蒙醫(yī)溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響

王月洪,阿古拉,斯楞格,烏云格日樂,青林

?

蒙醫(yī)溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響

王月洪,阿古拉,斯楞格,烏云格日樂,青林

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué),呼和浩特 010110)

通過觀察蒙醫(yī)溫針對失眠模型大鼠自主活動的影響及對戊巴比妥鈉致睡眠時間的影響,探討蒙醫(yī)溫針的改善睡眠作用。①選用戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠的方法,取健康雄性SD大鼠30只,分為空白對照組和蒙醫(yī)溫針組,每組15只,以戊巴比妥鈉致眠時間為觀察指標(biāo)。②采用對氯苯丙氨酸致失眠大鼠模型,取健康雄性SD大鼠60只,分為空白對照組、失眠模型組、蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組,每組15只,觀察大鼠的自主活動和一般情況。蒙醫(yī)溫針組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(＞0.05)。蒙醫(yī)溫針組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠時間與空白對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01)。失眠模型組、蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組大鼠造模前體重較空白對照組減輕(均＜0.01)。失眠模型組大鼠治療后體重與空白對照組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組大鼠體重增加,與空白對照組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01)。失眠模型組大鼠活動時間明顯高于空白對照組(＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組大鼠活動時間明顯低于失眠模型組(均＜0.05)。失眠模型組大鼠站立次數(shù)明顯高于空白對照組(＜0.05),蒙醫(yī)溫針組和地西泮組大鼠站立次數(shù)明顯低于失眠模型組(＜0.05,＜0.01)。蒙醫(yī)溫針對大鼠有鎮(zhèn)靜作用和改善睡眠功能作用。

針灸療法;蒙醫(yī);睡眠;自主活動;大鼠;失眠模型

失眠是睡眠的發(fā)生或維持障礙,影響日常生活的一類病癥,屬蒙醫(yī)“赫依”病范疇。西醫(yī)治療本病仍存在難以根治、不同程度地產(chǎn)生不良反應(yīng)、耐藥性和依賴性等問題。通過文獻(xiàn)記載和近年來的臨床觀察發(fā)現(xiàn),蒙醫(yī)溫針對失眠癥的療效顯著,同時具有無毒副反應(yīng)、安全可靠等特點(diǎn),其最大優(yōu)勢在于可以避免口服藥物所致的副反應(yīng)。因此,尋找適當(dāng)有效的針刺干預(yù)措施是臨床與實(shí)驗(yàn)研究的重要課題之一。本實(shí)驗(yàn)采用戊巴比妥鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠的方法,觀察蒙醫(yī)溫針對SD大鼠睡眠的影響,并選用對氯苯丙氨酸致失眠大鼠模型,采用曠場試驗(yàn)(OFT試驗(yàn)),觀察失眠大鼠的自主活動和一般情況,探討蒙醫(yī)溫針改善睡眠的作用,現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康雄性SPF級SD大鼠80只,體重(180±220)g,由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供[許可證號SCXK-(軍)2007-004]。

1.2 主要儀器與試劑

電子天平(BS124S,賽多利斯提供);MLY-Ⅰ型蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀(內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院蒙醫(yī)藥學(xué)院研制,專利號ZL201120058078.0);特制蒙醫(yī)銀針(0.5 mm×30 mm,內(nèi)蒙古元陽中蒙醫(yī)科技開發(fā)有限責(zé)任公司提供);OFT -100自發(fā)活動視頻分析系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司提供);戊巴比妥鈉、對氯苯丙氨酸由sigma提供;地西泮注射液(2 mL:10 mg)由西安利君沙制藥有限責(zé)任公司提供(國藥準(zhǔn)字H61022214)。

2 方法

2.1 蒙醫(yī)溫針對戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠時間的影響

2.1.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理方法

取大鼠30只,隨機(jī)分為空白對照組和蒙醫(yī)溫針組,每組15只。隨機(jī)分組標(biāo)號后,在室溫18℃～28℃、相對濕度40%～50%的條件下飼養(yǎng)。蒙醫(yī)溫針組根據(jù)蒙醫(yī)經(jīng)典理論和臨床治療有效穴取頂會穴、赫依穴、心穴[1],每次取1個穴位。頂會穴位于兩眉正中線與兩耳葉上緣連線在頭頂上的交叉處;赫依穴位于第1胸椎上凹正中;心穴位于第7胸椎下凹正中。將大鼠固定后,用特制銀針斜刺,再接蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀,電流強(qiáng)度為100 mA,溫度為40℃,留針15 min。每日上午8:00 -11:00進(jìn)行治療,共治療7 d。

空白對照組每日同蒙醫(yī)溫針組相同方法固定1次,每次15 min,連續(xù)7 d。

2.1.2 觀察指標(biāo)

兩組治療結(jié)束后給予腹腔注射戊巴比妥鈉(45 mg/kg),觀察兩組大鼠翻正反射消失和恢復(fù)時間,以翻正反射消失至恢復(fù)的時間為睡眠持續(xù)時間,開始記錄給藥時間、翻正反射消失時間和翻正反射恢復(fù)時間,睡眠以翻正反射消失為指標(biāo)[2]。分別計算出睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時間。記錄大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉后至翻正反射消失時間為睡眠潛伏期,翻正反射消失至大鼠覺醒的時間為睡眠持續(xù)時間。

2.2 蒙醫(yī)溫針對失眠模型大鼠自主活動的影響

2.2.1 造模方法[3]

將PCPA(300 mg/kg)用弱堿性生理鹽水(pH值為7～8)配置成混懸液備用。失眠模型組、蒙醫(yī)溫針治療組和地西泮注射液組大鼠在實(shí)驗(yàn)前2 d每日早晨8:00開始,按1 mL/100 g用量腹腔注射PCPA混懸液,每日1次,連續(xù)注射2 d。第1次腹腔注射PCPA混懸液28～30 h后,大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失,活動明顯頻繁,白天也活動不停,興奮性增高,攻擊性增強(qiáng),飲食及二便顯著增多,鼠毛蓬亂無光澤,大便色灰白,整體觀察與對照組明顯不同,表明失眠模型成功。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理方法

取正常雄性SD大鼠60只,隨機(jī)分為空白對照組、失眠模型組、蒙醫(yī)溫針治療組和地西泮注射組,每組15只,正常飼養(yǎng)7 d后予以相應(yīng)處理。①空白對照組不造模,于實(shí)驗(yàn)前連續(xù)2 d腹腔注射同PCPA用量體積的弱堿性生理鹽水,第3天開始實(shí)驗(yàn),與蒙醫(yī)溫針組同樣方法固定15 min,連續(xù)7 d,其他處理同蒙醫(yī)溫針組。②失眠模型組造模2 d,第3天開始實(shí)驗(yàn),與蒙醫(yī)溫針組同樣方法固定15 min,連續(xù)7 d,其他處理同蒙醫(yī)溫針組。③蒙醫(yī)溫針組造模2 d,第3天開始蒙醫(yī)溫針治療,連續(xù)7 d,針刺方法同實(shí)驗(yàn)1。④地西泮注射液組實(shí)驗(yàn)前2 d造模,第3天開始大鼠腹腔注射地西泮注射液,0.92 mg/kg/d,每日1次,連續(xù)7 d。

2.2.3 曠場試驗(yàn)

參照文獻(xiàn)方法采用曠場試驗(yàn)方法[4],于失眠第7天(第1次腹腔注射PCPA后7 d),在安靜、暗光條件下檢測。實(shí)驗(yàn)前先置大鼠1次單獨(dú)放入OFT-100自發(fā)活動實(shí)驗(yàn)儀(箱子長寬均為80 cm,高為40 cm,為內(nèi)空的立柱體,壁周為透明玻璃)中適應(yīng)3 min后,操作者握住大鼠尾根部1/3處,輕輕將大鼠放入礦場箱中格內(nèi),開始同步錄像計時。觀察5 min內(nèi)大鼠活動情況。取出大鼠后,用毛巾蘸清水及低濃度酒精徹底擦拭箱底,避免留有氣味而干擾下1只大鼠的觀察結(jié)果。

2.3 觀察指標(biāo)

①中央格停留時間(s),即自大鼠被放入正中格至其有3爪跨離該格的時間;②站立次數(shù),即兩前肢向上抬起離開箱底面或攀伏在側(cè)壁上,以后腿支撐使身體豎立的次數(shù);③水平活動時間(s),即水平面上活動的時間。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件統(tǒng)計處理,采用兩個獨(dú)立樣本的檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn),計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,以＜0.05表示差異統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 蒙醫(yī)溫針對戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠時間的影響

由表1可見,蒙醫(yī)溫針組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(＞0.05)。蒙醫(yī)溫針組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠時間與空白對照組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01),提示蒙醫(yī)溫針明顯延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時間。

表 1 兩組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠潛伏期及睡眠時間比較 (±s)

注:與空白對照組比較1)＜0.01

3.2 蒙醫(yī)溫針對失眠模型大鼠自主活動的影響

空白對照組大鼠睡眠、飲食等方面無明顯改變。失眠模型組、蒙醫(yī)溫針組及地西泮注射液組大鼠于第1次腹腔注射PCPA混懸液28～30 h后,晝夜節(jié)律消失,白天活動增多,飲水進(jìn)食減少;隨失眠時間的延長,大鼠疲憊、煩躁、皮毛蓬亂無澤愈加明顯,對聲音、光等刺激的警覺性減弱,飲食及二便增多,攻擊性增強(qiáng)。整體觀察與對照組明顯不同,與文獻(xiàn)報道一致,表明模型復(fù)制成功。至造模第8天,即實(shí)驗(yàn)當(dāng)天失眠模型組大鼠仍存在上述行為改變。蒙醫(yī)溫針組和地西泮組大鼠在予以針刺刺激和地西泮注射后,表現(xiàn)為安靜、活動減少等現(xiàn)象,睡眠時間、飲水進(jìn)食、精神狀態(tài)等均逐漸恢復(fù)。

3.2.1 4組大鼠不同時間點(diǎn)體重比較

入組時各組大鼠體重?zé)o明顯差異(=0.202,=1.595)。造模前,各組大鼠體重?zé)o明顯差異(=0.701,=0.474)。各組大鼠治療前體重間有顯著性差異(=0.000,=11.156),失眠模型組、蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組較空白對照組減輕(均＜0.01)。治療后,失眠模型組大鼠體重與空白對照組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組大鼠體重增加,與空白對照組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01);蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組大鼠體重與空白對照組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(＞0.05)。

表2 4組大鼠不同時間點(diǎn)體重比較 (±s,g)

注:與空白對照組比較1)＜0.01;與失眠模型組比較2)＜0.01

3.2.2 4組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)水平活動和垂直活動參數(shù)比較

由表3可見,在水平活動上,失眠模型組大鼠活動時間明顯高于空白對照組大鼠(＜0.01),失眠模型組大鼠在中央格停留時間有增高的趨勢,但與空白對照組大鼠比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(＞0.05)。蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組大鼠活動時間明顯低于失眠模型組大鼠(均＜0.05)。在垂直活動上,失眠模型組大鼠站立次數(shù)明顯高于空白對照組大鼠(＜0.05),蒙醫(yī)溫針組和地西泮組大鼠站立次數(shù)明顯低于失眠模型組大鼠(＜0.05,＜0.01)。

表3 4組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)水平活動和垂直活動參數(shù)比較 (±s)

注:與空白對照組比較1)＜0.01,2)＜0.05;與失眠模型組比較3)＜0.01,4)＜0.05

4 討論

失眠癥屬蒙醫(yī)“身、心、語”功能紊亂而引起人體“三根”平衡失調(diào)而導(dǎo)致的“赫依”病。治療的關(guān)鍵在于調(diào)節(jié)“三根”平衡,疏通筋脈,促使機(jī)體歸于“三根七素”相對平衡狀態(tài),恢復(fù)正常生理功能。蒙醫(yī)溫針是集針刺效應(yīng)、溫?zé)嵝?yīng)以及穴位特異性刺激為一體,通過抑制“赫依”,平衡“三根”的作用達(dá)到治療失眠的目的。頂會穴、赫依穴、心穴是臨床用于治療失眠癥的主要穴位。頂會穴具有安神、調(diào)神之功效,對治療“赫依”性喑啞、神志不清、癲狂、視力減退、頭暈、頭痛等起主要作用;赫依穴對治療癲狂、心悸、激蕩、婭結(jié)、夜不能寐、舌苔灰白、頸項(xiàng)強(qiáng)直等赫依性疾病起主要作用;心穴位對治療心悸、心抖、癲狂、巴達(dá)干赫依性心病、失眠、譫妄、納呆、神志昏迷等起主要作用[5]。蒙醫(yī)溫針療法是一種行之有效的治療失眠的方法。本實(shí)驗(yàn)中用到的蒙醫(yī)溫針儀是結(jié)合現(xiàn)代電子技術(shù)研制而成,可以達(dá)到傳統(tǒng)蒙醫(yī)溫針的作用,且具有操作簡便、溫度可調(diào),安全等特點(diǎn)。

睡眠時間是評測睡眠質(zhì)量的重要指標(biāo)。戊巴比妥鈉為一種中樞神經(jīng)抑制藥,低劑量時主要抑制腦干網(wǎng)狀上行激活系統(tǒng),大劑量則對中樞神經(jīng)系統(tǒng)起廣泛抑制,從而出現(xiàn)鎮(zhèn)靜、催眠、麻醉作用,故在一定閾劑量下可致大鼠睡眠。因此選用戊巴比妥鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠是被廣泛采用的鎮(zhèn)靜催眠實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)指標(biāo)[6-7]。

本實(shí)驗(yàn)選用戊巴比妥鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠的模型意義在于觀察蒙醫(yī)溫針與戊巴比妥鈉的協(xié)同作用。以往文獻(xiàn)對戊巴比妥鈉劑量的報道不一,且大鼠自身對戊巴比妥鈉的敏感性也存在差異。因此,前期實(shí)驗(yàn)先對戊巴比妥鈉的閾劑量進(jìn)行了摸索,結(jié)果致大鼠全部睡眠的戊巴比妥鈉閾劑量值為45 mg/kg。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,蒙醫(yī)溫針與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用,可延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠的時間(＜0.01),提示蒙醫(yī)溫針具有鎮(zhèn)靜催眠的作用。

行為是機(jī)體的重要功能表現(xiàn)之一,動物的行為是在神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)和運(yùn)動器官的共同協(xié)調(diào)作用下形成的,其中以神經(jīng)調(diào)節(jié)為主。對行為學(xué)進(jìn)行評估時神經(jīng)、內(nèi)分泌等研究領(lǐng)域的重要組成部分。目前行為學(xué)評價方法有很多種,如觀測大鼠的一般情況、探究行為、情緒反應(yīng)、體力情況等。本實(shí)驗(yàn)采用曠場實(shí)驗(yàn)來評價失眠大鼠模型的行為學(xué)變化。曠場實(shí)驗(yàn)是評價實(shí)驗(yàn)動物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。本實(shí)驗(yàn)在失眠模型大鼠造模過程中,從大鼠一般行為觀察發(fā)現(xiàn),失眠后的大鼠飲食、能量消耗增加,體重下降。大鼠表現(xiàn)倦怠、體毛蓬亂、無光澤。在行為上,長時間失眠后的大鼠興奮性提高,探究行為和攻擊性增強(qiáng),對環(huán)境刺激的警覺性和攻擊性行為增加。至實(shí)驗(yàn)當(dāng)天時(第一次腹腔注射PCPA后7 d),失眠模型組大鼠仍存在上述行為異常。蒙醫(yī)溫針組和地西泮注射液組大鼠在予以針刺刺激和地西泮注射后,睡眠時間、精神狀態(tài)、飲水進(jìn)食、體重等均逐漸恢復(fù)。

曠場實(shí)驗(yàn)的參數(shù)一般有水平運(yùn)動參數(shù)、垂直運(yùn)動參數(shù)和中央格停留時間。水平運(yùn)動參數(shù)有跑動的距離、速度、時間等,這些參數(shù)反映動物的活動度;垂直活動指的是動物的站立、攀壁、修飾等行為,反映動物對新鮮環(huán)境的好奇程度。在曠場實(shí)驗(yàn)中大鼠增加在中央格停留時間,減少外周格時間,顯示更少的焦慮樣行為[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,失眠模型組大鼠在曠場中央格停留時間高于空白對照組,顯示出失眠模型組比空白對照組減少了焦慮樣行為;失眠模型組大鼠活動時間和站立次數(shù)明顯高于空白對照組(＜0.01,＜0.05),顯示模型組的探索性行為增強(qiáng)。蒙醫(yī)溫針組大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中活動時間及站立次數(shù)均明顯低于失眠模型組(＜0.01,＜0.05),曠場中央格停留時間也比模型組低,表明蒙醫(yī)溫針能夠改善失眠所致大鼠焦慮樣行為減少和探索行為和探索行為增強(qiáng)的異常變化。通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),蒙醫(yī)溫針改善失眠的時間、一般情況和行為學(xué)改變的作用和地西泮注射液的作用無差別,表明蒙醫(yī)溫針同地西泮注射液一樣,可以改善失眠大鼠的行為、情緒變化,緩解大鼠的緊張程度,有鎮(zhèn)靜催眠的效果。

失眠導(dǎo)致的煩躁、倦怠等異常行為和情緒變化不僅影響到人的生活質(zhì)量,更會影響人的認(rèn)知、記憶能力。蒙醫(yī)溫針能延長失眠時間的同時有效調(diào)節(jié)失眠模型大鼠精神情緒行為的異常,提示蒙醫(yī)溫針具有改善睡眠、安神、鎮(zhèn)靜的作用,而其治療機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

[1] 陳英松.蒙醫(yī)實(shí)驗(yàn)療術(shù)學(xué)[M].呼和浩特:內(nèi)蒙古大學(xué)出版社, 2008:105.

[2] 張河溪,李曄,吳長輝,等.復(fù)方靈芝制劑對小鼠改善睡眠的實(shí)驗(yàn)研究[J].海峽藥學(xué),2011,23(5):43-45.

[3] 余運(yùn)龍,全世建.交泰丸對PCPA失眠大鼠大腦r-氨基丁酸及受體的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(6):1417-1418.

[4] 孔梅,邢長永,舒曉春.逍遙散干預(yù)抑郁癥睡眠障礙模型大鼠海馬5-HT1A受體,5-HT2A受體的變化[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16 (4):157-160.

[5] 烏蘭,阿古拉.蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法及現(xiàn)代研究[M].呼和浩特:內(nèi)蒙古人民出版社,2006:38,45-46.

[6] 林資閔.不同灸量麥粒灸對失眠大鼠的催眠作用及其機(jī)理研究[D].廣東:暨南大學(xué),2008:20.

[7] 覃軍,劉惠玲,邱孟.半夏厚樸湯對失眠癥治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2010,(9):58-59.

[8] 范新六.基于突觸可塑性的加味四逆散對睡眠剝奪大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的調(diào)控機(jī)制研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2011:1-122.

Effect of Mongolian Medical Warm Needling on Rat Sleep Time and Spontaneous Activities

-,,,,.

,010110,

To investigate the improving effect of Mongolian medical warm needling on sleep by observing its effect on spontaneous activities and pentobarbital natrium-induced sleep time in a rat model of insomnia.(1)A method of inducing sleep with pentobarbital natrium was used. Thirty healthy male SD rats were randomly allocated to blank control and Mongolian medical warm needling groups, 15 rats each. Pentobarbital-induced sleep time was taken as an observation index. (2)A rat model of insomnia was made with chlorophenylalanine. Sixty healthy male SD rats were randomly allocated to blank control, insomnia model, Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups, 15 rats each. Rat spontaneous activities and general conditions were observed.There was no statistically significant difference in pentobarbital natrium-induced sleep latency between the Mongolian medical warm needling and blank control groups of rats (＞0.05). There was a statistically significant difference in pentobarbital natrium-induced sleep time between the Mongolian medical warm needling and blank control groups of rats (＜0.01). Body weight decreased in the insomnia model, Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups of rats before model making in comparison with the blank control group (all＜0.01). There was a statistically significant posttreatment difference in body weight between the insomnia model and blank control groups of rats (＜0.01). Body weight increased in the Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups of rats and there was a statistically significant difference in comparison with the blank control group (＜0.01). Activity time was significantly longer in the insomnia model group than in the blank control group (＜0.01). Activity time was significantly shorter in the Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups than in the blank control group (both＜0.05). The number of standing was significantly larger in the insomnia model group than in the blank control group (＜0.05) and significantly smaller in the Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups than in the insomnia model group (＜0.05,＜0.01).Mongolian medical warm needling has a calming effect and an improving effect on sleep in rats.

Acupuncture therapy; Mongolian medicine; Sleep; Spontaneous activity; Rats; Insomnia model

1005-0957(2014)05-0472-04

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2014.05.0472

2014-01-23

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81260571)

王月洪(1981 - ),女,講師,博士

阿古拉(1965 - ),男,教授,博士生導(dǎo)師