慢性乙型肝炎患者乙肝病毒大蛋白檢測分析

張丹

【摘要】目的：通過檢測乙肝患者血清中乙肝病毒表面抗原大蛋白（LHBs）、HBV DNA以及HBeAg，探討LHBs與HBV DNA的關系，研究LHBs反映HBV復制情況的可靠性，揭示HBeAg陰性乙肝患者檢測HBeAg的臨床意義。方法 采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）對LHBs和HBeAg進行檢測；采用熒光定量PCR方法對HBV DNA進行檢測。結果 171份乙肝患者HBV DNA、LHBs的檢測結果顯示：LHBs的檢測結果與HBV DNA的檢出結果差異無統計學意義（P>0.05）。不同HBV M模式的HBV DNA與LHBs的檢出結果差異無統計學意義（P>0.05）。HBV DNA拷貝數的對數值與LHBs含量具有相關關系，相關系數r=0.917。結論 LHBs能夠反映出乙肝病毒的復制情況，血清中的LHBs與HBV DNA具有較好的相關性，是反映HBeAg陰性乙肝患者病毒復制情況的新的血清免疫學指標。

【關鍵詞】 慢性；乙型 ；肝炎

【中圖分類號】R512.62 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）04-0197-01

乙肝病毒S基因編碼的表面大蛋白（Hepatitis B Virus Large Surface Protein，LHBs）在空間上具有2種不同的跨膜構象，作為HBV的包膜蛋白，內側可以和HBV核殼體膜結合，外側可與病毒受體結合，是HBV顆粒成熟包裝的關鍵。近年來，隨著對LHBs中PreS抗原的研究，發現PreS區的特有拓撲結構在乙肝病毒感染與復制等過程中起重要作用。我國慢性HBV感染患者，尤其是肝硬化患者中HBeAg陰性者高達60%以上，評估HBV復制的指標主要有HBV DNA和HBeAg，但是HBeAg陰性的乙肝患者除HBV DNA外，無其他標志物可反映HBV復制程度。本研究旨在探討將LHBs用于反映HBeAg陰性乙肝患者HBV復制程度的可靠性。

1 對象與方法

1.1 對象 乙肝患者血清標本來自我院2010年8月～2012年9月門診或住院乙肝患者171例，其中男92例，女79例。年齡18～68，平均41.3歲。

1.2 檢測方法 乙型肝炎血清標志物檢測試劑盒（河南華美生物工程有限公司）；LHBs定量檢測試劑盒（北京熱景生物技術有限公司）；HBV DNA實時熒光聚合酶反應（PCR）定量檢測試劑盒（深圳匹基生物工程有限公司）。

1.3 統計分析 采用SPSS 12.0軟件進行統計，計量資料組間差異采用χ2檢驗，計數資料組間差異采用方差分析。

2 結果

2.1 HBeAg陰性和陽性組中LHBs及HBV DNA的陽性率 檢測171例慢性乙肝患者血清標本，LHBs和HBV DNA的總陽性率均為74.9%。在46例HBeAg陽性乙肝患者中LHBs和HBV DNA的陽性率分別為97.8%和100%，二者的檢出率無明顯差異；在125例HBeAg陰性的乙肝患者中LHBs和HBV DNA的陽性率分別為66.4%和65.6%，二者的檢出率差異無統計學意義（χ2=0.02，P>0.05）。

2.2 HBeAg陰性乙肝患者中LHBs和HBV DNA檢出符合率 在HBeAg陰性但是HBV DNA陽性的82份標本中，LHBs陽性率為82.2%（68+82），在HBeAg陰性乙肝患者中LHBs與HBV DNA的檢出符合率為（68/28）/125=76.8%。

2.3 LHBs陽性率及含量與HBV DNA拷貝數之間的比較 HBV DNA拷貝數對數值與LHBs含量（ng）的相關系數r=0.917，回歸方程為Y=10822X，P<0001，R Square=0.841，表明HBV DNA拷貝數的對數值與LHBs含量（ng）具有相關關系（表1）。 表1 LHBs陽性率以及含量與HBV DNA拷貝數比較（略）

3 討論

HBV形成包膜過程中，LHBs起著關鍵作用，LHBs前S區具有拓撲結構，并具有反式激活病毒復制作用，檢測LHBs具有重要意義。以往是通過檢測LHBs獨有片段PreS1實現，但其PreS區具有復雜拓撲結構，導致PreS1多肽為免疫源的單抗檢出率較低，不能很好地反映HBV復制。本研究使用包被針對構象型前S區的單抗的試劑檢測LHBs。結果表明，LHBs能反映HBV復制情況，171例患者中LHBs陽性率和HBV DNA陽性率無統計學差異（P>0.05）。LHBs含量與HBV DNA拷貝數具有較好相關關系（r=0.917）。在HBeAg陰性但HBV DNA陽性患者中，LHBs陽性率為82.2%（68/82）。在HBeAg陰性患者中有12%（15/125）的患者為LHBs陽性而HBV DNA陰性，分析有3個原因：（1）由于HBV具有變異性傾向，導致基因變異頻繁；（2）含有LHBs的管狀顆粒的數量是Dane顆粒的10000倍，血液中消退時間也晚于HBV DNA；（3）抗病毒藥物只抑制病毒cccDNA再復制，并不抑制已形成的病毒表達蛋白，即以DNA為模板的轉錄和病毒蛋白的轉譯表達不受影響。如果肝內cccDNA仍然較多存在，則LHBs仍在一段時間內存在，而血液中DNA可能是陰性。由于LHBs具有反式激活作用，LHBs的殘留是否與病毒持續復制或乙肝病毒慢性持續性感染相關，需要進行深入的研究。

參考文獻

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