高效液相色譜法測定扶胃平膠囊中黃芩苷含量

鄭美善，崔永學(xué)，崔 鉉

（吉林省延邊食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000）

扶胃平膠囊是由黃芪、黨參、丹參、吳茱萸、三七、枳殼、莪術(shù)、黃連等15味藥組方的復(fù)方制劑，具有活血化瘀、祛腐生肌、消腫止痛、止血等功效，主要用于胃、十二指腸潰瘍等癥。本制劑的原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無含量測定方法，為有效控制該制劑的質(zhì)量，現(xiàn)采用高效液相色譜（HPLC）法對方中黃芪所含黃芪苷進(jìn)行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Younglin高效液相色譜儀，Younglin Autochro－2000工作站；CQX25－06型超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司）。黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110715－200514）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；扶胃平膠囊（吉林省敦化市醫(yī)院制劑室自制藥劑，批號20110101，20110102，20110103）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的kormasil C18柱（200 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 －水 －磷酸（47 ∶53 ∶0．2）；檢測波長：280 nm；流速：1 mL ／min；進(jìn)樣量：10 μL，柱溫：35℃。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于2 500。在此色譜條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得對照品溶液。取本品10粒的內(nèi)容物，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性對照試驗(yàn)：取按處方比例及工藝配制缺黃芩的陰性樣品，按供試品溶液制備的方法制備陰性對照品溶液，按上述條件依法測定。結(jié)果表明，在黃芩苷峰位處，陰性對照品溶液無干擾，見圖1。

線性關(guān)系考察：精密量取對照品貯備液（0．201 g／L）0．5，l．0，1．5，2．0，2．5，3 mL，分置 5 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取各對照品溶液10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄HPLC色譜圖，以黃芩苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）、峰面積值為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為Y＝0．000 1X＋0．006 3，r＝0．999 7（n＝6）。結(jié)果表明，黃芩苷在0．201 0 ～1．206 0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取同一對照品溶液10 μL進(jìn)樣測定，重復(fù)操作6次。結(jié)果黃芩苷峰面積積分值RSD為0．8%（n＝6），表明方法精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批供試品溶液（批號為20110101），分別于 0，2，4，6，8 h 時測定，記錄色譜圖。結(jié)果的RSD＝0．8% （n＝5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批供試品6份（批號為20110101），分別精密稱定，按上述供試品溶液制備的方法和色譜條件測定。結(jié)果RSD為0．9%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：密稱取己知含量的樣品（批號為20110101，規(guī)格為 1．05 mg ／粒）0．5 g，精密稱定，共取 6 份，分別精密加入黃芩苷對照品（0．041 9 g ／L）適量，按 2．2 項下方法制備，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

表2 樣品含量測定結(jié)果（mg／粒）

2．4 樣品含量測定

取3個批號的樣品，依法測定，結(jié)果見表2。

3 討論

取樣品1 g，依法操作，對不同超聲時間的提取效果進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲30 min即可。

參照2010年版《中國藥典（一部）》方法，分別用甲醇和70%乙醇，根據(jù)所得色譜峰的情況及回收率測定結(jié)果，確認(rèn)用甲醇提取的分離效果更好。

黃芩為扶胃平膠囊中的主要藥材之一。參考文獻(xiàn)[1]用HPLC法測定扶胃平膠囊中的黃芩的主要成分黃芩苷的含量，出峰時間適宜，陰性對照無干擾，樣品峰形和分離效果好。HPLC法簡便、靈敏、重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于該制劑的含量測定和質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：282．