鼠疫耶爾森氏菌YopD抗原基因在大腸桿菌中的克隆表達

郭 榮， 申小娜， 李 博， 陳 艷， 張渝疆

(1新疆醫科大學， 烏魯木齊 830011； 2新疆維吾爾自治區疾病預防控制中心， 烏魯木齊 830002； 3中國疾病預防控制中心， 北京 102206)

鼠疫(Plague)是一種由鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia pestis,簡稱鼠疫菌)引起的一種自然疫源性疾病,是一種古老但至今為止仍嚴重威脅人類健康的烈性傳染病。20世紀80年代之后，在全球范圍內鼠疫疫情呈明顯上升趨勢[1]。鼠疫免疫學診斷是鼠疫防治工作中的重要環節,是快速、敏感診斷鼠疫的方法之一。近年來，由于DNA疫苗能夠誘導出較好的體液免疫和細胞免疫而日益受到重視[2]。YopD是耶爾森氏菌屬特異蛋白，是由70 kb的毒力質粒-pCD1編碼的，該編碼質粒保守且對耶爾森氏菌毒力的發揮起到重要作用。YopD具有調節或轉運 Yops定位攻擊靶細胞的功能[3-4]。正是由于上述外膜蛋白的作用，使巨噬細胞不能有效吞噬病原體從而造成耶爾森氏菌僅在感染早期維持細胞內寄生，而在以后階段主要是在細胞外存活和繁殖的現象。另有研究發現，重組的 YopD 抗原免疫小鼠能抵抗鼠疫耶爾森氏菌 C12 株(無莢膜) 的攻擊(但不能抵抗同等劑量的有莢膜鼠疫耶爾森氏菌的攻擊)[5]。有關研究認為，YopD可作為潛在的診斷靶點[6]。本研究選取鼠疫菌重要功能蛋白YopD進行克隆表達，為鼠疫潛在診斷靶點及新型疫苗的選擇奠定基礎。

1 材料與方法

1.1菌株與載體質粒以云南玉龍鼠疫菌株(D106004)DNA為聚合酶鏈式反應-PCR的模板(由中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所鼠疫室提供)，表達質粒pET-32a(+)和感受態菌株E.coliBL21(DE3)分別購自Novagen和TaKaRa公司。……