體外心肌細胞缺血后適應模型的建立及評價

李曉梅, 包馨慧， 楊毅寧, 馬依彤, 陳邦黨， 劉 芬， 李海霞

(新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院心臟中心， 烏魯木齊 830054)

2003年Zhao等[1]首次提出缺血后適應(Ischemia postconditioning，IPost)概念，它是一種在再灌注早期，通過快速、反復、短暫中斷冠脈血流后，再完全恢復心肌灌注，而起到明顯減少心肌梗死范圍、抗再灌注心律失常及抗心肌細胞凋亡等減輕再灌注損傷、保護心肌的有效可行的方法[2-3]。目前多項研究顯示IPost是減輕急性心肌梗死再灌注損傷可行和最為有效的治療措施，有著極大的臨床應用價值，已成為目前的研究熱點[4]。缺血再灌注損傷目前大部分在器官及整體動物水平如離體心臟灌流、活體動物模型上等進行，尤其是國內(nèi)，尚未見在細胞水平上建立缺血后適應模型進行相關的實驗研究報道。本研究進行體外培養(yǎng)新生SD乳鼠心肌細胞，擬在細胞水平建立心肌細胞缺血后適應模型，評價心肌細胞缺血后適應模型對心肌細胞再灌注損傷的影響，為缺血性心臟病的研究及治療提供基礎。

1 材料與方法

1.1實驗動物、試劑與儀器選取出生1～3 d的SD乳鼠20只,雌雄不限(由新疆醫(yī)科大學實驗動物中心提供)。DMEM培養(yǎng)基(GIBCO),小牛血清(GIBCO),胰酶(GIBCO)，Ⅱ型膠原酶(GIBCO)，Brdu-5(Sigma)，Hochest33342試劑盒(Sigma),Bcl-2及Bax抗體(Santa，美國)。

1.2心肌細胞培養(yǎng)取SD大鼠心臟,Hanks液中清洗3～4次,去心包膜及心房，將心室肌切碎，加入用D-Hanks配置的0.05%胰酶和0.08%膠原酶 Ⅱ 的混合溶液水浴震蕩消化，每次10 min，共8次，每次吸取上清，吹打分散細胞，經(jīng)濾網(wǎng)過濾后1 000 r/min離心5 min后用培養(yǎng)液重懸，差速貼壁90 min，加入Brdu后將細胞密度調(diào)整至(5～6)×105cells/L接種于培養(yǎng)皿中，于5%的CO2、高濕度的培養(yǎng)箱孵育后，24 h后觀察細胞存活率，培養(yǎng)48 h后，換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)?！?br>