34βE12、P63、CK5/6、α-SMA在前列腺基底細胞中的表達及意義

馮小蘭，黃喜健

(廣西醫科大學附屬民族醫院病理科1、泌尿外科2，廣西南寧530001)

·臨床病理·

34βE12、P63、CK5/6、α-SMA在前列腺基底細胞中的表達及意義

馮小蘭1，黃喜健2

(廣西醫科大學附屬民族醫院病理科1、泌尿外科2，廣西南寧530001)

目的 探討高分子量細胞角蛋白34βE12、肌上皮標記物p63、細胞角蛋白CK5/6、平滑肌肌動蛋白α-SMA在前列腺基底細胞中的表達及意義。方法采用免疫組織化學SP法檢測，觀察34βE12、p63、CK5/6、α-SMA在前列腺增生(PH)、低級別上皮內瘤變(LGPIN)、高級別上皮內瘤變(HGPIN)、前列腺癌(Pca)中的表達。結果30例PH組標本34βE12、p63、CK5/6大多陽性表達，10例LGPIN組多(++)表達，15例HGPIN組多(+)表達，Pca組大多陰性表達。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。α-SMA基底細胞少量表達，Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。結論前列腺基底細胞表達34βE12、p65、CK5/6，p65優于34βE12，α-SMA多陰性表達。在前列腺標本中聯合檢測34βE12、p65、CK5/6有助于對前列腺癌及其他不同病變的鑒別診斷。

34βE12蛋白；p65蛋白；CK5/6蛋白；α-SMA蛋白；前列腺增生；前列腺上皮皮病變；前列腺癌

前列腺癌是當前威脅全球老年男性健康的主要惡性腫瘤，歐美發達國家最常見，我國近幾年來發病率有所增加，但前列腺良惡性病變的鑒別是病理診斷中的難點之一。當前列腺高分化癌與良性增生的鑒別診斷出現困難時，常用的解決方法是根據前列腺基底細胞的存在與否決定其性質。本研究采用免疫組化方法，檢測高分子量細胞角蛋白34βE12、肌上皮標記物p65、細胞角蛋白CK5/6、平滑肌肌動蛋白α-SMA在前列腺增生、上皮內瘤變及癌組織中的表達情況，探討其在前列腺良惡性病變鑒別診斷中的價值。

1 材料與方法

1.1 材料選取2010-2013年廣西民族醫院收治并確診的30例良性前列腺增生癥(PH)[在PH病例中找到前列腺上皮內腫瘤形成，5例并低級別上皮內瘤變(LGPIN)，2例并高級別上皮內瘤變(HGPIN)]和30例前列腺癌(Pca)(癌旁找到5例LGPIN，13例HGPIN)。抗34βE12、p65、CK5/6、α-SMA單克隆抗體及試劑盒均購自福州邁新生物技術公司產品。標本均經10%中性甲醛固定，石蠟包埋。每例前列腺病變的病理診斷均經過2名高年資病理醫生的復查，診斷準確無誤。

1.2 免疫組織化學方法采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶(SP)法進行免疫組織化學檢測，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代一抗作為陰性對照，已知陽性的前列腺組織切片作為陽性對照，操作步驟按SP試劑盒說明書進行。

1.3 陽性判斷標準鏡下觀察切片陽性信號呈棕黃色顆粒狀，p65陽性為胞核著色，34βE12、CK5/6、α-SMA陽性為胞質著色,分級標準：基底細胞層無著色細胞(-)；基底細胞層少數細胞散在著色(+)；基底細胞層著色有間斷(++)；基底細胞層著色連續、明顯(+++)。

1.4 統計學方法應用SPSS17.0統計學軟件進行分析。雙向有序等級資料的關聯性分析采用行X列表法。假設檢驗的顯著性水準取α=0.05。

2 結果

2.134 βE12表達34βE12陽性顆粒定位于前列腺基底細胞胞質。PH組30例腺泡基底細胞多陽性表達，其中3例陰性(-)表達，4例弱陽(+)表達，余均為(++)～(+++)，陽性率為90%(27/30)；LGPIN組10例多為(++)，其中1例弱陽(+)表達，1例陰性表達，陽性率為90%(9/10)；HGPIN組15例多為弱陽(+)，其中2例陽性(++)表達，3例陰性(-)表達，陽性率為80% (12/15)；Pca組30例多陰性(-)表達，其中2例弱陽(+)表達，陽性率為6.67%(2/30)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 p65 表達陽性顆粒定位于基底細胞胞核(圖1)，著色明顯，背景清晰。PH組30例腺泡基底細胞多陽性表達，其中1例陰性(-)表達，3例弱陽(+)表達，余均為(++)～(+++)，陽性率為96.7%(29/30)；LGPIN組10例多為(++)，其中2例弱陽(+)表達，1例陰性表達，陽性率為90%(9/10)；HGPIN組15例多為弱陽(+)，其中3例陽性(++)表達，2例陰性(-)表達，陽性率為86.7% (13/15)；Pca組30例多陰性(-)表達，其中2例弱陽(+)表達，陽性率為6.67%(2/30)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.3 CK5/6表達CK5/6陽性顆粒定位于前列腺基底細胞胞質。PH組30例腺泡基底細胞多陽性表達，其中4例弱陽(+)表達，5例陰性表達，余均為++～+++，陽性率為83.3%(25/30)；LGPIN組10例多弱陽(+)表達，2例陰性表達，陽性率為80%(8/10)；HGPIN組15例多為弱陽(+)，5例陰性(-)表達，陽性率66.7% (10/15)；Pca組30例多陰性(-)表達，其中3例弱陽(+)表達，陽性率為10%(3/30)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.4 α-SMA表達α-SMA陽性顆粒定位于前列腺間質平滑肌細胞胞質，基底細胞陰性(圖2)或少量表達。PH組30例腺泡基底細胞4例弱陽(+)表達，陽性率為13.3%(4/30)；LGPIN組10例其中2例弱陽(+)表達，陽性率為20%(2/10)；HGPIN組15例其中1例弱陽性(+)表達，陽性率為6.67%(1/15)；Pca組30例多陰性(-)表達，1例弱陽(+)表達，陽性率為3.33% (1/30)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

圖1 良性腺體p65(++)，癌腺體p65(-)(SP×400)

圖2 良性腺體α-SMA（-）（SP×400）

3 討論

在前列腺臨床病理檢查中，基底細胞的存在與否是鑒別前列腺良、惡性病變的最關鍵指標，它的重要性甚至超過了肌上皮細胞消失對診斷乳腺導管癌的重要性。在乳腺良惡性病變診斷中34βE12、p65、CK5/6、α-SMA抗體的聯合使用提高了診斷的準確性[1]。有作者認為前列腺的底層細胞和乳腺或涎腺的相似，為肌上皮細胞[2]。本研究探討在前列腺良惡性病變中這四種抗體的表達情況及對鑒別診斷的價值。

人前列腺腺體主要由3種細胞構成，即分泌細胞、基底細胞和神經內分泌細胞。基底細胞約占前列腺細胞總數的10%，不具有分泌功能，被認為是前列腺的多潛能干細胞。光鏡下基底細胞圓形，細胞小，細胞核大而不規則，細胞質少[3]。自從1995年Wojno等[4]通過免疫組織化學方法發現正常或良性增生的前列腺腺泡及導管的基底細胞表達高相對分子質量的角蛋白34βE12以來，34βE12廣泛應用于臨床診斷。有些實驗證明，在少數前列腺癌中34βE12可以有明確的陽性表達[5]，而良性增生中也有假陰性的出現，有學者認為原因可能是標本在甲醛溶液中固定過久導致基底細胞著色不清[6]，因此，單獨采用34βE12標記基底細胞有一定局限性。

p65是一種核蛋白，由位于染色體3q27-29的一種與p53(一種腫瘤抑制細胞)有同源性的基因編碼，具有皮膚、宮頸、乳腺及泌尿生殖道上皮細胞生長及發育的功能。p65的特定同型體可在前列腺假復層上皮細胞的基底細胞、肌上皮細胞等中表達，而在前列腺分泌腺細胞和神經內分泌細胞中不表達[7]，被認為是前列腺基底細胞的良好標記物，但也有學者發現其敏感性不如34βE12[8]。兩者在前列腺基底細胞中表達敏感性仍然為困擾診斷的一個問題。本研究結果顯示在PH組中，34βE12表達率為90%(27/30)，p65表達率為96.7%(29/30)，兩者相比p65更敏感，與部分報道的相似[9]。且與34βE12相比，p65的優點是：(1)可標記34βE12陰性的基底細胞；(2)不易產生類似于34βE12染色的不穩定性(尤其是經灼燒的TURP標本)；(3)由于其染色結果可使細胞核呈強陽性，且背景低，因此陽性結果易于鑒別[10]。

在正常和良性增生的前列腺腺體和導管周圍34βE12及p65大部分表達(++)～(+++)，在LGPIN中大部分表達(++)，在HGPIN中大部分表達(+)，Pca大部分表達(-)。由此可見在前列腺PIN中基底細胞出現缺失，前列腺癌時基底細胞完全消失。基底細胞的缺失狀況是鑒別良惡性病變的關鍵指標。34βE12及p65分別標記基底細胞的胞質和胞核，此兩種抗體聯合使用，或按一定稀釋度混合使用，對提示良性腺泡中基底細胞標記的陽性率有幫助。

但是，本研究中PH組1例34βE12及p65均陰性表達，Pca組2例34βE12及p65均陽性表達，由于在少數良性腺體中基底細胞層可不連續或不明顯，因此對于一些小灶性的腺體其基底細胞層完全消失不能單獨作為確診惡性的指標；相反，某些早期浸潤性前列腺癌，如伴有或不伴有前列腺高級別上皮內瘤變的微浸潤性前列腺癌，可有殘留的基底細胞；前列腺腺癌可偶爾含有p65陽性的細胞，其中大多數是由于良性腺體的陷入或癌組織在有殘余基底細胞的導管內擴散造成的。因此病理診斷中要以HE切片為基礎，結合多方面免疫組化結果，只有在HE染色切片中見到腺泡增生有可疑惡性的細胞學和/或組織學特征時，基底細胞層的消失才可支持浸潤性前列腺癌的診斷[10]。

CK5/6是一種基底細胞的標記物，在正常組織中鱗狀上皮和導管上皮的基底細胞以及部分鱗狀上皮生發層細胞、肌上皮細胞和間皮細胞呈陽性表達[1]。本組資料中顯示，除了基底層細胞呈陽性外，腺腔內部分細胞也呈陽性，在LGPIN、HGPIN、Pca中大部分呈弱陽性及陰性表達，說明在普通型增生和腫瘤增生性組織中CK5/6表達存在明顯差異。

平滑肌肌動蛋白(α-Smooth MuscleActin，α-SMA)為真核細胞的一種細胞骨架蛋白，在一般情況下，α-SMA常特異性地分布于間充質來源的細胞，如平滑肌、肌上皮細胞、周細胞和基底細胞等。有報道電鏡觀察前列腺基底細胞體積小，細胞器較少，細胞間可見橋粒或半橋粒結構，細胞質內未見到成熟束的肌絲，表明該細胞屬于基底細胞而不是肌上皮細胞[11]。本研究結果顯示α-SMA主要表達于前列腺間質平滑肌細胞胞質，基底細胞少量表達，前列腺癌間質細胞出現高表達。

綜上所述，前列腺基底細胞表達34βE12、p65、CK5/6，p65優于34βE12，且與乳腺不同的是α-SMA多陰性表達。我們在實際工作中首選p65，最好聯合運用34βE12、p65、CK5/6這三種抗體標記基底細胞，同時一定要以光鏡下形態學的觀察為基礎，這樣才能明確診斷，為臨床提供可靠的診療依據。

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Expression and significance of 34βE12,p65,CK5/6 and α-SMA in prostatic basic cell.

FENG Xiao-lan1,HUANG Xi-jian2.Department of Pathology1,Department of Urology2,the Affiliated Minzu Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530001,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and significance of high molecular weight cytokeratin(34β E12),myoepithelium marker(p65),cytokeratin(CK5/6)and smooth muscle actin(α-SMA)in the basic cells of prostate.MethodsImmunohistochemical SP method was performed to detect the expression of 34βE12,p65,CK5/6 and α-SMA in prostatic hyperplasia(PH),low-grade intraepithelial neoplasia(LGPIN),high-grade intraepithelial neoplasia(HGPIN)and prostate cancer(Pca).ResultsIn 30 PH samples,34βE12,p65 and CK5/6 were expressed(++)in 10 LGPIN samples,(+)in 15 HGPIN samples and negative in Pca samples.There were significant statistical differences between Pca group and PH,LGPIN and HGPIN groups.Little α-SMA was expressed in basal cells and there was no significant statistical difference between these groups(P＞0.05).Conclusion34βE12,p65 and CK5/6 were expressed in prostate basic cells and p65 was expressed more than 34βE12.α-SMA was negative in most of the prostatic basic cells.Joint detection of 34βE12,p65 and CK5/6 was helpful for the differential diagnosis of prostate cancer.

34βE12 protein;p65 protein;CK5/6 protein;α-SMA protein;Prostatic hyperplasia;Prostatic intraepithelial neoplasia;Prostate cancer

R697+.3

A

1003—6350(2014)21—3248—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.21.1274

2013-12-13)

馮小蘭。E-mail：fengxiaolan2010@163.com