花楸果實(shí)醇提物抑菌穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)研究

摘要：本實(shí)驗(yàn)主要以金黃色葡萄球菌為指示菌，研究花楸果實(shí)醇提物活性成分的穩(wěn)定性，結(jié)果表明花楸果實(shí)醇提物分別經(jīng)溫度、酸堿度、紫外處理后只有在酸性條件下具有一定的抑菌活性，堿處理使其抑菌活性消失；溫度、紫外照射對(duì)其穩(wěn)定性幾乎沒(méi)有影響。

關(guān)鍵詞：花楸；抑菌；穩(wěn)定性

中圖分類號(hào)：S574 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-08-22-2

花楸又名臭山槐，為薔薇科、花楸屬喬本植物。小枝粗壯，樹皮灰色，奇數(shù)羽狀復(fù)葉，每葉5～8對(duì)，葉披針形，復(fù)傘房花序，花白色，果實(shí)近球形，徑0.6～0.8厘米，分桔紅色和紅色兩種。喜生濕潤(rùn)肥沃的酸性或微酸性土壤，散生于溪谷和天然林中，喜光、耐寒、耐陰。花楸一般分布在我國(guó)的東北、華北、內(nèi)蒙古等地區(qū)。由于花楸樹形美觀，春季白花簇簇，多而稠密，秋葉變紅艷，紅果滿樹披掛，光彩奪目，經(jīng)久不落，因此可作為城市、園林綠化的觀賞苗木和綠化苗木樹種進(jìn)行培育，花楸果實(shí)具有一定的食用和藥用價(jià)值，并且花楸果實(shí)的抑菌效果十分明顯。本文對(duì)花楸果實(shí)的醇提物金黃色葡萄球菌的抑制作用進(jìn)行研究。

由于傳統(tǒng)的防腐劑一般都是化學(xué)制品，對(duì)人體有一定的傷害。目前，國(guó)際上的食品、藥品防腐劑正在向天然、無(wú)毒的趨勢(shì)發(fā)展。因此，篩選抑菌的天然物質(zhì)已經(jīng)越來(lái)越熱門起來(lái)。根據(jù)有關(guān)報(bào)道，花楸果實(shí)具有極高的殺菌能力，特別對(duì)于金黃色葡萄球菌更加顯著，因此利用花楸果實(shí)的醇提物制備的防腐劑應(yīng)用在食品、藥品或者各個(gè)領(lǐng)域中是可行的。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料采集于牡丹江師范學(xué)院，采樣時(shí)間為 2012年 7～9月，經(jīng)鑒定為花楸，植物標(biāo)本保存于牡丹江師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室。材料用無(wú)菌水洗凈陰干、粉碎過(guò)40目篩，密閉封存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 供試菌種

供試菌種，金黃色葡萄球菌（牡丹江師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供）。菌種用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)。

1.3 試驗(yàn)儀器

RXZ-500C型多段人工氣候培養(yǎng)箱、SW-CJ-2FD進(jìn)化工作臺(tái)、電子萬(wàn)用爐、ES-215型高壓蒸汽滅菌鍋。

1.4 95%乙醇提取物的制備

稱取 100克花楸果實(shí)粉末，加入 500毫升，95%的乙醇，冷浸24小時(shí)，55℃～65℃回流提取2次，每次1小時(shí)，合并溶劑，回收溶劑，制得浸膏，備用。

1.5 提取物的抑菌活性測(cè)定

1.5.1 菌種的活化及菌懸液的制備 從斜面培養(yǎng)基挑取金黃色葡萄球菌菌種，先于35℃～37℃活化 18小時(shí)，用玻璃珠打散加至裝有 10 毫升的無(wú)菌水的試管內(nèi)，振蕩均勻，無(wú)菌生理鹽水作為對(duì)照，調(diào)節(jié)菌懸液的濃度約為 1×104個(gè)。采用無(wú)菌移液槍吸取 100微升，上述菌懸液加入到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，并用無(wú)菌涂布棒涂布均勻。

1.5.2 不同的溫度對(duì)抑菌穩(wěn)定性的影響 將 2克/毫升的花楸果實(shí)提取液分別置于40℃、60℃、80℃、100℃的恒溫水浴鍋中處理 20分鐘后備用，另取部分花楸果實(shí)提取液于121℃高壓蒸汽滅菌20 分鐘后備用。用無(wú)菌鑷子放置4個(gè)已滅菌的牛津杯。其中 3 個(gè)各加入100微升同一濃度的花楸果實(shí)醇提物，另外一個(gè)加入100微升無(wú)菌生理鹽水作為陰性對(duì)照。上述操作完成后，將平板于超凈工作臺(tái)中靜置20分鐘后，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，利用十字交叉方法測(cè)量抑菌圈直徑，結(jié)果求平均值，比較抑菌效果。

1.5.3 不同pH對(duì)抑菌穩(wěn)定性的影響 分別用2摩爾/升的 HCl和2摩爾/升NaOH 將花楸果實(shí)提取液的pH 調(diào)整為 3、5、7、9、11，并放于4℃條件下備用。利用無(wú)菌鑷子將4個(gè)已滅菌的牛津杯放置培養(yǎng)基上。其中3 個(gè)各加入100微升相同 pH的花楸果實(shí)提取液，作為3 個(gè)平行。另外一個(gè)作為對(duì)照加入100微升未處理花楸果實(shí)原提取液。上述操作完成后，將平板于超凈工作臺(tái)中靜置20分后，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24小時(shí)，利用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑。

1.5.4 不同紫外照射對(duì)抑菌穩(wěn)定性的影響 將2克/毫升花楸果實(shí)提取液在15瓦、50厘米的紫外燈下分別照射10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘。并放于紅燈條件下備用。利用無(wú)菌鑷子將4 個(gè)已滅菌的牛津杯放置培養(yǎng)基上。其中3 個(gè)各加入100微升相同紫外照射時(shí)間的花楸果實(shí)提取液，作為3 個(gè)平行。另外一個(gè)作為對(duì)照加入100微升無(wú)菌生理鹽水。上述操作完成后，將平板于超凈工作臺(tái)黑暗放置20分鐘后，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，仍然利用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑。

2 結(jié)果與分析

參照NCCLS/CLIS2006標(biāo)準(zhǔn)和中國(guó)衛(wèi)生部消毒規(guī)范判斷不同誘變劑對(duì)花楸果實(shí)95%醇提取物的抑菌活性進(jìn)行測(cè)定比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)溫度、pH、紫外等不同誘變劑的誘變作用不同，花楸果實(shí)95%醇提物的抑菌活性有一定的差異。

2.1 溫度對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌效果的影響

在溫度分別為40℃、60℃、80℃、100℃、121℃的條件下處理花楸果實(shí)醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實(shí)提取物的抑菌活性的熱穩(wěn)定性關(guān)系如圖1所示。

由圖1可以看出，花楸果實(shí)醇提物經(jīng)不同溫度處理后仍然保持原有的抑菌活性，即使在121℃處理30分鐘后仍具有較高的活性，這表明花楸果實(shí)醇提物的抑菌活性具有較好的熱穩(wěn)定性。

2.2 pH對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌效果的影響

在pH分別為3、5、7、9、11的條件下處理花楸果實(shí)醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實(shí)提取物的抑菌活性的穩(wěn)定性關(guān)系如圖2所示。

由圖2可以看出，隨著pH值的不斷升高，花楸果實(shí)醇提物對(duì)抑菌能力下降。酸性條件下抑菌活性強(qiáng)，且pH在5之后無(wú)抑菌活性，可能是提取物經(jīng)堿處理后使某些抑菌成分與溶液中的堿發(fā)生反應(yīng)，從而使該物質(zhì)的抑菌性消失。緩沖液本身對(duì)供試菌無(wú)抑菌活性。

2.3 溫度紫外對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌效果的影響

在15瓦、50厘米的紫外燈下分別照射10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘。的條件下處理花楸果實(shí)醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實(shí)提取物的抑菌活性的穩(wěn)定性關(guān)系如圖3所示

由圖3可以看出，隨紫外光處理時(shí)間的變化，提取物的抑菌活性基本保持不變，由此可見(jiàn)花楸果實(shí)醇提物對(duì)紫外光具有極高的穩(wěn)定性。

3 結(jié)語(yǔ)

花楸果實(shí)來(lái)源十分豐富，特別是在黑龍江等地區(qū)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，花楸果實(shí)醇提物的抑菌效果隨著溫度的升高抑菌圈增大，說(shuō)明在高溫的條件下，花楸果實(shí)的抑菌效果不受影響，pH對(duì)抑菌效果影響不明顯，紫外線在30分鐘ute到40分鐘ute之間抑菌圈最大，效果最明顯。

近幾年，抗生素藥物廣泛使用，導(dǎo)致細(xì)菌的抗藥性日益增強(qiáng)，藥物的用量也越來(lái)越大，這樣不僅在治療的過(guò)程中加大了成本，還會(huì)使體內(nèi)有一定的藥物殘留。由于中草藥是一種天然的藥劑，所以近幾年人們熱衷于對(duì)中草藥的研究。中草藥在現(xiàn)代預(yù)防和控制細(xì)菌性感染疾病中發(fā)揮了積極作用，從中草藥篩選抗菌藥物用于防治疾病已成為解決抗生素濫用問(wèn)題的有效途徑之一。花楸果實(shí)的醇提物含天然植物抗菌活性成分，根據(jù)研究表明花楸果實(shí)還具有一定的健胃補(bǔ)虛的作用，還可用于清肺止咳、治療肺結(jié)核、哮喘等功效。因此可以通過(guò)正確的提取花楸果實(shí)的有效成分開(kāi)發(fā)新的抗菌產(chǎn)品，還可以利用花楸果實(shí)的抑菌效果不受溫度的限制，用于制作食品防腐劑。

本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，具體的抑菌機(jī)制并沒(méi)有研究，但對(duì)花楸果實(shí)進(jìn)一步的研究以及抑菌活性測(cè)定提供了一定的理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 喬君霞，索菲婭，黃羅冬，等. 新疆短星火絨草不同極性提取物抑菌作用研究[D].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，28 （1）： 83-87.

[2] 凌繼華，黃永新.花楸育苗技術(shù)[B].安徽農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010.

[3] Hsieh P C， Mau J L，Huang S H. （2001） Antimicrobial effect of various combinations of plant extracts [J].Food Microbiology， 2001（18）： 35-43.

[4] National Committee For Clinical Laboratory Standards ， Performance Standards for Antimicrobial Susceptivity Testing：Sixteenth Informational Supplement [S].

[5] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.消毒技術(shù)規(guī)范（2002版）[S].

[6] 李樹明.50味中藥對(duì)8種畜禽病原菌抑菌對(duì)比研究[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2000，（4）：5-8.

[7] PAN Y M，LIANG Y， WANG H S， et al. Antioxidant activities of several Chinese medicine herbs [J]. Food Chemistry，2004，88（3）：347-350.

作者簡(jiǎn)介：趙屹，遼寧師范大學(xué)，中級(jí)助理研究員，研究方向：生命科學(xué)。

2.3 溫度紫外對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌效果的影響

在15瓦、50厘米的紫外燈下分別照射10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘。的條件下處理花楸果實(shí)醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實(shí)提取物的抑菌活性的穩(wěn)定性關(guān)系如圖3所示

由圖3可以看出，隨紫外光處理時(shí)間的變化，提取物的抑菌活性基本保持不變，由此可見(jiàn)花楸果實(shí)醇提物對(duì)紫外光具有極高的穩(wěn)定性。

3 結(jié)語(yǔ)

花楸果實(shí)來(lái)源十分豐富，特別是在黑龍江等地區(qū)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，花楸果實(shí)醇提物的抑菌效果隨著溫度的升高抑菌圈增大，說(shuō)明在高溫的條件下，花楸果實(shí)的抑菌效果不受影響，pH對(duì)抑菌效果影響不明顯，紫外線在30分鐘ute到40分鐘ute之間抑菌圈最大，效果最明顯。

近幾年，抗生素藥物廣泛使用，導(dǎo)致細(xì)菌的抗藥性日益增強(qiáng)，藥物的用量也越來(lái)越大，這樣不僅在治療的過(guò)程中加大了成本，還會(huì)使體內(nèi)有一定的藥物殘留。由于中草藥是一種天然的藥劑，所以近幾年人們熱衷于對(duì)中草藥的研究。中草藥在現(xiàn)代預(yù)防和控制細(xì)菌性感染疾病中發(fā)揮了積極作用，從中草藥篩選抗菌藥物用于防治疾病已成為解決抗生素濫用問(wèn)題的有效途徑之一。花楸果實(shí)的醇提物含天然植物抗菌活性成分，根據(jù)研究表明花楸果實(shí)還具有一定的健胃補(bǔ)虛的作用，還可用于清肺止咳、治療肺結(jié)核、哮喘等功效。因此可以通過(guò)正確的提取花楸果實(shí)的有效成分開(kāi)發(fā)新的抗菌產(chǎn)品，還可以利用花楸果實(shí)的抑菌效果不受溫度的限制，用于制作食品防腐劑。

本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，具體的抑菌機(jī)制并沒(méi)有研究，但對(duì)花楸果實(shí)進(jìn)一步的研究以及抑菌活性測(cè)定提供了一定的理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：趙屹，遼寧師范大學(xué)，中級(jí)助理研究員，研究方向：生命科學(xué)。

2.3 溫度紫外對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌效果的影響

在15瓦、50厘米的紫外燈下分別照射10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘。的條件下處理花楸果實(shí)醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實(shí)提取物的抑菌活性的穩(wěn)定性關(guān)系如圖3所示

由圖3可以看出，隨紫外光處理時(shí)間的變化，提取物的抑菌活性基本保持不變，由此可見(jiàn)花楸果實(shí)醇提物對(duì)紫外光具有極高的穩(wěn)定性。

3 結(jié)語(yǔ)

花楸果實(shí)來(lái)源十分豐富，特別是在黑龍江等地區(qū)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，花楸果實(shí)醇提物的抑菌效果隨著溫度的升高抑菌圈增大，說(shuō)明在高溫的條件下，花楸果實(shí)的抑菌效果不受影響，pH對(duì)抑菌效果影響不明顯，紫外線在30分鐘ute到40分鐘ute之間抑菌圈最大，效果最明顯。

近幾年，抗生素藥物廣泛使用，導(dǎo)致細(xì)菌的抗藥性日益增強(qiáng)，藥物的用量也越來(lái)越大，這樣不僅在治療的過(guò)程中加大了成本，還會(huì)使體內(nèi)有一定的藥物殘留。由于中草藥是一種天然的藥劑，所以近幾年人們熱衷于對(duì)中草藥的研究。中草藥在現(xiàn)代預(yù)防和控制細(xì)菌性感染疾病中發(fā)揮了積極作用，從中草藥篩選抗菌藥物用于防治疾病已成為解決抗生素濫用問(wèn)題的有效途徑之一。花楸果實(shí)的醇提物含天然植物抗菌活性成分，根據(jù)研究表明花楸果實(shí)還具有一定的健胃補(bǔ)虛的作用，還可用于清肺止咳、治療肺結(jié)核、哮喘等功效。因此可以通過(guò)正確的提取花楸果實(shí)的有效成分開(kāi)發(fā)新的抗菌產(chǎn)品，還可以利用花楸果實(shí)的抑菌效果不受溫度的限制，用于制作食品防腐劑。

本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)花楸果實(shí)醇提物抑菌穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，具體的抑菌機(jī)制并沒(méi)有研究，但對(duì)花楸果實(shí)進(jìn)一步的研究以及抑菌活性測(cè)定提供了一定的理論依據(jù)。

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[3] Hsieh P C， Mau J L，Huang S H. （2001） Antimicrobial effect of various combinations of plant extracts [J].Food Microbiology， 2001（18）： 35-43.

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[6] 李樹明.50味中藥對(duì)8種畜禽病原菌抑菌對(duì)比研究[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2000，（4）：5-8.

[7] PAN Y M，LIANG Y， WANG H S， et al. Antioxidant activities of several Chinese medicine herbs [J]. Food Chemistry，2004，88（3）：347-350.

作者簡(jiǎn)介：趙屹，遼寧師范大學(xué)，中級(jí)助理研究員，研究方向：生命科學(xué)。