紫外分光光度法測(cè)定保健食品中總黃酮的含量

董麗榮 楊曉梅 李宗順 白文莉

1.昆明市食品藥品檢驗(yàn)所，云南 昆明 650032;2．云南省玉溪市食品藥品檢驗(yàn)所，云南 玉溪 653100

近年來，隨著自由基生命科學(xué)的進(jìn)展，黃酮類化合物不僅是一種活性物質(zhì)，還是重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其藥理和營(yíng)養(yǎng)性都得到了國(guó)內(nèi)外的廣泛深入研究和臨床試驗(yàn)［1］。作為一種新運(yùn)用的營(yíng)養(yǎng)素，黃酮類化合物對(duì)人體具有重要的生理保健功效，并體現(xiàn)出了如下功能:消除疲勞、保護(hù)血管、防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、活化大腦及其它臟器細(xì)胞、抗脂肪氧化、抗衰老等［2、3］。目前市場(chǎng)上有較多以黃酮類為功效成分的保健食品，總黃酮也多作為主要的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 儀器與試劑

UV－260型紫外可見分光光度計(jì) (日本島津);AEL－200型電子天平 (日本島津);BP211D－OCE型電子天平(德國(guó)賽多利斯)。

蘆丁對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):10080－200707;含量以92．5%計(jì));無水乙醇 (分析純，利安隆博華醫(yī)藥化學(xué)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇［4］取蘆丁對(duì)照品溶液 (15 μg/ml)在200～600 nm波長(zhǎng)內(nèi)掃描，結(jié)果表明:在360nm處，對(duì)照品溶液有最大吸收峰，故測(cè)定波長(zhǎng)選擇360 nm。取“2.2項(xiàng)”下樣品溶液在200～600 nm波長(zhǎng)內(nèi)掃描，結(jié)果表明:在360 nm處有最大吸收峰。

2.2 樣品溶液的制備 取樣品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇100ml，密塞，稱定重量，搖勻，超聲處理 (功率250 W，頻率40 KHZ)30分鐘，放冷，用30%乙醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45μm微孔濾膜，即得。試驗(yàn)表明微孔濾膜過濾能除去樣品雜質(zhì)，而對(duì)指標(biāo)性成分沒有影響 (對(duì)照品溶液0.45μm微孔濾膜過濾后在360nm吸光度無明顯變化)。結(jié)果見表1。

表1 對(duì)照品溶液過濾前后吸光度變化情況

2.3 線性關(guān)系的考察

2.3.1 儲(chǔ)備液的制備 精密稱定蘆丁對(duì)照品為10.8mg，置于200ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 分別精密吸取“2.3.1項(xiàng)”儲(chǔ)備液0.4、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于 10 ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。取30%乙醇為空白對(duì)照，在360 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度A值與濃度C值線性回歸，得曲線方程為:C=32.078A+0.003，r=1。結(jié)果表明，蘆丁在2～30μg/ml濃度范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取同一濃度蘆丁對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，測(cè)定吸光度，RSD%為0.1%。

2.3.4 穩(wěn)定性考察 取紐斯葆牌葛維片 (批號(hào)為BE263－A)14片，去包衣，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，密塞，稱定重量，超聲處理 (功率250 W，頻率40 KHZ)30分鐘，放冷，用30%乙醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45μm微孔濾膜，即得。分別于0、2、4、8、12、24h用紫外 －可見分光光度計(jì)測(cè)定其吸收度 (360nm)，測(cè)定結(jié)果RSD為0.7%，結(jié)果表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性考察 取紐斯葆牌葛維片 (批號(hào)為BE263－A)20片，去包衣，研細(xì)，精密稱取6份，每份約0.5 g，樣品處理方法同“2.3.4項(xiàng)”，分別測(cè)定其吸收度，測(cè)定結(jié)果RSD為1.2%，結(jié)果表明，樣品重復(fù)性良好。

2.3.6 回收率試驗(yàn) 精密稱取紐斯葆牌葛維片 (批號(hào)為BE263－A)粉末9份，每份約0.25 g，分別精密加入適量的蘆丁對(duì)照品溶液，按照“2.2.4項(xiàng)”操作，分別測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率測(cè)定結(jié)果

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

2.4 樣品含量測(cè)定結(jié)果 取17批市售含黃酮的樣品，按上述方法測(cè)定，結(jié)果見表3。

3 討論

保健食品中總黃酮的含量測(cè)定檢驗(yàn)方法多采用聚酰胺小柱脫色除雜質(zhì)，試驗(yàn)操作表明精密度難以控制，且試驗(yàn)中用到強(qiáng)致癌物苯作洗脫極［5］，不利于環(huán)境保護(hù)和操作者身體健康。本實(shí)驗(yàn)樣品提取采用30%乙醇為溶劑［6］，回收率試驗(yàn)表明樣品提取完全，且不使用苯、甲醇等具有毒性的有機(jī)溶劑，更環(huán)保和健康。

樣品超聲提取，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，直接測(cè)定，快速、簡(jiǎn)便、精密度良好，對(duì)照品溶液經(jīng)微孔濾膜過濾前后，吸收度不變，表明過濾前后指標(biāo)成分沒有損失。樣品溶液過濾前后吸收度有明顯變化，表明經(jīng)微孔濾膜過濾，使樣品更純凈，假陽性干擾減小，與上聚酰胺小柱除雜質(zhì)效果相同，而精密度明顯優(yōu)于上柱。

［1］龔盛昭．黃酮類化合物保健食品大有開發(fā)價(jià)值［J］．廣州食品工業(yè)科技，18(1):63－64．

［2］譚秦麗，劉冬，李玉寶，等．總黃酮化合物藥理研究進(jìn)展［J］．安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，28(3):62－64．

［3］田永利，劉志宗，葛林，等．總黃酮類化合物含量測(cè)定方法和藥理作用研究進(jìn)展［J］．河北醫(yī)藥，2010，32(8):2095－2096．

［4］肖香蘭，羅仁才，張楠．保健食品中總黃酮的測(cè)定方法［J］．中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，17(6):1037－1038．

［5］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范［M］．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，2003．

［6］董宇．黃酮類化合物的提取方法研究及展望［J］．人參研究，2009，22(4):33－35．