吉林松原地區CD36基因單體型與2型糖尿病的相關性研究

姚慶春等

【摘要】 目的 對吉林松原郭爾羅斯自治縣蒙古族和漢族人群中2型糖尿病（T2MD）患者CD36內含子3（intron 3）[TG]重復序列基因多態性分布情況進行研究， 探討該基因多態性與2型糖尿病的相關性。方法 應用 PCR和直接測序法對40例正常組和193例2型糖尿病患者CD36內含子3 [TG]重復序列基因多態性進行分析。結果 ①CD36內含子3 [TG]重復序列有5種單體型， 即[TG]重復次數為11、12、13、15、16次。②正常組與2型糖尿病患者之間CD36內含子3 [TG]重復序列各種單體型及基因型分布差異無統計學意義（P>0.05）。③蒙古族與漢族之間CD36內含子3 [TG]重復序列各種單體型及基因型分布差異無統計學意義（P>0.05）。④CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型及基因型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 CD36內含子3 [TG]重復次數13次的單體型是松原蒙古族發生2型糖尿病的危險基因。

【關鍵詞】 2型糖尿病；CD36；基因單體型

【Abtract】 Objective To investigate the distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat polymorphism in type 2 diabetes mellitus （T2DM） patients and to expore the correlation between the genetic polymorphism and type 2 diabetes mellitus （T2DM）. Methods Genotypes of CD36 were typed in 193 T2DM patients and 40 normal person by polymerase chain reaction（PCR） and PCR-direct sequencing. Results ①Research Results found CD36 intron 3 （TG） there were five kinds of haplotype repeat sequences， namely [TG] repetitions for 11， 12， 13， 15， 16.②The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat genotype or haplotype has no significant difference between normal control group and T2DM group （P>0.05）.③The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat genotype or haplotype has no significant difference between the Moggol nationality and the Han nationality （P>0.05）. ④The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat for 13 times exist statistically significant difference in the Moggol nationality between normal control group and T2DM group （P<0.05）. Conclusion The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat for 13 times haplotype is a risk genes of type 2 diabetes in the Moggol nationality of songyuan region.

【Key words】 T2DM； CD36； Genetic haplotype

糖尿病是以高血糖為主要特征的內分泌代謝性疾病， 隨著社會進步和生活方式的改變， 糖尿病的發病率越來越高， 2000年全球糖尿病患者 2.85億， 估計到2030年全球將近5億糖尿病患者， 其中中國約占全球的1/3。遺傳因素在糖尿病的發生發展中占有重要的地位， CD36是一種多功能的清道夫受體， 與脂質代謝及動脈硬化的發生有關， 可激活細胞釋放前炎癥反應性細胞因子、白介素等[1]。作者對吉林松原前郭爾羅斯自治縣蒙古族與漢族的健康人群和2型糖尿病患者之間CD36內含子3 [TG]重復序列多態性在分布頻率進行研究， 旨在探討該基因多態性與2型糖尿病的相關性。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 隨機選取在本院健康體檢者40名：蒙古族23名、漢族17名， 年齡歲作為正常對照組， 臨床和實驗室檢查均正常， 排除肝、腎、內分泌和心腦血管疾病。選取2004年12月～2012年12月在本院內分泌科住院的T2DM患者193例（蒙古族86例、漢族107例）， 年齡歲作為T2DM組。T2DM診斷依據1999年WHO制定的診斷標準。所有受檢對象均為吉林松原前郭爾羅斯自治縣地區無血緣關系個體。均簽署知情同意書。

1. 2 研究方法

1. 2. 1 基因組DNA提取 采用Promega公司生產的Wizard@ Genomic DNA Purification Kit提取DNA。取被受檢者肘靜脈血2 ml到加有EDTA抗凝劑的真空采血管中， 并立刻顛倒混勻， 置于離心機中3000轉離心10 min， 取300 μl白細胞加入到1.5 ml離心管中， 按照細胞裂解、核裂解、RNA去除、沉淀蛋白質、析出DNA、清洗DNA、水化DNA的過程分別加入試劑， 進行DNA的提取。所得DNA經紫外分光光度計定量， 并置于-70℃保存備用。

1. 2. 3 PCR擴增產物直接測序 PCR產物用凝膠電泳DNA回收試劑盒純化回收DNA片段后， 送北京奧萊博生物技術有限責任公司， 完成PCR擴增產物測序。

1. 3 統計學方法 應用SPSS13.0軟件進行分析。3 討論

CD36是B類清道夫受體， 具有多種生物學功能， 參與包括炎癥、止血、免疫清除、脂質代謝和動脈硬化在內的許多生理和病理過程[2， 3]。國內外研究已證明CD36與動脈硬化的形成有關。Susztak等[4]在研究糖尿病腎病的發病機制中發現CD36的表達伴隨近端小管上皮細胞凋亡以及小管上皮細胞變性， 高糖環境刺激近端小管上皮細胞可表達CD36。Sampson等[5]研究發現2型糖尿病患者發現2型糖尿病單核細胞上CD36表達上調， 認為2型糖尿病的發生與CD36表達增強有一定關系。鄭壽煥等[6， 7]研究認為， 糖尿病患者血清中sCD36水平明顯升高， 且sCD36水平與血糖波動有關， CD36內含子3[TG]重復序列基因多態性與T2DM患者的發生有關。Griffin等[8]證實了葡萄糖可以通過增強CD36 mRNA的翻譯過程上調其蛋白質的表達， 從而進一步上調CD36的表達。體外實驗也已經證明[9]， 高血糖環境可上調CD36表達。Aase Handberg[10]等也用ELISA的方法檢測2型糖尿病患者血漿中sCD36的含量， 發現2型糖尿病患者血漿中sCD36是正常組的4.5倍， 并與胰島素抵抗有關。

本研究發現總體人群正常組與2型糖尿病患者之間CD36內含子3 [TG]重復序列各種單體型及基因型分布差異無統計學意義蒙古族與漢族之間CD36內含子3 [TG]重復序列各種單體型及基因型分布差異無統計學意義，但是CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布差異有統計學意義并且CD36內含子3 [TG]重復序列13/n的基因型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布比較。根據研究結果考慮CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型是蒙古族發生2型糖尿病的危險基因。

綜上所述， 本研究認為CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型是蒙古族發生2型糖尿病的危險基因， 而CD36內含子3 [TG]重復次數對CD36的表達及對2型糖尿病的發生和發展中的影響機制尚不明確， 需進一步研究。

參考文獻

[1] Mora C， Navarro JF. The role of inflammation as a pathogenic factor in the development of renal disease in diabetes. Curr Diab Rep， 2005，5（6）：399-401.

[2] 高磊， 鮑羿， 洪斌， 等.B類清道夫受體CD36的研究進展.醫學分子生物學雜志， 2006，3（1）：61-64.

[3] 李旭升， 陳國榮， 胡野， 等.糖尿病大鼠巨噬細胞CD36基因表達水平.中國病理生理雜志， 2007，23（11）：2272-2273.

[4] Susztak K， Ciccone E， McCue P， et al. Multiple metabolic hits converge on CD36 as novel mediator of tubular epithelial apoptosis in diabetic nephropathy. PLoS Medicine， 2005，2（2）：152-161.

[5] Sampson MJ，Davies IR， Braschi S，et al.Increased ex-pression of a scavenger receptor （CD36） in monocytes from subjects with type 2 diabetes. Athcrosclcrosis， 2003，167（1）：129-134.

[6] 鄭壽煥， 李金姬， 張春子，等.CD36基因多態性對2型糖尿病患者血脂和CRP的影響.山東醫藥， 2011，51（7）：4-6.

[7] 鄭壽煥， 張春子， 楊秀麗，等. 葡萄糖濃度及CD36基因多態性對單核細胞表面CD36表達水平的影響.中國實用內科雜志， 2012（6）：23-24.

[8] Griffin E， Re A，Hamel N， et al.Alink between diabetes and at herosclersis： Glucose regu-lates expression of CD36 at the level of translstion . Net med， 2001（7）：840-846.

[9] 杜鵑， 張素華.清道夫受體與糖尿病.國外醫學內分泌學分冊， 2004， 24（6）：397-399.

[10] LinksHandberg A， Levin K， Hjlund K，et al. Identincation of the oxidized low-density lipoprotein scavenger receptor CD36 in plasma： a novel marker of insulin resistance. Circulation， 2006， 114（11）： 1169-1176.

1. 2. 3 PCR擴增產物直接測序 PCR產物用凝膠電泳DNA回收試劑盒純化回收DNA片段后， 送北京奧萊博生物技術有限責任公司， 完成PCR擴增產物測序。

1. 3 統計學方法 應用SPSS13.0軟件進行分析。3 討論

CD36是B類清道夫受體， 具有多種生物學功能， 參與包括炎癥、止血、免疫清除、脂質代謝和動脈硬化在內的許多生理和病理過程[2， 3]。國內外研究已證明CD36與動脈硬化的形成有關。Susztak等[4]在研究糖尿病腎病的發病機制中發現CD36的表達伴隨近端小管上皮細胞凋亡以及小管上皮細胞變性， 高糖環境刺激近端小管上皮細胞可表達CD36。Sampson等[5]研究發現2型糖尿病患者發現2型糖尿病單核細胞上CD36表達上調， 認為2型糖尿病的發生與CD36表達增強有一定關系。鄭壽煥等[6， 7]研究認為， 糖尿病患者血清中sCD36水平明顯升高， 且sCD36水平與血糖波動有關， CD36內含子3[TG]重復序列基因多態性與T2DM患者的發生有關。Griffin等[8]證實了葡萄糖可以通過增強CD36 mRNA的翻譯過程上調其蛋白質的表達， 從而進一步上調CD36的表達。體外實驗也已經證明[9]， 高血糖環境可上調CD36表達。Aase Handberg[10]等也用ELISA的方法檢測2型糖尿病患者血漿中sCD36的含量， 發現2型糖尿病患者血漿中sCD36是正常組的4.5倍， 并與胰島素抵抗有關。

本研究發現總體人群正常組與2型糖尿病患者之間CD36內含子3 [TG]重復序列各種單體型及基因型分布差異無統計學意義蒙古族與漢族之間CD36內含子3 [TG]重復序列各種單體型及基因型分布差異無統計學意義，但是CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布差異有統計學意義并且CD36內含子3 [TG]重復序列13/n的基因型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布比較。根據研究結果考慮CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型是蒙古族發生2型糖尿病的危險基因。

綜上所述， 本研究認為CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型是蒙古族發生2型糖尿病的危險基因， 而CD36內含子3 [TG]重復次數對CD36的表達及對2型糖尿病的發生和發展中的影響機制尚不明確， 需進一步研究。

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1. 2. 3 PCR擴增產物直接測序 PCR產物用凝膠電泳DNA回收試劑盒純化回收DNA片段后， 送北京奧萊博生物技術有限責任公司， 完成PCR擴增產物測序。

1. 3 統計學方法 應用SPSS13.0軟件進行分析。3 討論

CD36是B類清道夫受體， 具有多種生物學功能， 參與包括炎癥、止血、免疫清除、脂質代謝和動脈硬化在內的許多生理和病理過程[2， 3]。國內外研究已證明CD36與動脈硬化的形成有關。Susztak等[4]在研究糖尿病腎病的發病機制中發現CD36的表達伴隨近端小管上皮細胞凋亡以及小管上皮細胞變性， 高糖環境刺激近端小管上皮細胞可表達CD36。Sampson等[5]研究發現2型糖尿病患者發現2型糖尿病單核細胞上CD36表達上調， 認為2型糖尿病的發生與CD36表達增強有一定關系。鄭壽煥等[6， 7]研究認為， 糖尿病患者血清中sCD36水平明顯升高， 且sCD36水平與血糖波動有關， CD36內含子3[TG]重復序列基因多態性與T2DM患者的發生有關。Griffin等[8]證實了葡萄糖可以通過增強CD36 mRNA的翻譯過程上調其蛋白質的表達， 從而進一步上調CD36的表達。體外實驗也已經證明[9]， 高血糖環境可上調CD36表達。Aase Handberg[10]等也用ELISA的方法檢測2型糖尿病患者血漿中sCD36的含量， 發現2型糖尿病患者血漿中sCD36是正常組的4.5倍， 并與胰島素抵抗有關。

本研究發現總體人群正常組與2型糖尿病患者之間CD36內含子3 [TG]重復序列各種單體型及基因型分布差異無統計學意義蒙古族與漢族之間CD36內含子3 [TG]重復序列各種單體型及基因型分布差異無統計學意義，但是CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布差異有統計學意義并且CD36內含子3 [TG]重復序列13/n的基因型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布比較。根據研究結果考慮CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型是蒙古族發生2型糖尿病的危險基因。

綜上所述， 本研究認為CD36內含子3 [TG]重復序列13次的單體型是蒙古族發生2型糖尿病的危險基因， 而CD36內含子3 [TG]重復次數對CD36的表達及對2型糖尿病的發生和發展中的影響機制尚不明確， 需進一步研究。

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