摘除眼柄對河南華溪蟹表皮組織和剛毛的影響

裴思慧　王蘭

摘 要：采用灼傷擠壓法摘除眼柄，通過常規石蠟切片、HE染色和實體顯微技術觀察河南華溪蟹（Sinopotamon Henanense）頭胸甲表皮組織細胞和第三顎足內肢剛毛的形態學變化。實驗發現，摘除眼柄后隨時間的延長，溪蟹頭胸甲表皮組織細胞出現染色較深的貯藏細胞，間質增多，表明表皮中糖類或蛋白類物質的合成活動有所增強。溪蟹第三顎足內肢在摘除眼柄后表皮厚度增加，邊緣輪廓逐漸模糊化，且邊緣厚度變薄，逐漸形成管狀樣的表皮結構，剛毛腔增寬。通過研究，為預測河南華溪蟹的蛻皮周期、探究其蛻皮生理生化機制提供前期準備。 關鍵詞：河南華溪蟹；摘除眼柄；體壁結構；表皮組織

中圖分類號：Q95；S966.16 文獻標識碼：A 文章編號：2095-6835（2014）04-0114-02

通過研究切除眼柄對甲殼動物的影響，Zeleny等學者首次發現切除眼柄可以縮短蛻皮間期，從而加速蛻皮。隨后，許多學者也發現切除眼柄能誘導蛻皮并促進生長的眼柄能明顯縮短稚蝦的蛻皮周期且加快蛻皮。在加速蛻皮的過程中，華溪蟹的形態、行為、結構和生理都發生了哪些變化，目前還沒有明確的答案。探討河南華溪蟹被切除眼柄后表皮組織結構和剛毛的變化，可以豐富甲殼動物蛻皮機制內容，為研究河南華溪蟹蛻皮的生理生化機制提供基礎，還可以為河南華溪蟹這一直接發育的物種的養殖提供理論指導。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實驗中研究的河南華溪蟹（下文簡稱“溪蟹”），于2013-05購自太原市五龍口東安水產批發市場，放置實驗室水族缸（45 cm×30 cm×30 cm）中暫養2周。

選取頭胸甲寬為3～5 cm的健康溪蟹，養殖所用水采用曝氣48 h的自來水，水溫20±2 ℃，pH值為7.5，溶氧量8.0～8.3 mg/L。每日換水1次，并及時清理缸內排泄物，每日投喂定量土豆1次。

準備Bouin氏液、乙醇和甲醛等。

1.2 樣品處理

采用灼燒擠壓法切除眼柄，用體積分數為75 %的乙醇擦拭鑷子、溪蟹眼柄，先用手術剪壓碎眼柄的基部并切除雙側眼柄，后用燒紅的鑷子灼燒使傷口愈合。在雙側眼柄摘除后將其放回缸中飼養，直到開始實驗。

1.3 實驗方法

分別在24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h和168 h隨機選取5只溪蟹進行實驗。每次實驗隨機選取未切眼柄的5只溪蟹作為對照，重復3次。分別取正常組和切除眼柄組的溪蟹頭胸甲的表皮組織和第三顎足內肢。表皮組織經Bouin氏液固定48 h，流水沖洗，經過系列酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規切片，Hematoxylin和Eosin染色。第三顎足內肢經體積分數為4%的甲醛固定24 h，流水沖洗，并浸入體積分數為75%的乙醇保存備用。

1.4 實驗觀察

溪蟹表皮組織HE染色后，經過三目顯微鏡（Olympus -BX51TF）觀察；溪蟹第三顎足內肢活體觀察采用體視顯微鏡（Olympus-SZX2-1LLK）觀察。

2 實驗結果

2.1 對表皮組織的形態學變化

表皮是蛻皮激素調控蛻皮過程的關鍵靶組織。因此，我們研究了切除眼柄后，表皮組織的形態學變化。如圖1所示，圖1-a為正常組河南華溪蟹頭胸甲表皮組織，靠近外骨骼的一側是富含色素顆粒的色素細胞層，呈現黑褐色；內側的上皮細胞排列較緊密，細胞密度大間質少，包漿透亮，染色較均勻。圖1-b～1-h為切除眼柄24～168 h頭胸甲表皮組織。摘除眼柄72 h后，表皮組織細胞中開始出現染色較紅的顆粒物質，隨著時間的延長，到96 h含顆粒的表皮組織細胞逐漸泡狀化（如1-e圖），120 h后形成貯藏細胞（如圖1-f、圖1-g、圖1-h），且表皮細胞數量減少，間質增多，這表明表皮中糖類或蛋白類物質的合成活動有所增強。

2.2 對第三顎足內肢剛毛的形態學變化

蟹在蛻去幾丁質的舊殼時，蟹體上的剛毛會隨蟹舊殼一起蛻去，新生剛毛由新體長出，與舊剛毛無關。如圖2所示，圖2-a和圖2-b為正常組溪蟹第三顎足內肢，正常組溪蟹處于蛻皮間期（stage C），外骨骼鈣化完全，輪廓清晰，表皮邊緣較均勻，剛毛腔（SL）狹窄，在剛毛基部形成剛毛圓錐（IC）（如圖2-b）；圖2-c～圖2-h為切除眼柄24～144 h，表皮厚度增加，邊緣輪廓逐漸模糊化，且邊緣厚度變薄，逐漸形成管狀樣的表皮結構——剛毛軌跡，同時剛毛腔增寬（如圖2-f），此時溪蟹仍然處于蛻皮間期，但表皮與剛毛形態出現變化。現擬定：圖2-c～圖2-d為C0期，圖2-e～圖2-f為 C1期，圖2-g～圖2-h為C2期。圖2-i中看出，表皮組織回縮，和外骨骼分離，產生一透明的空隙，回縮腔（RZ），這時溪蟹進入蛻皮前早期D0 期，此時標志著蛻皮的啟動。

3 實驗分析

參考文獻

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[15]Promwikorn W，Kirirat P，Thaweethamsewee P.Index of molt staging in the black tiger shrimp（Penaeus monodon） [J].Songklanakarin Journal of Science and Technology，2004，26（05）：765 -772.

作者簡介：裴思慧（1988—），女，碩士，主要從事甲殼動物蛻皮的生理生化調控研究。

〔編輯：李玨〕

Abstract： The removal of eye burns extrusion handle by conventional paraffin sections， HE staining and microscopy techniques to observe physical Sinopotamon Henanense morphological changes carapace epidermal cells and the third jaw foot limb setae. It was found that after the removal of the eye pattern over time， the Sinopotamon Henanense carapace epidermal cells appear darker stain storage cells， increased quality， indicating that the synthesis of carbohydrate or protein activity in the epidermis substances has been enhanced. Sinopotamon Henanense within the third limb jaw foot increase in epidermal thickness after removal of the eye stalk， gradually blurring the edge contours and edges thinner， gradually forming a tubular-like structure of the epidermis， bristle cavity widened. Through research， to predict Sinopotamon Henanense molting cycle， explore its physiological and biochemical mechanisms molt preparation.

Key words： Sinopotamon Henanense； removal of eye stalk； body wall structure； epidermal tissue

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作者簡介：裴思慧（1988—），女，碩士，主要從事甲殼動物蛻皮的生理生化調控研究。

〔編輯：李玨〕

Abstract： The removal of eye burns extrusion handle by conventional paraffin sections， HE staining and microscopy techniques to observe physical Sinopotamon Henanense morphological changes carapace epidermal cells and the third jaw foot limb setae. It was found that after the removal of the eye pattern over time， the Sinopotamon Henanense carapace epidermal cells appear darker stain storage cells， increased quality， indicating that the synthesis of carbohydrate or protein activity in the epidermis substances has been enhanced. Sinopotamon Henanense within the third limb jaw foot increase in epidermal thickness after removal of the eye stalk， gradually blurring the edge contours and edges thinner， gradually forming a tubular-like structure of the epidermis， bristle cavity widened. Through research， to predict Sinopotamon Henanense molting cycle， explore its physiological and biochemical mechanisms molt preparation.

Key words： Sinopotamon Henanense； removal of eye stalk； body wall structure； epidermal tissue

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[8]Nan F H，Sheen S C，Liu P C，et al.The effect of eyestalk ablation on growth，haemolymph composition and gill Na+，K+- ATP activity of Penaeus monodon juveniles[J].Comparative Biochemistry and Physiology，1993，106A：621-626.

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[13]Laverdure A M，Breuzet M，Soyez D.Detection of the mRNA encoding vitellogenesis inhibiting hormone in neurosecretory cells of the X-organ in Homarus americanus by in situ hybridization[J].General and comparative endocrinology，1992，87（03）： 443-450.

[14]Tian Z H，Kang X J，Mu S M.The molt stages and the hepatopancreas contents of lipids，glycogen and selected inorganic elements during the molt cycle of the Chinese mitten crab Eriocheir sinensis[J].Fish science，2012，78：67-74.

[15]Promwikorn W，Kirirat P，Thaweethamsewee P.Index of molt staging in the black tiger shrimp（Penaeus monodon） [J].Songklanakarin Journal of Science and Technology，2004，26（05）：765 -772.

作者簡介：裴思慧（1988—），女，碩士，主要從事甲殼動物蛻皮的生理生化調控研究。

〔編輯：李玨〕

Abstract： The removal of eye burns extrusion handle by conventional paraffin sections， HE staining and microscopy techniques to observe physical Sinopotamon Henanense morphological changes carapace epidermal cells and the third jaw foot limb setae. It was found that after the removal of the eye pattern over time， the Sinopotamon Henanense carapace epidermal cells appear darker stain storage cells， increased quality， indicating that the synthesis of carbohydrate or protein activity in the epidermis substances has been enhanced. Sinopotamon Henanense within the third limb jaw foot increase in epidermal thickness after removal of the eye stalk， gradually blurring the edge contours and edges thinner， gradually forming a tubular-like structure of the epidermis， bristle cavity widened. Through research， to predict Sinopotamon Henanense molting cycle， explore its physiological and biochemical mechanisms molt preparation.

Key words： Sinopotamon Henanense； removal of eye stalk； body wall structure； epidermal tissue