肝惡性腫瘤射頻消融術后患者細胞免疫功能觀察

閆景彬閆秀梅陳 斌孫宏偉

1浙江省溫州市中西醫結合醫院超聲科 溫州 325000 2溫州醫學院附屬第二醫院兒科

3溫州醫學院附屬第一醫院

肝惡性腫瘤射頻消融術后患者細胞免疫功能觀察

閆景彬1閆秀梅2陳 斌3孫宏偉3

1浙江省溫州市中西醫結合醫院超聲科 溫州 325000 2溫州醫學院附屬第二醫院兒科

3溫州醫學院附屬第一醫院

肝惡性腫瘤；射頻消融；細胞免疫；超聲

肝癌是嚴重威脅人類健康的最常見的惡性腫瘤之一，當前對肝癌臨床治療的研究已從單純物理、化學抗腫瘤研究提升到注重機體免疫機能狀態改變的綜合抗腫瘤機制方面的研究。射頻消融術（radiofrequency ablation，RFA）治療肝癌在抗腫瘤治療領域內占有越來越重要的地位。研究表明[1]，射頻消融術能有效減緩腫瘤生長，改善患者局部或全身的免疫功能。T淋巴細胞是機體免疫系統內功能最重要的一大細胞群[2]，對患者的預后有重要的意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2012年1月—2013年5月，選取我院RFA治療肝癌患者25例，男19例，女6例；年齡37～75歲，中位年齡48歲。患者均經影像學檢查、血清腫瘤標志物和經肝穿刺活檢確診。其中原發性肝癌17例，轉移性肝癌8例；單發病灶19例，2個5例，3個1例，共計32個；病灶直徑＜3cm27處，3～5cm 5處；其中AFP升高的原發性肝癌患者15例；肝功能Child分級：A級21例，B級4例。入選條件：患者一般情況尚可，均無明顯心臟、肺、腎等主要臟器損傷，所有病例未經放療或化療，治療期間未使用影響免疫功能的藥物。患者自愿接受RFA治療，并保證在接受射頻消融術治療后30天內不接受其它方式的治療，術前簽署知情同意書。排除門靜脈內有癌栓，或肝內腫瘤總數超過4個，或凝血功能有嚴重障礙者。同時選擇25名健康獻血者作為對照組，男20名，女5名，年齡22～55歲，中位年齡41歲。兩組性別、年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2儀 器 德國西門子公司Acuson Sequoia 512超聲診斷儀，探頭頻率2～10MHz；配備探頭穿刺架。epics-xl流式細胞儀（美國COULTER公司）；抗CD3—FITC/CD8-PE，抗CD3—FITC/CD4-PE（法國IM公司）。美國RITA公司RITA1500型射頻治療儀。

1.3射頻消融步驟 完善術前準備，治療前應用彩色多普勒超聲觀察腫瘤及周邊臟器關系，術前建立靜脈通路，肌注度冷丁、安定，并且確定穿刺部位。消毒、鋪巾，用無菌袖套包扎穿刺探頭及連接線，尋找最合適的進針線路，超聲引導下取三份不同位置的腫瘤組織，送病理檢查。操作方法：14G套管針經皮穿刺到腫瘤內并明確針尖位置，消融范圍≥R+1.5cm（R為腫塊直徑），放置入射頻針。選擇時間12～20min，功率60～80W，對直徑＜5cm的靶腫瘤，要求使其微波治療的靶腫瘤全部被強回聲掩蓋，＞3～5cm的腫瘤重點對靶腫瘤及其周邊血管處行微波硬化處理。術后碳化針道，拔針，并觀察引導套管內是否有膽汁或血液溢出現象，如有則填塞明膠海綿。

1.4外周血CD3+CD4+、CD8+、NK檢測 25例患者分別于RFA前1天，RFA后10、20、30天抽取外周靜脈血5mL，肝素鈉抗凝，送檢CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表達水平。并與25名體檢志愿者的外周血液T細胞亞群檢測結果進行比較。

1.5統計學方法 應用SPSS11.0統計軟件，數據以均數±標準差（） 表示，各指標處理前、后的結果比較采用配對t檢驗，兩組比較采用成組t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1臨床療效 25例經過RFA后無死亡病例，無射頻消融相關手術并發癥，均于術后1個月內完成隨訪并且完成檢查。11例治療后腫瘤直徑縮小＞1/2，其余患者治療前后腫瘤大小無明顯改變；彩色多普勒超聲檢查發現，17例腫瘤區域血流消失，8例血流阻力指數較治療前有不同程度下降。術后增強MR、CT造影顯示治療病灶內未見明顯動脈期增強。

7例術前AFP指標正常者，術后未見明顯變化。另18例術后AFP指標均較術前明顯下降，其中7例完全降至正常范圍。

2.2外周血T淋巴細胞亞群比較 對照組與射頻組術前比較，CD3+、NK細胞差異無統計學意義；射頻組術前CD4+及CD4+/CD8+比值明顯低于對照組，CD8+水平明顯高于對照組，差異有統計學性意義（P＜0.01）。RFA術后第10天、第20天及第30天CD4+細胞及CD4+/CD8+比值均比術前增高（P＜0.05），CD8+細胞降低（P＜0.05）。術后第30天時NK細胞水平明顯高于術前（P＜0.05）。術后血CD3+細胞與術前比較無明顯變化。見表1。

表1 對照組與射頻組術前、術后T淋巴細胞亞群檢測結果（） %

表1 對照組與射頻組術前、術后T淋巴細胞亞群檢測結果（） %

注：與對照組比較，*P＜0.01；與術前比較，△P＜0.05

組別對照組射頻組術前1天術后10天術后20天術后30天n/例25 25 25 25 25 CD3+ 69.98±7.94 65.98±11.13 67.21±11.75 69.01±11.43 68.37±12.98 CD4+ 42.86±8.57 28.98±10.11* 37.89±9.34△36.47±10.43△37.21±10.04△CD8+ 21.98±5.87 31.54±13.26* 25.24±9.20△24.52±9.89△23.94±9.76△CD4+/CD8+ 2.14±0.87 1.27±0.85* 1.75±0.87△1.83±1.24△1.94±1.21△NK 7.54±6.59 8.74±5.12 11.45±6.78 17.78±8.25△17.11±8.10△

3 討論

隨著RFA技術的發展及臨床療效的不斷提高，RFA已經成為肝癌綜合治療中重要的治療手段之一，特別是小肝癌的RFA治療達到了與手術切除相似的效果[3-5]。RFA不僅可使直徑≤5cm的小肝癌一次性完全滅活，還可激活機體的免疫力，為新興的腫瘤治療手段之一[6]。具有簡便、微創、并發癥少、可多次重復的特點。

研究證實[7-9]，惡性腫瘤患者常常合并有免疫功能下降。原發性肝惡性腫瘤患者體內T淋巴細胞亞群存在不同程度的紊亂，本組腫瘤患者術前CD4+、CD4+/ CD8+均低于正常對照組，CD8+較正常對照組高；同時肝惡性腫瘤誘導產生的血清免疫抑制因子在腫瘤的發生過程中所發揮的免疫抑制作用，進一步加重外周血T淋巴細胞功能紊亂。

本組結果顯示，射頻組的外周血T淋巴細胞亞群相比對照組變化更為明顯，手術前后CD8+、CD4+及CD4+/CD8+差異有統計學意義（P＜0.01）；患者T細胞免疫功能從術后10天開始逐漸升高，NK細胞水平未見下降，術后30天NK細胞水平則有明顯提升，表明患者的外周血免疫功能得到了改善甚至加強。本研究表明，超聲引導射頻消融治療肝惡性腫瘤短期內療效顯著，患者細胞免疫功能得到顯著改善，對肝惡性腫瘤患者的預后產生積極影響[10]。

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2013-08-20