抑郁模型大鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為的相關性分析

楊 宇 施 鵬 張歆悅 王煜曄 崔 瑩 李 爽

抑郁模型大鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為的相關性分析

楊 宇1施 鵬2張歆悅1王煜曄1崔 瑩1李 爽1

目的 研究抑郁模型大鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為的相關性。方法選擇雄性Wistar大鼠作為實驗對象，隨機分為抑郁模型組和健康對照組，依次給予足底電擊、冰水游泳、熱應激、夾尾、禁水、禁食建立抑郁模型，采用Western-blot的方法檢測海馬組織中BDNF含量的蛋白含量，采用糖水實驗和懸尾實驗測定抑郁樣行為。結果抑郁模型組海馬組織中BDNF的蛋白含量低于健康對照組，且與糖水消耗量呈正相關、與懸尾不動時間呈負相關。結論抑郁大鼠模型海馬中BDNF含量降低，且與抑郁樣行為具有相關性。

抑郁癥；腦源性神經營養因子；抑郁樣行為

抑郁癥是精神科的常見疾病，但發病機制仍未闡明，這也給藥物治療造成了較大難度。BDNF是一類與神經功能密切相關的細胞因子，其含量異常可導致精神神、經癥狀的發生。在下列研究中，分析了抑郁模型大鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為的相關性，現匯報如下。

1 材料與方法

1.1 材料由沈陽醫學院實驗動物中心提供30只健康Wistar雄性大鼠作為本次研究對象，體重（250 ±10）g。常規試劑和耗材購買于生工生物公司，抗體購買于Sigma公司，手術器械等由機能實驗中心提供。大鼠編號后，采用隨機數表法分為抑郁模型組和健康對照組，每組15只。抑郁模型組按照模型建立方法進行手術，健康對照組按照常規方法進行飼養。

1.2 方法

1.2.1 飼養方法 在動物實驗中心的動物房飼養，溫度（25±1）℃、濕度60%～70%，自然晝夜節律光照，自由獲得食物和飲水。

1.2.2 模型建立方法 每日隨機挑選以下刺激中的一種，包括電流 1.0mA、頻率1Hz的足底點擊，共30次；4℃冰水游泳、10m in；45℃熱應激、30min；夾尾1m in；禁水24h；禁食24h。持續刺激21d，保證每種刺激不少于2次。

1.2.3 Western-Blot 處死大鼠后分離海馬組織，加入RIPA后提取總蛋白，100℃變性后進行Western-blot。按配配方和流程配置濃縮膠、分離膠，以此進行垂直電泳和電轉膜，完成后取出NC膜并用脫脂牛奶封閉2h。TBST洗滌5min×3遍后加入BDNF和actin的第一抗體，4℃搖床孵育過夜。第2天取出NC膜，于HRP標記的第二抗體中孵育2h，TBST洗滌后顯影，并讀取蛋白條帶的灰度值。

1.2.4 糖水實驗 刺激21d后，進行糖水實驗：給予1%蔗糖水溶液，測定24h內糖水的消化量。

1.2.5 懸尾實驗 刺激21d后，進行懸尾實驗：在大鼠尾部距尖端約1cm處用膠布固定，與懸尾測試儀相連接，使大鼠呈懸空倒掛狀、與臺面距離約15cm。當大鼠由掙扎轉為靜止不動時開始計時，記錄6min內大鼠的累計懸尾不動時間。

1.3 統計學方法采用SPSS 18.0軟件進行分析，計量資料采用t檢驗分析；相關性分析采用以BDNF蛋白含量為自變量、抑郁樣行為為應變量的單因素回歸分析。檢驗標準以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠海馬組織中的 BDNF含量抑郁模型組海馬組織中BDNF的蛋白含量[（46.4±6.4）vs（100.0 ±16.2），t=10.985、P＜0.05]低于健康對照組，差異有統計學意義。

2.2 海馬組織中 BDNF含量與抑郁樣行為的相關性抑郁模型組海馬組織中BDNF的蛋白含量與糖水消耗量呈正相關、與懸尾不動時間呈負相關，見表1。

表1 海馬組織中BDNF含量與抑郁樣行為的相關性分析結果

3 討論

抑郁癥是臨床常見疾病，危害極大，但發病機制仍未闡明。5-羥色胺、去甲腎上腺素等神經遞質在抑郁癥發病中的作用已得到了一致認可，針對其設計的再攝取抑制劑藥物也被應用于抑郁癥的治療。但該類藥物起效需要4～6周，提示5-HT、NE異常僅是抑郁癥發病，也限制了其臨床應用價值。腦源性神經營養因子BDNF在神經系統中發揮了重要作用，參與了神經元的生長、分化等過程，并于神經的可塑性有關。其含量異常可能導致神經元的損傷，進而產生一系列的神經精神癥狀[1]。

在本研究中，從鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為相關性的角度分析了BDNF這一細胞因子在抑郁癥發病過程中的作用[2]。糖水消耗實驗和懸尾實驗是評價大鼠抑郁程度的常用方法，處于慢性應激和抑郁狀態中的大鼠會出現糖水攝入量減少、懸尾不動時間延長[3]。通過單因素回歸分析的方法分析相關性可知，抑郁模型組海馬組織中BDNF的蛋白含量與糖水消耗量呈正相關、與懸尾不動時間呈負相關。這就提示海馬組織中BDNF含量減少可導致抑郁樣行為的發生，與抑郁癥的發病密切相關。

由此可以得出，抑郁大鼠模型海馬中BDNF含量降低，且與抑郁樣行為具有相關性，可作為臨床治療抑郁癥的靶點。

[1] 王丹.海馬BDNF和iNOS與慢性應激性抑郁的關系[J].信陽師范學院學報(自然科學版),2010,23(2):237-242.

[2] 董愛國,趙麗麗,李海紅,等.BDNF在抑郁癥發病機制中的作用及其抗抑郁作用機制的研究進展[J].中國醫療前沿,2011,6(6):16-19.

[3] 王涵,李娜,文威,等.慢性應激致大鼠抑郁行為涉及海馬形態變化和BDNF表達降低[J].基礎醫學與臨床,2011,31(5):565-569.

R749.4

A

1673-5846(2014)05-0232-02

1沈陽醫學院基礎醫學院，遼寧沈陽 110034

2沈陽醫學院附屬中心醫院，遼寧沈陽 110034