高效液相色譜法測定骨刺丸中歐前胡素含量

李學紅，鞏長芹，周利章

（山東省臨沂市藥品檢驗所，山東 臨沂 276001）

骨刺丸[1]由制川烏、制草烏、制天南星、秦艽、白芷、當歸、甘草、紅花等12味藥組方，具有祛風止痛的功效，用于骨質增生、風濕類關節炎、風濕痛。其中白芷為方中主藥，歐前胡素為其主要有效成分。為進一步提高了該藥質量控制標準，筆者采用高效液相色譜法測定骨刺丸中歐前胡素的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括四元泵、在線脫氣機、柱溫箱、自動進樣器、G1315D 1260DAD VL檢測器（美國Agilent公司）；XS205DU型電子分析天平（梅特勒 －托利多公司）；KQ3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。歐前胡素對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110826－201013，含量以 99．6%計）；骨刺丸（水蜜丸，河北萬歲藥業有限公司，批號分別為 111105，120203，120601）；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果

2．1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：AgilentC18柱（250 mm×4．6mm，5 μm）以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：甲醇 －水（60 ∶40）；流速：1．0 mL ／min；柱溫：35℃；檢測波長：300 nm。理論板數按歐前胡素峰計算應不低于8 000。在此條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

精密稱取歐前胡素對照品5．71 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取續濾液5 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。參考2010年版《中國藥典（一部）》中白芷原藥材的含量測定方法[2]，取本品，研細，取約5 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質量，超聲45 min，放冷，用甲醇補足減失的質量。精密量取續濾液25 mL，蒸干，用甲醇溶解并轉移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按骨刺丸中處方比例精密稱取全方中除白芷外的其他藥材，按供試品溶液的制備方法制備成陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

陰性干擾試驗：按取2．2項下3種溶液適量，擬訂方法測定。結果陰性對照品溶液色譜中在主成分出峰處無干擾峰（見圖1）。

線性關系考察：精密吸取對照品溶液 5．0，8．0，10．0，12．0，15．0，20．0 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以對照品進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝1 966．58X－0．666，r＝0．999 8（n＝6）。結果表明，歐前胡素進樣量在0．028 4～0．113 7 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：取同一對照品溶液，重復進樣5次。結果的RSD為0．15%（n＝5），表明儀器的精密度良好。

重復性試驗：取同一樣品（批號為120601）5份，依法制備供試品溶液，分別進樣測定，計算含量。結果歐前胡素含量的RSD為1．56%（n＝5），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一份供試品溶液（批號為120601），分別于0，1，2，4，8，12，24 h 時進樣測定。結果歐前胡素含量的RSD為1．27%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為120601，含量為0．027 mg／g），精密稱定，共取6份，每份中精密加入歐前胡素對照品溶液，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結果見表1。

表1 歐前胡素加樣回收試驗結果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進行測定，記錄峰面積，按外標法計算含量。結果批號分別為111105，120203，120601 的樣品中歐前胡素含量分別為 0．029，0．026，0．027 mg ／g。

3 討論

通過試驗得知，歐前胡素在300 nm波長處有較大吸收[2]，其他成分在該波長處無干擾，因此選擇300 nm為檢測波長。

在對流動相進行選擇時，考察了甲醇－水、乙腈－水以及兩者的不同比例，結果以甲醇－水（60∶40）為流動相，所得色譜峰峰形較好，陰性無干擾，測定結果準確。

選擇樣品提取方法時，考察了超聲30，45，60 min，熱回流30，45，60 min，結果發現超聲45 min與60 min時結果無明顯差異，熱回流與超聲的結果基本一致，因此選擇超聲45 min提取樣品，操作簡單方便。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：889 －890．

[2]YBZ17512005，國家藥品監督管理局標準（試行）[S]．