L－1的內標工作溶液，－4℃保存備用。

1.6.2 血漿樣品預處理 取血漿0.5 ml，置于具塞玻璃試管中，加水50μl，然后加入 10 mg·L－1的非那西汀50μl，渦旋30 s，加入 pH 9.0緩沖液500 μl，然后加入 3 ml乙酸乙酯，渦旋 1 min，4 000 r·min－1離心10 min。將上清液轉移至另一試管，于40℃氮氣流吹干，加入100μl流動相復溶，20μl進樣。

1.6.3 質控樣品 每批血漿樣品測定時均建立新的標準曲線，同時，隨行多沙普侖濃度分別為0.1、0.5和4.0 mg·L－1的低、中、高3個濃度的質控樣品，并均勻分布在未知樣品的測試序列中，以判斷每批樣品測定結果的可靠性。本法測定結果RE均＜15%，符合生物樣品測定要求。

1.7 數據處理與統計學分析 采用DAS2.0藥動學軟件對血藥濃度－時間數據進行擬合，根據AIC值確定藥動學模型進行參數計算。受試者的Cmax、Tmax以實測值求得，AUC以梯形法計算。采用SPSS 13.0軟件進行統計學處理。首先，對各民族受試者的主要藥動學參數進行正態分布和方差齊性檢驗，然后，對符合正態分布和方差齊性的參數進行ANOVA檢驗，再采用S-N-K法對存在民族差異的參數進行檢驗，進一步確定差異存在于哪些民族之間。

2 結果

2.1 方法學評價

2.1.1 專屬性 在上述色譜條件下，空白血漿、空白血漿加多沙普侖對照品及內標、受試者用藥后血漿樣品的色譜圖見Fig 1。由圖可見，內標非那西丁與多沙普侖的保留時間分別為7.4 min和13.6 min，兩者分離良好，血漿中內源性雜質不干擾樣品的測定。

Fig 1 HPLC chromatograms of doxapramA：Blank plasma；B：Blank plasma spiked with doxapramand internal standard；C：Han volunteer plasma sample；D：Mengolia volunteer plasma sample；E：Korean volunteer plasma sample；F：Hui volunteer plasma sample；G：Uigur volunteer plasma sample.1：IS；2：doxapram

2.1.2 標準曲線 在空白血漿中加入不同量的多沙普侖對照品溶液，配制成多沙普侖濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mg· L－1的血漿樣品，按上述血漿樣品處理方法處理后進樣分析。以多沙普侖濃度C為橫坐標，多沙普侖與內標的峰面積比Y為縱坐標，選擇權重為1／c2，用加權最小二乘法進行回歸，得回歸方程為：＾Y＝1.264 C－0.003，r＝0.999。定量下限為0.05 mg·L－1（n＝6，RSD＜10%）。

2.1.3 回收率與精密度 在空白血漿中加入多沙普侖對照品溶液適量，配制成濃度分別為0.1、0.5和4.0 mg·L－1的低、中、高3種濃度的血漿質控樣品各5份，按血漿樣品處理方法處理后進樣分析，計算測得量與加入量的比值，求得方法回收率。另將測得的血漿質控樣品的峰面積與多沙普侖對照品溶液用流動相稀釋后直接進樣測得的峰面積比較，計算提取回收率。同法配制0.1、0.5和4.0 mg·L－1的低、中、高3個濃度的血漿質控樣品，按血漿樣品處理方法處理后進樣分析，測定日內精密度和日間精密度，結果見Tab 2。

Tab 2 Recovery and precision of doxapram（±s，n＝5）

Tab 2 Recovery and precision of doxapram（±s，n＝5）

Concentration／mg· L－1 Relative recovery／%Absolute recovery／%Within-day RSD／%Between-day RSD／%0.1 110.7±7.2 64.0±3.5 6.49 8.69 0.5 100.0±3.7 60.6±6.5 3.73 13.40 4.0 111.3±2.9 60.7±1.1 2.64 6.50

2.1.4 樣品穩定性試驗 配制多沙普侖濃度分別為0.1、0.5和4.0 mg· L－1的質控血漿樣品，分別在室溫放置8 h，－25℃凍融3次；－25℃冰凍存放30 d，進行樣品穩定性考察。結果3個濃度血漿樣品的多沙普侖濃度偏移均小于±5%，測定RSD均小于10.3%。

2.2 血藥濃度－時間曲線 50名健康受試者靜脈滴注多沙普侖50 mg后的平均藥－時曲線見Fig 2。由Fig 2可見，靜脈滴注給藥期間，多沙普侖血藥濃度逐漸升高，停滴后，多沙普侖血藥濃度有一較快下降的過程，而后消除減慢，經模型確定符合靜脈滴注二室模型。

Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of doxapram in healthy subjects of five ethnic groups after intravenous infusion of 50 mg doxapram（±s，n＝10）

Tab 3 The pharmacokinetic parameters of doxapram in healthy subjects±s，n＝10）

Tab 3 The pharmacokinetic parameters of doxapram in healthy subjects±s，n＝10）

Parameter Han Mongolian Korean Hui Uigur T1／2α／h 0.33±0.24 0.51±0.39 0.39±0.27 0.39±0.27 0.49±0.42 T1／2β／h 3.87±2.17 4.30±3.20 4.06±3.06 3.91±2.05 3.65±2.07 V c／L·kg－1 0.35±0.20 0.60±0.35 0.34±0.15 0.42±0.11 0.79±0.53 V d／L·kg－1 1.35±0.96 1.80±0.85 1.53±1.19 1.34±0.45 1.81±0.99 CL／L·h－1·kg－1 0.25±0.11 0.33±0.11 0.27±0.07 0.26±0.06 0.39±0.25 AUC0－12.5／mg·h·L－1 3.51±1.26 2.47±0.80 2.64±0.46 3.02±0.56 2.32±0.70 AUC0－∞／mg·h·L－1 4.06±1.44 2.89±1.06 3.01±0.63 3.49±0.73 2.68±0.80 C max／mg·L－1 1.55±0.52 1.02±0.30 1.31±0.47 1.48±0.46 0.99±0.35

2.3 藥代動力學參數 五個民族健康受試者靜脈滴注多沙普侖50 mg后的主要藥動學參數見Tab 3，不同性別間藥動學參數見Tab 4。

Tab 4 Comparison of pharmacokinetic parameters between male and female subjects（±s，n＝5）

Tab 4 Comparison of pharmacokinetic parameters between male and female subjects（±s，n＝5）

Parameter Male Female T1／2α／h 0.41±0.32 0.43±0.32 T1／2β／h 3.54±1.93 4.37±2.89 V c／L·kg－1 0.42±0.27 0.58±0.40 V d／L·kg－1 1.28±0.72 1.85±0.99 CL／L·h－1·kg－1 0.25±0.08 0.35±0.18 AUC0－12.5／mg·h·L－1 2.91±0.87 2.67±0.90 AUC0－∞ ／mg·h·L－1 3.29±1.03 3.16±1.11 C max／mg·L－11.35±0.46 1.20±0.48

2.4 安全性評價 50名受試者在靜脈滴注鹽酸多沙普侖注射液過程中，多數人主訴身體發熱，滴注結束后緩解。

3 討論

本研究建立的高效液相色譜法對多沙普侖、內標與血漿中內源性物質可得到較好的分離效果及合適的保留時間。簡便、快速，同時，方法學確證指標符合臨床藥代動力學研究的要求。每批血漿樣品測定時均建立新的標準曲線，同時，隨行多沙普侖濃度分別為 0.1、0.5、4.0 mg· L－1的低、中、高3個濃度的雙質控樣品，并均勻分布在未知樣品的測試順序中，測定結果均符合生物樣品測定的要求。

多沙普侖的藥動學研究，除本課題組的報道外，國內未見其它文獻報道。本研究結果表明，多沙普侖在中國五民族人群的藥動學過程符合二室模型，與文獻報道的接近［5］。其代謝產物為活性的多沙普侖酮，因無對照品，故未對其藥動學過程進行研究。

多沙普侖在健康人體內藥動學過程五民族間差異不一［6－7］，數據經 SPSS 13.0軟件進行統計學分析，顯示漢族受試者的 AUC0－12.5、AUC0－∞和 Cmax明顯高于維吾爾族和蒙古族（P＜0.05），其他藥動學參數五民族間差異無統計學意義（P＞0.05）。其原因可能是維吾爾族和蒙古族肝臟藥物代謝酶不同所致，提示臨床應用本品時應予以注意。

性別差異可能會影響藥物在體內的吸收、分布、代謝和排泄［8］，為此，我們按性別分組，采用 SPSS 13.0軟件進行統計學分析，經體重校正后，比較了多沙普侖的藥動學參數。結果表明，男性與女性的Vc、Vd和CL差異有統計學意義（P＜0.05）。文獻報道［9］，多沙普侖的快速消除是由于多沙普侖快速從血漿中分布到其他組織中，如大腦、骨骼肌和脂肪等；另外，多沙普侖的表觀分布容積大于人總體液容積0.6 L·kg－1，也說明多沙普侖分布到除體液外的組織中。男女受試者生理結構有一定的區別，一般來說，女性受試者的脂肪相對較多，這可能是造成女性受試者的表觀分布容積較大的原因。文獻報道［10－11］，藥物代謝存在性別差異的原因有很多，生理因素包括體質量、組織大小、腎小球濾過率和腸動力等；分子水平包括藥物代謝酶等。另有文獻報道［12］，藥物代謝方面的性別差異與雌激素有關。

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