新型57H突變體和代表性秈稻品種間的SSR解析

張曉曄　田懷東

摘 要：GPH2是新型57H粳稻突變體，是研究水稻胚乳儲藏蛋白質合成蓄積的理想材料。采用聚合酶鏈式反應（PCR）、核酸凝膠電泳等技術，解析GPH2突變體與代表性秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）間的SSR多態性，得出一個結論：9311和GPH2具有最高頻度的SSR多態性。該結果表明，該秈稻品種適合與突變體GPH2配型組合，用于突變基因的定位研究。

關鍵詞：水稻；儲藏蛋白質；新型57H突變體；SSR多態性

中圖分類號：Q946-3 文獻標識碼：A 文章編號：2095-6835（2014）04-0157-01

在野生型水稻中，谷蛋白和醇溶蛋白在胚乳細胞內質網被合成后，作為主要儲藏蛋白分別被蓄積成液泡型蛋白體和內質網衍生型蛋白體。導致成熟型谷蛋白顯著減少和57 kD谷蛋白前體高量增加的隱性57H變異已被證實是關于儲藏蛋白蓄積的基因突變。前期研究中，我們從水稻種質資源中發掘出谷蛋白前體高量增加、成熟型谷蛋白沒有減少，還兼具13 kDa醇溶蛋白缺失的新型57H突變體GPH2，并且與GPH1互為等位關系。為了今后進一步開展這個基因的定位克隆研究，進行了SSR多態性分析，從而確定了用于構建定位研究群體的最適配型組合。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

以4種具有代表性的秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）、新型57H突變體（GPH2）、正常型水稻品種（遼鹽6號）作為實驗材料。

1.2 實驗方法

參照Dellaporta等的方法，配置物質的量濃度為5 mol/L的KAc溶液、氯仿/異戊醇（24∶1）混合液和含有物質的量濃度為0.1 mol/L的Tris-HCl（pH8.0）、物質的量濃度為0.05 mol/L的EDTA、物質的量濃度為0.5 mol/L的NaCl、質量分數為1.25%的SDS的提取液，提取GPH2、遼鹽6號、Kasalath、9311、N22、IR36抽穗前各單株的葉片DNA。使用MBA2000UV/vis 分光光度計測定DNA濃度，加入適量ddH2O稀釋，所得DNA樣品用于PCR。

SSR分析參照Chen等的方法，10 μL的 PCR反應體系中包括20ng模板DNA，1×PCR Reaction buffer，0.2 μM正向引物和反向引物，物質的量濃度為50 μmol/L的含四種脫氧核苷酸的DNA合成原料液（dNTPs），物質的量濃度為0.2 μmol/L的上下游引物，0.1 U的DNA聚合酶。擴增反應在PTC-200PCR儀上進行，反應產物采用體積分數為8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染顯色，DNA條帶在X線膠片觀察燈上分析。

2 結果與分析

選擇一套覆蓋水稻12條染色體的510對SSR引物，采用PCR技術對GPH2突變體和4種具有代表性的秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）進行了SSR多態性解析，如圖1所示。從圖中可以看出顯著性差異（圖1中的2，5，6）、不顯著差異（圖1中的2，3，4）、無差異（圖1中的8，9）。統計12條染色體的多態性得出表1的結果，9311和GPH2具有覆蓋12條染色體的、最高頻度的SSR多態性。這個結果表明，該秈稻品種適合和GPH2突變體配型組合、用于突變基因的定位研究。

〔編輯：陳文強〕

Abstract： GPH2 57 h is a new japonica rice mutants， is the study of the accumulation of storage proteins in rice endosperm ideal material. Using polymerase chain reaction（PCR）， DNA gel electrophoresis technology， such as analytical GPH2 mutants with typical indica rice varieties（Kasalath， 9311， N22， IR36）between the SSR polymorphisms， draw a conclusion： 9311 and GPH2 SSR polymorphisms with the highest frequency. The results show that the indica rice varieties suitable for combined with mutant GPH2 over， for the positioning of the mutated gene research.

Key words： rice； storage protein； new 57 h mutant； SSR polymorphismsendprint

摘 要：GPH2是新型57H粳稻突變體，是研究水稻胚乳儲藏蛋白質合成蓄積的理想材料。采用聚合酶鏈式反應（PCR）、核酸凝膠電泳等技術，解析GPH2突變體與代表性秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）間的SSR多態性，得出一個結論：9311和GPH2具有最高頻度的SSR多態性。該結果表明，該秈稻品種適合與突變體GPH2配型組合，用于突變基因的定位研究。

關鍵詞：水稻；儲藏蛋白質；新型57H突變體；SSR多態性

中圖分類號：Q946-3 文獻標識碼：A 文章編號：2095-6835（2014）04-0157-01

在野生型水稻中，谷蛋白和醇溶蛋白在胚乳細胞內質網被合成后，作為主要儲藏蛋白分別被蓄積成液泡型蛋白體和內質網衍生型蛋白體。導致成熟型谷蛋白顯著減少和57 kD谷蛋白前體高量增加的隱性57H變異已被證實是關于儲藏蛋白蓄積的基因突變。前期研究中，我們從水稻種質資源中發掘出谷蛋白前體高量增加、成熟型谷蛋白沒有減少，還兼具13 kDa醇溶蛋白缺失的新型57H突變體GPH2，并且與GPH1互為等位關系。為了今后進一步開展這個基因的定位克隆研究，進行了SSR多態性分析，從而確定了用于構建定位研究群體的最適配型組合。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

以4種具有代表性的秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）、新型57H突變體（GPH2）、正常型水稻品種（遼鹽6號）作為實驗材料。

1.2 實驗方法

參照Dellaporta等的方法，配置物質的量濃度為5 mol/L的KAc溶液、氯仿/異戊醇（24∶1）混合液和含有物質的量濃度為0.1 mol/L的Tris-HCl（pH8.0）、物質的量濃度為0.05 mol/L的EDTA、物質的量濃度為0.5 mol/L的NaCl、質量分數為1.25%的SDS的提取液，提取GPH2、遼鹽6號、Kasalath、9311、N22、IR36抽穗前各單株的葉片DNA。使用MBA2000UV/vis 分光光度計測定DNA濃度，加入適量ddH2O稀釋，所得DNA樣品用于PCR。

SSR分析參照Chen等的方法，10 μL的 PCR反應體系中包括20ng模板DNA，1×PCR Reaction buffer，0.2 μM正向引物和反向引物，物質的量濃度為50 μmol/L的含四種脫氧核苷酸的DNA合成原料液（dNTPs），物質的量濃度為0.2 μmol/L的上下游引物，0.1 U的DNA聚合酶。擴增反應在PTC-200PCR儀上進行，反應產物采用體積分數為8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染顯色，DNA條帶在X線膠片觀察燈上分析。

2 結果與分析

選擇一套覆蓋水稻12條染色體的510對SSR引物，采用PCR技術對GPH2突變體和4種具有代表性的秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）進行了SSR多態性解析，如圖1所示。從圖中可以看出顯著性差異（圖1中的2，5，6）、不顯著差異（圖1中的2，3，4）、無差異（圖1中的8，9）。統計12條染色體的多態性得出表1的結果，9311和GPH2具有覆蓋12條染色體的、最高頻度的SSR多態性。這個結果表明，該秈稻品種適合和GPH2突變體配型組合、用于突變基因的定位研究。

〔編輯：陳文強〕

Abstract： GPH2 57 h is a new japonica rice mutants， is the study of the accumulation of storage proteins in rice endosperm ideal material. Using polymerase chain reaction（PCR）， DNA gel electrophoresis technology， such as analytical GPH2 mutants with typical indica rice varieties（Kasalath， 9311， N22， IR36）between the SSR polymorphisms， draw a conclusion： 9311 and GPH2 SSR polymorphisms with the highest frequency. The results show that the indica rice varieties suitable for combined with mutant GPH2 over， for the positioning of the mutated gene research.

Key words： rice； storage protein； new 57 h mutant； SSR polymorphismsendprint

摘 要：GPH2是新型57H粳稻突變體，是研究水稻胚乳儲藏蛋白質合成蓄積的理想材料。采用聚合酶鏈式反應（PCR）、核酸凝膠電泳等技術，解析GPH2突變體與代表性秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）間的SSR多態性，得出一個結論：9311和GPH2具有最高頻度的SSR多態性。該結果表明，該秈稻品種適合與突變體GPH2配型組合，用于突變基因的定位研究。

關鍵詞：水稻；儲藏蛋白質；新型57H突變體；SSR多態性

中圖分類號：Q946-3 文獻標識碼：A 文章編號：2095-6835（2014）04-0157-01

在野生型水稻中，谷蛋白和醇溶蛋白在胚乳細胞內質網被合成后，作為主要儲藏蛋白分別被蓄積成液泡型蛋白體和內質網衍生型蛋白體。導致成熟型谷蛋白顯著減少和57 kD谷蛋白前體高量增加的隱性57H變異已被證實是關于儲藏蛋白蓄積的基因突變。前期研究中，我們從水稻種質資源中發掘出谷蛋白前體高量增加、成熟型谷蛋白沒有減少，還兼具13 kDa醇溶蛋白缺失的新型57H突變體GPH2，并且與GPH1互為等位關系。為了今后進一步開展這個基因的定位克隆研究，進行了SSR多態性分析，從而確定了用于構建定位研究群體的最適配型組合。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

以4種具有代表性的秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）、新型57H突變體（GPH2）、正常型水稻品種（遼鹽6號）作為實驗材料。

1.2 實驗方法

參照Dellaporta等的方法，配置物質的量濃度為5 mol/L的KAc溶液、氯仿/異戊醇（24∶1）混合液和含有物質的量濃度為0.1 mol/L的Tris-HCl（pH8.0）、物質的量濃度為0.05 mol/L的EDTA、物質的量濃度為0.5 mol/L的NaCl、質量分數為1.25%的SDS的提取液，提取GPH2、遼鹽6號、Kasalath、9311、N22、IR36抽穗前各單株的葉片DNA。使用MBA2000UV/vis 分光光度計測定DNA濃度，加入適量ddH2O稀釋，所得DNA樣品用于PCR。

SSR分析參照Chen等的方法，10 μL的 PCR反應體系中包括20ng模板DNA，1×PCR Reaction buffer，0.2 μM正向引物和反向引物，物質的量濃度為50 μmol/L的含四種脫氧核苷酸的DNA合成原料液（dNTPs），物質的量濃度為0.2 μmol/L的上下游引物，0.1 U的DNA聚合酶。擴增反應在PTC-200PCR儀上進行，反應產物采用體積分數為8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染顯色，DNA條帶在X線膠片觀察燈上分析。

2 結果與分析

選擇一套覆蓋水稻12條染色體的510對SSR引物，采用PCR技術對GPH2突變體和4種具有代表性的秈稻品種（Kasalath、9311、N22、IR36）進行了SSR多態性解析，如圖1所示。從圖中可以看出顯著性差異（圖1中的2，5，6）、不顯著差異（圖1中的2，3，4）、無差異（圖1中的8，9）。統計12條染色體的多態性得出表1的結果，9311和GPH2具有覆蓋12條染色體的、最高頻度的SSR多態性。這個結果表明，該秈稻品種適合和GPH2突變體配型組合、用于突變基因的定位研究。

〔編輯：陳文強〕

Abstract： GPH2 57 h is a new japonica rice mutants， is the study of the accumulation of storage proteins in rice endosperm ideal material. Using polymerase chain reaction（PCR）， DNA gel electrophoresis technology， such as analytical GPH2 mutants with typical indica rice varieties（Kasalath， 9311， N22， IR36）between the SSR polymorphisms， draw a conclusion： 9311 and GPH2 SSR polymorphisms with the highest frequency. The results show that the indica rice varieties suitable for combined with mutant GPH2 over， for the positioning of the mutated gene research.

Key words： rice； storage protein； new 57 h mutant； SSR polymorphismsendprint