孔祥敏??楊愛軍??曹井賀??劉莊
[摘要] 目的 探討注射HCG次日,血清HCG/LH比值的高低對獲卵率的影響,并確定合適的臨床參數。方法 通過對本中心194例體外受精-胚胎移植超促排卵患者的數據分析,比較了HCG次日HCG/LH比值水平,并取比值1.0為界分為兩組,分別比較兩組獲卵率和可利用胚胎率。結果 通過對兩組數據的分析,從總體的臨床結局上看,兩者無明顯差異,但是從獲得的卵子數上來講,1組(HCG/LH≤1.0)獲卵率要高于2組(HCG/LH>1.0)(84.49%vs71.35%),可利用胚胎率分別為84.00%和71.30%。兩者有明顯的統計學差異。結論 在促排卵周期中,HCG/LH水平相對越低,也就是說,LH水平較高時,所獲得的卵子數是較高的,這也完全符合臨床,雖然我們的臨床結局沒有差異,但是相對來講,獲卵率的提高,對臨床妊娠率也是一種幫助。
[關鍵詞] HCG/LH;獲卵率;臨床妊娠率
[中圖分類號] R714.8 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616(2014)04-07-05
Effects of HCG/LH ratio on oocyte rate and clinical outcomes
KONG Xiangmin YANG Aijun CAO Jinghe LIU Zhuang
Department of Reproductive Medicine,Affiliated Hospital of Jining Medical College,Jining 272009,China
[Abstract] Objective To determine the effect of HCG/LH on occytes and clinical outcomes. Methods Patients in an in vitro fertilization-embryo transfer (IVF-ET) programme were treated with controlled ovarian hyperstimulation(COH).The HCG and LH level were detected after 24 hours.Then oocyte rate and available embryo for IVF-ET were analyzed between two HCG/LH ratio groups. Results The result of clinical outcomes has no statistical significance. However significant difference were noted for the number of oocytes(84.49% vs 71.35%) as well as available embryos rate(84.00% vs 71.30%) between the two groups with HCG/LH ratio≤1.0 and HCG/LH>1.0. Conclusion In the process of ovulation induction,with lower level of HCG/LH ratio or in other words with relative higher LH level the number of embryos would be achieved. Although has no statistical significance for clinical outcomes,higher vailable embryo rate would be helpful for pregnancy rate in IVF-ET.
[Key words] HCG/LH;The rate of oocytes;The rate of clinical pregnancy
隨著生活質量的提高,人類對戰勝疾病的渴望也隨之上升,但是,人類的不孕不育率卻在下降。導致不孕的因素有很多,環境因素、自身壓力過大、藥物濫用等。輔助生殖技術已經成為不孕患者求子的良藥。在輔助生殖技術中,限制其發展的主要瓶頸是如何提高臨床妊娠率。迄今為止,大部分中心的臨床妊娠率為50%左右,很難突破。我們認為,是否可以提高其他的參數來獲得相當的臨床妊娠率呢?獲卵率的高低或許可以相對的反應臨床妊娠率的高低。
在控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)過程中,越來越多的人更加關注人體生殖相關內分泌水平的變化,以及對助孕
結局產生的影響。同時,卵子質量和子宮內膜的容受性與內分泌水平的變化密切相關。妊娠率的高低更加期待于如何獲得高質量優質胚胎及改善子宮內膜的同步性問題。注射人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG)次日,血清HCG/LH(luteinizing hormone)比值水平與獲卵率的關系還有待商榷。該研究回顧性分析了接受IVF/ICSI助孕的患者資料,并進行了大量的數據統計,探討HCG次日HCG/LH比值水平對臨床妊娠結局的影響。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇2011年1月~2013年7月濟寧醫學院附屬醫院生殖中心的240個取卵周期的229例運用輔助生殖技術治療的患者。年齡25~35歲,平均(30.0±5.7)歲,平均體重(52.0±10.8)kg。分析了新鮮移植周期的184例患者,根據臨床妊娠結局分為兩組,妊娠組90周期,未妊娠組94周期,比較兩組注射HCG次日主要的激素水平。所有患者均符合國家輔助生殖技術規范的要求。兩組患者的年齡、體重等方面無統計學差異(P>0.05)。根據注射HCG次日HCG/LH比值分為≤1.0及>1.0組,比較兩組間的各個激素指標的差異。endprint
1.2 方法
1.2.1 治療方法 根據患者的年齡、基礎內分泌水平、體重等分別采用長方案、微刺激方案進行促排卵。同時,通過經陰道B超檢查及激素水平測定監測卵泡發育情況,當經陰道B超監測卵巢內有2個及以上的卵泡直徑達18mm時,當晚肌注HCG。注射HCG次日,我們通過貝克曼DIX-800查E2、LH、P、HCG水平。HCG日36~38h后取卵,對穿刺卵泡數計數,并計數獲卵個數。取卵當天開始給予黃體支持(40mg黃體酮,一日2次)。取卵后4~6h進行體外授精,包括(常規體外受精(IVF)或卵胞漿內單精子注射(ICSI),取卵第1天觀察并記錄受精情況,取卵第2天和第3天分別觀察胚胎發育情況;并移植第3天的胚胎到子宮,移植2個胚胎;移植(ET)14d后,測血HCG水平,陽性者(HCG≥5.0)診斷為生化妊娠,ET 28d后進行B超檢查,宮內有妊娠囊則確定臨床妊娠,隨后電話隨訪確定妊娠結局。通過生殖病歷系統,調取每例患者的促性腺激素(Gn)使用天數、Gn用量、HCG日子宮內膜厚度、HCG次日測定LH、E2、P值,移植日內膜,妊娠結局,并做進一步分析。
1.2.2 實驗室指標 (1)獲卵數;(2)獲卵率=獲卵數/穿刺卵泡數×100%;(3)2原核胚胎數(2PN數);(4)正常受精數;(5)正常受精率=2PN數/獲卵數×100%;(6)正常卵裂數;(7)正常卵裂率=正常卵裂數/2PN胚胎數×100%;(8)優質胚胎數:采用4級胚胎分級法分為Ⅰ、Ⅱ級的胚胎數,即第3天胚胎發育為8細胞,均勻,碎片小于5%為Ⅰ級;第3天胚胎發育為8細胞,均勻,碎片在5%~20%為Ⅱ級;第3天胚胎發育為8細胞,不均勻,碎片在20%~50%為Ⅲ級;第3天胚胎發育為8細胞,不均勻,碎片大于50%為Ⅳ級。
1.3 統計學處理
采用SPSS13.0軟件包行統計分析,統計方法采用t檢驗,分析數據采用x2檢驗。
2 結果
2.1 HCG次日血清激素水平與妊娠結局
將完成移植的患者按妊娠結局分為妊娠組與未妊娠組,兩組間HCG次日 LH、E2、HCG水平無統計學差異。見表1。
2.2 HCG次日HCG/LH比值水平與助孕結局關系
以HCG次日血HCG/LH比值水平1.0為界進行分為兩組,兩組患者體重、年齡、基礎水平的內分泌水平及促排卵藥物用量無統計學差異,但HCG/LH≤1.0組獲胚率、正常受精率、可利用胚胎率、優質胚胎率均明顯高于HCG/LH>1.0組(P<0.05)。見表2~3。
3 討論
隨著生活節奏的加快、工作壓力增大、以及不良的生活方式等因素的影響,近年來不孕癥的發病率不斷增加[1-2],已成為繼癌癥之后的又一重大疾病。研究表明,在已婚夫婦中有超過15%的人患有不孕癥,給自身帶來痛苦的同時,也給家庭帶來了極大的經濟負擔[3]。自從第1例試管嬰兒誕生以來,
輔助生殖技術(ART)蓬勃發展,為不孕癥患者帶來了曙光。
然而,任何技術都會受到限制,ART的瓶頸在于臨床妊娠率的提高,如何在現有的基礎上提高臨床妊娠率,正是臨床上亟待解決的問題。
體外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期通常進行人工超促排卵,其目的是為了刺激多個始基卵泡同步發育,來獲取較多優質卵細胞,以便獲得優質胚胎來選擇移植,最終提高臨床妊娠率。然而,精子與卵細胞結合形成受精卵的過程非常復雜,調控非常精細,任何一個環節出現異常均會導致受精失敗或異常受精,包括精子頂體異常、精子穿透障礙、精卵膜融合障礙、卵母細胞激活受阻、原核形成障礙以及原核融合障礙等[4];卵細胞的優劣是決定受精與否的最主要因素。通常情況下,體外受精失敗的主要原因之一為卵子成熟度(不熟或過熟都會影響受精),而胚胎質量差大部分的原因是卵源性因素[5]。保證正常受精、胚胎質量的前提是獲得優質的卵細胞。本文通過對兩組患者的卵子受精率分析發現,1組受精率明顯高于2組(79.80% vs 60.10%),差異具有統計學意義。我們認為其原因可能與1組患者HCG次日,HCG/LH比值相對較低,卵泡平均徑線較大,成熟度更好有關。我們知道,IVF-ET周期中,卵子的成熟與年齡、卵巢反應性(Gn量)、HCG注射時機、HCG日血清E2水平等多種因素有關。Ectors等[6]研究表明,IVF-ET周期獲得的優質卵母細胞的個數與卵泡大小有直接關系,同時與HCG注射的時間有關。在IVF周期中,只有處于MII期(成熟卵細胞)的卵細胞才有可能受精,不熟或是過熟的卵子均不能受精。Ectors等研究表明,如果穿刺卵泡直徑縮小,獲得MII期卵子的數量會隨之降低,其受精率也隨之下降。卵子的發育成熟度與促排卵時間及血清E2水平等亦存在相關性。正常情況下,每個成熟卵子對應的E2水平在300~400ng/L,體內E2水平與卵泡生長呈正相關,促排卵周期中也是如此。原因可能是卵泡的直徑越大,其中的卵泡液越多,所含的顆粒細胞也越多,這就為卵子的發育提供了最優的保障,保證了更高的受精率和卵裂率[7]。其次,HCG的注射時機對卵子的成熟度至關重要。在IVF-ET中,如何控制注射促性腺激素(Gn)的量及何時停止注射,以達到一個較滿意的獲卵率和妊娠率,目前國內外各個醫療機構也沒有一個統一的標準,一般都固定為≥14mm。但是人為因素和機器的系統誤差也使得各個生殖中心的標準有一定的差異。HCG注射時間過早,卵泡上的顆粒細胞的LH受體不足,對HCG反應不足,獲卵率降低;注射HCG過晚,卵泡可能已渡過了最恰當的排卵時機,此時,外源性促性腺激素繼續作用,促使卵泡繼續發育而分泌更多的雌激素,誘發內源性的LH峰的發生,卵泡黃素化,也會降低獲卵率。再者卵泡直徑的增大可使得卵子發育過于成熟,有可能導致卵母細胞超微結構異常,可能與卵子內出現一種退化的細胞器即滑面內質網(sERCs)[8]有關。要獲得高質量的卵子,HCG的劑量及HCG次日患者體內的血清HCG含量有一定的關系。HCG次日,我們通常測定患者體內的HCG含量,通過我們的臨床觀察,一般HCG劑量很低的情況下,獲卵率不高。有可能患者對HCG抵抗,此時HCG無法發揮扳機的作用促進排卵。因此,對這部分人群,有必要給予補充HCG。我們知道,此時也有內源性的LH來促進排卵的發生,但是通常情況下,LH是不足的,此時給予HCG,能發揮雙扳機的作用,來獲得高質量的卵細胞。endprint
我們知道,HCG在輔助生殖中的作用相當明顯,調節卵子成熟、誘發排卵等等。研究表明,HCG的用量影響獲卵數,低劑量的獲卵數明顯要低于高劑量的[9]。徐鳳琴、張云山等研究表明,HCG的用量并不影響獲卵率,但高劑量的HCG誘發排卵容易導致卵巢過度刺激綜合征(OHSS)[10-11]。我們認為,在IVF周期中,針對不同的人群,尋找一個合適的HCG劑量是必要的。在節省患者花費的同時,也為我們臨床降低了風險。與此同時,黃體生成素(LH)是排卵的重要指標。一般情況下,LH值上升到基礎值得3倍以上時,12~24h后會發生排卵。因此,在HCG次日,LH的值都相當偏高,這樣會獲得比較理想的卵子質量和個數。然而,也有一部分人群,在HCG次日,LH的值卻降低,一方面的原因是拮抗劑發揮作用,抑制了體內的LH峰的出現;另一方面,該患者本身基礎的LH比較低,注射HCG后,誘發了部分卵泡的提早排出,導致LH降低[12]。總之,LH降低預示著獲得卵子數的減少。
在輔助生殖技術中,臨床妊娠率是任何一個中心所要突破的關鍵。高的獲卵率和優胚率是增加臨床妊娠率的一個因素。正常子宮內膜隨月經周期而消長,子宮僅有一個極短的時期允許胚胎著床即窗口期,雌激素和孕激素的水平可能會影響子宮內膜的容受性[13-14]。雌孕激素直接作用于子宮內膜[15]。研究表明,HCG可以影響子宮內膜的容受性[16]。研究表明,在IVF-ET中,胚胎移植前宮腔內灌注hCG可以提高種植率和妊娠率[17]。鑒于此,我們可以試圖在移植前,常規進行HCG宮腔灌注,結合理論來觀察臨床效果。
到目前為止,仍沒有一種可靠的方式或手段來提高臨床妊娠率,我們也只是在理論上討論一些可行的辦法來輔助臨床。臨床妊娠率的提高還有待我們進一步的研究和實踐。
[參考文獻]
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(收稿日期:2013-11-16)endprint
我們知道,HCG在輔助生殖中的作用相當明顯,調節卵子成熟、誘發排卵等等。研究表明,HCG的用量影響獲卵數,低劑量的獲卵數明顯要低于高劑量的[9]。徐鳳琴、張云山等研究表明,HCG的用量并不影響獲卵率,但高劑量的HCG誘發排卵容易導致卵巢過度刺激綜合征(OHSS)[10-11]。我們認為,在IVF周期中,針對不同的人群,尋找一個合適的HCG劑量是必要的。在節省患者花費的同時,也為我們臨床降低了風險。與此同時,黃體生成素(LH)是排卵的重要指標。一般情況下,LH值上升到基礎值得3倍以上時,12~24h后會發生排卵。因此,在HCG次日,LH的值都相當偏高,這樣會獲得比較理想的卵子質量和個數。然而,也有一部分人群,在HCG次日,LH的值卻降低,一方面的原因是拮抗劑發揮作用,抑制了體內的LH峰的出現;另一方面,該患者本身基礎的LH比較低,注射HCG后,誘發了部分卵泡的提早排出,導致LH降低[12]。總之,LH降低預示著獲得卵子數的減少。
在輔助生殖技術中,臨床妊娠率是任何一個中心所要突破的關鍵。高的獲卵率和優胚率是增加臨床妊娠率的一個因素。正常子宮內膜隨月經周期而消長,子宮僅有一個極短的時期允許胚胎著床即窗口期,雌激素和孕激素的水平可能會影響子宮內膜的容受性[13-14]。雌孕激素直接作用于子宮內膜[15]。研究表明,HCG可以影響子宮內膜的容受性[16]。研究表明,在IVF-ET中,胚胎移植前宮腔內灌注hCG可以提高種植率和妊娠率[17]。鑒于此,我們可以試圖在移植前,常規進行HCG宮腔灌注,結合理論來觀察臨床效果。
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(收稿日期:2013-11-16)endprint
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(收稿日期:2013-11-16)endprint